[PDF] TP 6 : Examen microscopique des micro-organismes /Létat frais

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Université Abou Bakr Belkaid-Tlemcen

Institut des sciences techniques appliquées (ISTA)

Module : Outils analytiques de Microbiologie

Enseignant (e) : Dr CHERIF ANTAR Asma

L1/2019.20202

TP 6 : Examen microscopique des micro-organismes ͬL͛Ġtat frais

Objectif :

*Utiliser le microscope optique et réaliser la mise au point ; *Observation microscopique des micro-organismes ă l͛Ġtat frais.

Introduction :

L͛obserǀation microscopiƋue permet de faire une Ġtude morphologiƋue des micro-

organismes. Elle comprend :

I. Edžamen ă l͛Ġtat frais

II. Examen après coloration

1. Définition :

1.1. Le microscope optique (photonique) :

Figure 3 : microscope optique

1. Les oculaires sont des loupes situĠes prğs de lΖƈil Ƌui

permettent de grossir l'image donnée par l'objectif (le grossissement est de 10).

2. Le porte-oculaires (ou tête binoculaire) permet la

vision binoculaire.

3. Le porte-objectifs (ou revolver) permet d'amener

l'objectif dans l'axe de la préparation.

4. Les objectifs sont des loupes sous forme de lentilles

convergentes. Les grandissements figurent sur les objectifs : x 10, x 40, x 100. Le grossissement total du microscope est donné grâce à la formule suivante : Gt = grandissement de l'objectif x grossissement des oculaires. Ex ͗ pour l͛objectif x40, Gt = 40 x 10 = 400.

5. La potence est la partie rigide qui relie la platine aux

oculaires.

6. La platine est la partie sur laquelle est posée la

préparation : elle est évidée dans sa partie centrale afin de permettre le passage des rayons lumineux. 2

7. Le chariot (ou porte objet) permet de déplacer la préparation.

8. Le condenseur permet de concentrer les rayons de la source lumineuse sur la

préparation.

9. Le diaphragme permet de régler la quantité de lumière qui arrive sur la

préparation à observer.

10. La source lumineuse éclaire la préparation.

11. Le socle est la partie sur laquelle repose le microscope : lourd, robuste et stable.

12/13. Les vis de mise au point : Les vis de commande du chariot permettent de

déplacer la préparation. La vis de commande du condenseur permet de monter ou d'abaisser le condenseur. 12/ La vis macrométrique permet un mouvement rapide de grande amplitude, ǀisible ă lΖƈil nu, pour effectuer les rĠglages grossiers de la mise au point de l'image. 13/ La vis micrométrique permet un mouvement lent, précis, pour effectuer les réglages fins de la mise au point de l'image.

1.2. L͛Ġtat frais : est l͛edžamen microscopiƋue des micro-organismes vivants. Ce type

d͛obserǀation permet d͛apprĠcier par le biais du microscope optique: ¾ La mobilité des bactéries et leur morphologie ; ¾ La morphologie des champignons : levures et moisissures.

1.3. La mobilité bacterienne : il existe deux types de mobilité (figure 2) :

¾ La mobilité polaire : en zigzag qui peut être mono-triche (A), lopho-triche (B) ou amphi- triche (C) ¾ La mobilité péritriche : mouvement assez fluide i.e tous les flagelles vont dans le même sens (D)

Figure 2 : mobilité bacterienne

2. Technique :

1. Etat frais des bactéries :

1.1. partir d͛une culture en milieu liquide :

Déposer sur une lame propre soit le contenu d͛une anse de platine ou une petite goutte ă l͛aide d͛une pipette Pasteur prélevé d͛une culture jeune en bouillon ; Recouǀrir la goutte d͛une lamelle en Ġǀitant d͛enfermer des bulles d͛air ; Ne pas prolonger l͛obserǀation au-delà de 3 à 10 minutes ; 3 Le liquide ne doit pas déborder (sinon jeter la lame et recommencer).

1.2. partir d͛une culture sur milieu solide ͗

DĠposer une gouttelette de l͛eau stĠrile sur la lame ;

Prélever une fraction de colonie sur le milieu de culture gĠlosĠ ă l͛anse de platine ;

Émulsionner très délicatement (afin de ne pas casser les flagelles) de façon à obtenir

une suspension homogène ; Recouǀrir d͛une lamelle en Ġǀitant d͛enfermer des bulles d͛air ; Ne pas prolonger l͛observation au-delà de 3 à 10 minutes ; Le liquide ne doit pas déborder (sinon jeter la lame et recommencer).

1.3. L͛obserǀation :

¾ Les bactéries sont considérées comme mobiles lorsque des trajets très différents sont

observés (déplacement dans toutes les directions).

¾ Une bactĠrie immobile est animĠe de mouǀements d͛agitation normaudž Ƌu͛il ne faut

pas confondre avec la mobilité :

Mouvements browniens : agitation moléculaire.

Mouvement liquidien : entraînent toutes les bactéries dans le même sens et à la même vitesse et ils peuvent apparaitre lors de la pose de la lamelle. ATTENTION ! Une bactérie mobile peut apparaître immobile si les conditions de l͛observation ne sont pas optimales :

¾ Les flagelles ne doivent pas être cassés par la préparation ou détruit par un

instrument trop chaud ; ¾ La bactérie doit proǀenir d͛une culture jeune ;

¾ La tempĠrature de l͛incubation peut aussi aǀoir de l͛influence ͗ certaines bactĠries

immobiles à 37°C sont mobiles à 22°C (Yersinia, Hafnia par exemple). ¾ Il est possible de confirmer la mobilitĠ par l͛ensemencement d͛une gĠlose molle.

2. Observation des champignons :

2.1. Les moisissures : l͛obserǀation des moisissures est rĠalisĠe par la techniƋue dite du

scotch dans le bleu coton : Déposer quelques gouttes de bleu coton sur une lame propre ; Appliquer un ruban adhésif sur une culture de moisissure ;

Coller le ruban adhésif sur la lame ;

2.2. Les levures : elles s'observent entre lame et lamelle comme les bactéries.

¾ Les observations se font à l'objectif 40, oculaire 10 en mettant la lumière au maximum mais en fermant le diaphragme ;

¾ Aprğs obserǀation, jeter l͛Ġtat frais dans un bac contenant un dĠsinfectant ă large

spectre car les bactéries sont vivante. 4 TP 7: Examen microscopique après coloration/Coloration simple

Objectifs :

Réaliser des frottis bactériens ;

Déterminer la morphologie des bacteries et leur mode de groupement après une coloration simple des frottis.

1-Introduction :

L͛identification permet de mettre en Ġǀidence une ou plusieurs propriĠtĠs biochimiques d'une

bactérie. Elle repose sur la morphologie, les caractères enzymatiques et biochimiques.quotesdbs_dbs2.pdfusesText_3

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