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1 ♦ Étude théorique de la chromatographie
1 - 1 - Compléter le texte
La chromatographie est une technique d"analyse pour séparer les constituants d"un mélange ;· les molécules à séparer sont entraînées par un fluide qui peut être un liquide ou un gaz et que l"on
appelle la phase mobile ;· elles interagissent ou au contraire n"interagissent pas avec un support ou matrice qui est fixe (un
solide ou un liquide fixé) que l"on appelle la phase stationnaire : il y a donc une distribution ou partition des composants entre ces deux types de phase ;· le flux du fluide vecteur étant continu, c"est la rétention plus ou moins longue des différentes
molécules sur le support fixe, qui va les séparer les unes des autres.1 - 2 - Compléter le tableau sur les paramètres physico-chimiques
Les paramètres physico-chimiques sur lesquels reposent les principes de séparation sont : Paramètres Type de chromatographie Exemples de domaine d"application la charge électrique échange d"ions· protéines
· polypeptides
· acides aminés
· acides nucléiques
· sucres
la taille et la forme exclusion ou gel de filtration· protéines
· polypeptides
· acides nucléiques
· sucres
· lipides
l"existence de structures particulières qui permettent d"établir des liaisons spécifiques affinité · protéines la polarité et/ou l"hydrophobicité polarité de phase inversée ou phase reverse· protéines
· polypeptides
· acides aminés
· acides nucléiques
· sucres
· acides gras
interactions hydrophobes · protéines LLPP QQSSRREE Techniques biochimiques de contrôle et d'analyse des alimentsL.LOKIEC Page 2 sur 12
1 - 3 - Compléter le tableau sur les différents types de chromatographie
Phase stationnairePrincipe de
séparationCaractéristiques de
la phase stationnairePrincipe de la fixation
et de l"élution liquide partage liquide fixé sur un support inerte (papier, silice...) distribution des composants du mélange à séparer dans les deux phases liquides selon leur coefficient de partage solide adsorption adsorbant solide polaire phénomène de surface : formation de liaisons spécifiques entre les composants et la surface adsorbante adsorption (phase inverse) molécules hydrophobes greffées sur de la silice interactions hydrophobes et élution par diminution de la polarité de la phase mobileéchange
d"ions résine (polymères d"oses) porteuse de groupements chargés négativement ou positivement interactions électrostatiques avec les composants de charge opposée exclusion (filtration sur gel) solide poreux (billes poreuses) les composants de diamètre supérieur à celui des billes du support sont "exclus" et ceux de diamètre inférieur y diffusent et sont freinés affinité support sur lequel est greffée une molécule (le ligand) spécifiquement reconnue par un des composants de l"échantillon à analyser déplacement de l"équilibre de liaison [molécule - ligand greffé] en faveur de l"équilibre [molécule - tierce molécule]1 - 4 - Compléter le tableau Avantages et inconvénients des différents types de chromatographie liquide / solide.
caractéristiques échange d"ions filtration sur gel affinité phase reverse interactions hydrophobes résolution de la séparation moyenne à élevée moyenne àélevée exceptionnelle
élevée pour
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