[PDF] Cours de Chromatographie L3 Pro Synthèse 2 Mo
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Chromatographie
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Chromatographie en Phase Gazeuse CPG
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Titre du projet scientifique
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CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC) I
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La chromatographie
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Chromatographie sur couche mince
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la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP ou HPLC en doit réagir avec aucun des constituants du mélange au cours de la séparation.
Chromatographie
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Chapitre 2 : Chromatographie
Le principe de la chromatographie consiste à entrainer l'échantillons à l'aide d'un éluant. (gazeux ou liquide) appelé phase mobile (PM) qui se déplace au
NOTIONS FONDAMENTALES DE CHROMATOGRAPHIE
La largeur de la bande augmente en longueur au cours du déplacement dans la colonne et cela se répercute dans la largeur du pic du chromatogramme en fonction du
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Les techniques Chromatographiques 1.1. Introduction 1.3. Historique
La chromatographie méthode d'analyse physico-chimique
Présentation PowerPoint
USTO-SNV-Département de Génétique. Cours Méthodes D'analyse Biochimique L3. Dr TALHI
La chromatographie en phase gazeuse (CPG)
Chromatographie gaz-solide (CGS) : C'est une chromatographie d'adsorption : la phase sta- cours de l'analyse : cette méthode est appelée « gradient ».
chapitre ii: chromatographie liquide haute performance (hp
La polarité de la phase stationnaire permet de distinguer deux situations de principe : - si la phase stationnaire est polaire on utilisera une phase mobile
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1: GÉNÉRALITÉS SUR LA CHROMATOGRAPHIE
LA CHROMATOGRAPHIE 1: GÉNÉRALITÉS SUR LA CHROMATOGRAPHIE La chromatographie Elle est utilisée dans divers domaines tels que la chimie fine la parfumerie l’œnologie l’industrie pétrolière la biologie l’industrie des matières plastiques etc
Les méthodes séparatives: la chromatographie
la chromatographie chirale (qui est soit de la CPG soit de la CPL) ; • la chromatographie d'exclusion stérique (CES ou SEC en anglais) ou selon le support de la phase stationnaire : • la chromatographie sur colonne (regroupant notamment HPLC et CPG) ; • la chromatographie planaire (qui recouvre chromatographie sur couche mince et
TECHNIQUES: Principes de la chromatographie - Zysman-Colman
chromatographie 2 Définition La chromatographie est une méthode physique de séparation basée sur les différentes affinités d’un ou plusieurs composés à l’égard de deux phases (stationnaire et mobile) L'échantillon est entraîné par la phase mobile au travers de la phase
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PREMIERE PARTIE NATURE DE LA PHASE STATIONNAIRE MISE AU POINT DES SEPARATIONS THEORIE SIMPLIFIEE chromatographie-chap1-Thierry Brière 3 Procédé de séparation et d’analyse des constituants d’un mélange à l’aide d’un solvant mobile qui les entraîne à travers une phase fixe
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Qui a inventé la chromatographie?
1906 : débuts de la chromatographie 1952 : prix Nobel de chimie aux biochimistes A. J. P Martin et R. L. M. Synge pour leur contribution au développement de la chromatographie moderne.
Quels sont les différents types de phases de la chromatographie ?
On distingue deux types différents selon la polarité de la phase stationnaire et celle de la phase mobile : Chromatographie en phase normale : La phase stationnaire est très polaire (la phase mobile est alors généralement peu polaire), les substances sont alors élués en sens inverse de leur polarité propre.
Quels sont les aspects généraux de la chromatographie sur colonne?
II- Aspects généraux de la chromatographie sur colonne 1- Le processus chromatographique La phase mobile est continuellement introduite sur la colonne L’échantillon est introduit sans arrêter le flux de phase mobile Les solutés se répartissent entre les deux phases.
Quels sont les paramètres chromatographiques?
2-1- Le chromatographe Chaque paramètre chromatographique doit être optimisé pour assurer l’analyse qualitative et quantitative –La phase mobile –La phase stationnaire –Dimension de la colonne –Le volume d’injection –Le traitement de l’échantillon –Le débit de la phase mobile –La température de la colonne –Le détecteur 2-2- Les solvants
Dr BOUTAGHANE.N
Les techniques Chromatographiques
1.1. Introduction
1.2. Définition
La chromatographie, -chimique
mélange (les solutés) par (liquide ou gaz) le (solide ou liquide fixé), grâce à la répartition sélective des solutés entre ces deux phases. Chaque soluté est donc soumis à une force de rétention (exercée par la phase stationnaire) et une force de mobilité (due à la phase mobile).1.3. Historique
La chromatographie est une science très ancienne. Ainsi on trouve la première référence d'un
processus chromatographique dans l'Ancien testament qui fait mention de propriétés adsorptives de certaine variété de bois pour adoucir de l'eau amèreLe terme de chromatographie fut employé pour la première fois par le botaniste russe
Michael Tswett en 1903 pour décrire un procédé de séparation des pigments végétaux
colorés (chlorophylle brute) par passage à carbonate de calcium, et éluééther de pétrole. Il a donné à cette technique le nom chromatographie puisque chroma () en grec, signifie couleur et graphein signifie écrire. De nos jours, ce terme recouvre plus généralement toutes les techniques de séparation de substances en solution par passageCette technique fut quasi-
Edgar Lederer a purifié par la méthode de Tswett la lutéine (Pigment présent dans le jaune
Dr BOUTAGHANE.N
En 1931, la publication de Kuhn et Lederer sur la séparation des isomères du carotène et de reçut le Prix Nobel sur la chromatographie en couche minceVers 1940, Martin et Synge développent la pratique et la théorie de la chromatographie, ils
obtiennent le prix Nobel en 1952.1952: Naissance officielle de la chromatographie phase gaz.
1955 .
Fin des années 60 : Naissance de la chromatographie en phase liquide à haute performance
HPLC.La chromatographie
La multiplicité des procédés utilisés confère à la chromatographie une très grande souplesse.
Les chromatographes actuelles sont pilotés par des logiciels informatiques. Elle est employée à des fins préparatives pour séparer des quantités notables de substances, mais aussi et surtout dans un but analytique ( petite quantité) qualitatif ou quantitatif grâce à la très grande sensibilité des moyens de détection et aux substances étalons.2. Classification des méthodes chromatographiques
Il existe plusieurs variantes de techniques chromatographiques, classées de plusieurs manières
différentes :1- selon la nature des phases (mobile et stationnaire).
2- selon Le procédé opératoire.
3- selon le principe des phénomènes mis-en dans la séparation
2.1. Classification selon la nature physique des phases
Selon la nature de la phase mobile on distingue:
la chromatographie en phase liquide (CPL) la chromatographie en phase gazeuse (CPG) la chromatographie en phase supercritique (CPS) Selon la nature de la phase stationnaire on distingue: la chromatographie liquide/solide (CLS) la chromatographie liquide/liquide (CLL) la chromatographie gaz/solide (CGS) la chromatographie gaz/liquide (CGL).Dr BOUTAGHANE.N
2.2. Selon le support de la chromatographie on distingue:2.2. 1. La chromatographie sur colonne (CC) : la phase stationnaire est contenue dans une
colonne en verre ou en métal2.2. 1. La chromatographie planaire : on distingue deux types
la chromatographie sur papier (CP) : une surface plane de cellulose considérée comme support maintient par imbibition une phase stationnaire liquide.2-la chromatographie sur couche mince (C.C.M) la phase stationnaire est étalée sur
une surface plane (chromatographie planaire) qui peut être en verre en feuille rains de résines échangeuses2.3. Classification selon le principe des phénomènes chromatographiques
La classification des chromatographies peut se faire en fonction des phénomènes ou bien des mécanismes de séparation . Les facteurs qui interviennent dans le partage des moléculesà séparer entre les phases fixe et mobile sont : la solubilité dans un solvant liquide, la taille (la
l totaleChromatographies en phase liquide CPL
Dans ce cas, la phase mobile est un liquide. Selon la nature de la phase stationnaire, on
distingue :Les chromatographies de partage
La chromatographie de partage : -liquide. La phase stationnaire est un liquide fixé sur un support inerte sur le partage du soluté dans les deux phases liquides.Dr BOUTAGHANE.N
chromatographie -diffusion, tamisage moléculaire, gel-filtration ou perméation de gel. La phase stationnaire est un solide poreux : les grosses particules sont exclues de la phase fixe, en revanche, les petites particules incluses diffusent dans les pores du gel. en phase normale liquide-solide. La phase stationnaire est un adsorbant solide polaire. liquide solide dans laquelle la phase stationnaire est apolaire.La phase stationnaire est un échangeur
positivement, exerçant des interactions de type électrostatique avec les solutés ioniques du milieu.La phase stationnaire est un support
macromoléculaire chimiquement inerte, sur lequel est greffé un effecteur qui présente
enzyme-substrat, ligand-récepteur, antigène-anticorps).Dr BOUTAGHANE.N
Chromatographies en phase gazeuse (CPG)
La phase mobile est un gaz appelé gaz vecteur ou encore gaz porteur. On distingue dans ce
cas :La chromatographie gaz-liquide
La chromatographie gaz-solide
stationnaire est un solide adsorbant.En résumé
facteurs suivants, afin de séparer des composés constituant un mélange :Facteur Technique chromatographique
Solubilité dans un solvant liquide Chromatographie de partageTaille et forme
Polarité
Charge électrique
La chromatographie de partage
1. Principe
Cette chromatographie liquide-liquide est fondée sur la répartition différentielle de chacun des
comparable à une extraction liquide-liquide.2. Théorie de la partition
- Saq organique (Sorg appelée " coefficient de partage » ou " coefficient de distribution », est égale àK = [ASorg]/ [ASaq].
phases liquides non miscibles, avec [ASorg]: la concentration en soluté A dans la phase
organique et [ASaq]: la concentration en soluté A dans la phase aqueuse. En général, le soluté
Dr BOUTAGHANE.N
est plus miscible dans le solvant organique que dans le solvant aqueux et K est donc supérieurà 1.
s un système chromatographique est rendue possible par la inerte, migrera lentement, la force de rétention prédominant sur un soluté soluble dans la phase mobile migrera rapidement.3. Rapport frontal
On appelle rapport frontal, RF (ou " référence front », " coefficient de migration »), le
rapport Distance parcourue par le soluté / Distance parcourue par le solvant. Le schéma de la figure montre comment calculer le R F ascendante. Un soluté très soluble dans la phase fixe aura un R F la phase mobile aura un RF élevé et proche de 1.
4. Chromatographie bidimensionnelle
Dans le cas où le mélange contient des solutés de mobilités voisines, on peut augmenter le
pouvoir séparateur en réalisant une chromatographie bidimensionnelle : sur le même , puis une dans une direction perpendiculaire à la première (figure).Dr BOUTAGHANE.N
Figure: Chromatographie liquide-liquide bidimensionnelle5. Solvants
Les deux solvants sont caractérisés par leur différence de polarité et leur non miscibilité.
solvant mobile sera nécessités de la séparation. on1. Terminologie et grandeurs de rétention
Chromatogramme
volume graphique est utilisé à la fois en analyse qualitative et quantitative.Analyse qualitative
Analyse quantitative
des picsDr BOUTAGHANE.N
Figure:
Elution
phase mobile. En chromatographie liquide solide, la phase mobile peut être appelée éluant.
Le temps mort (tm)
Le temps mot tm est le temps mis par un composé non retenu par la phase stationnaire de la phase mobile pour traverser la colonne).Le temps de rétention (tr)
C'est le temps que met le soluté à sortir de la colonne c'est à dire le temps écoulé entre
l'injection et le maximum du pic du composé élué ( . Il est noté tr (en minutes).Le temps de
et peuvent .Le temps de rétention réduit ()
soluté dans la phase stationnaire. tm.Dr BOUTAGHANE.N
Le volume de rétention
Vr de chaque soluté représente le volume de phase mobile et celui correspondant au maximum du pic. Si le débit D est constant,Vr = tr.D.
2. Le Principe de la
Cette technique permet la séparation des molécules en fonction de leur taille et de leur forme . On utilise pour cela des granules de gel poreux. Les grosses molécules (dont le diamètre est supérieur à celui des pores) sont exclues et sont donc éluées les premières, au niveau du volume mort ( Vm). Les petites et moyennes molécules sont éluées plus tardivement, car incluses dans le gel, leur migration est freinée. Les solutés sont donc élués . Il existe une relation linéaire entre le volume illustré schématiquement dans la figure.Figure. : Schéma illustrant le principe de la
Les plus petites molécules peuvent pénétrer dans de nombreux pores, se répartissant entre le gel et la phase mobile, ce qui rend leur trajet plus lent à parcourir et les fait éluer en dernier.Les molécules de taille moyenne peuvent
pénétrer seulement dans quelques pores, la répartition entre le gel et la phase mobile est plus rapide que pour les petites molécules, le trajet parcouru est moins long et elles sont éluées plus rapidement. Finalement, les grosses molécules ne peuvent pénétrer dans les pores du répartition entre la phase mobile et le gel, leur trajet est donc réduit au minimum et elles sontéluées en premier.
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3. Types de gels (les phases stationnaires)
- Gels hydratés (les plus utilisés) : le SéphadexTM (G10 à G200) qui sont des polyosides bactériens de type dextran et le Sépharose par gramme de substance sèche. - Gels permanents : Ce sont des copolymères organiques ou bien des minéraux (silice). Ici,4. Représentation des résultats
- Soit on porte le logarithme de la masse mo comme indiqué dans la figure ci-dessous : log MM = f(Ve).-Soit on porte le logarithme de la masse moléculaire en fonction du KAV, le coefficient de
partage entre la phase liquide et la phase gel : log MM = f(KAV), avec KAV = (Ve Vm) / (Vt Vm) où Vt est le volume total (mesuré en remplissant la colonne totalement exclue). Figure: Graphique du log de la masse moléculaire en fonction du volume éluéLes grosses molécules (dont le diamètre est supérieur à celui des pores) sont exclues et sont
donc toutes éluées les premières, au niveau du volume mort (Vm ou V0). Les petites et
moyennes molécules sont éluées plus tardivement, car incluses dans le gel, leur migration est
gênée. Une molécule totalement incluse sera éluée incluse sera éluée avec un volume V* =
Dr BOUTAGHANE.N
se des masses moléculaires. 5. t = V0 + Vi + Vg, où V0 est le volume mort, c'est-à-
d g est le volume du gel. (de partage) : K. - Si K = 0, le soluté est totalement exclus. - Si 0 < K < 1, le soluté est partielleme - Si K = 1, le soluté est totalement inclus dans le gel. - Si K > 1, le soluté est non seulement inclus, mais aussi adsorbé par le gel.Les chromatographies s
1. phase normale
1.1.Principe
Cette chromatographie liquide-
fixe et la phase liquide mobile. Chacun des solutés est soumis à une force de rétention (par
leur séparation. par lequel des molécules se fixent sur la surface adsorbant, selon divers processus plus ou moins intenses. Le phénomène inverse, parDr BOUTAGHANE.N
1.2.Les adsorbants (les phases stationnaires)
Ce sont des solides très divisés
distinguer : - sodium. détail ultérieurement) ont une faible polarité.1.3. Les solvants
Pour un système chromatographique donné (caractérisé par une phase stationnaire, une
température, une pression et un soluté), le pouvoir éluant dépend de la polarité du solvant. gel depossède un pouvoir éluant élevé, fortement adsorbé, il déplace le soluté. En revanche, un
pouvoir éluant, mais entraînera un soluté apolaire. Le tableau suivant reprend quelques solvants classés dans1.3. Technologie
Sur colonne : ouverte à pression ambiante, en flash chromatographie, à moyenne pression,
en CLHP (chromatographie liquide haute performance ou haute pression). Sur papier : en chromatographie ascendante ou radiale ; dans cette technique, le papier joue le rôle de phase fixe.Sur couche mince : le gel adsorbant (cellulose, silice) est coulé sur une plaque (verre,
aluminium, plastique), mélangé à un liant (plâtre).Dr BOUTAGHANE.N
1.3.La chromatographie sur couche mince (CCM)
1.3.1. Définition et appareillage:
Figure: Schéma d'une chromatographie sur couche mince (CCM). La chromatographie sur couche mince (CCM) repose principalement sur des phénomènes d'adsorption : la phase mobile est un solvant ou un mélange de solvants, qui progresse le longd'une phase stationnaire fixée sur une plaque de verre ou sur une feuille semi-rigide de
matière plastique ou d'aluminium. Après que l'échantillon ait été déposé sur la phase
stationnaire, les substances migrent à une vitesse qui dépend de leur nature et de celle du
solvant. Les principaux éléments d'une séparation chromatographique sur couche mince sont: la cuve chromatographique : un récipient habituellement en verre, de forme variable, fermé par un couvercle étanche.quotesdbs_dbs24.pdfusesText_30[PDF] la chromatographie sur colonne
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