La représentation de Lineweaver-Burk


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PDF ENZYMOLOGIE

Représentation en double inverse Selon lineweaver Burk 1/V en fonction de 1/S Page 21 - A partir de l'équation de Michaélis –Menton - Donner l'équation 

  • Pourquoi utiliser Lineweaver Burk ?

    Le diagramme de Lineweaver-Burk permet, en mesurant la vitesse d'une réaction pour différentes concentrations de substrat, d'identifier Km et Vmax : les données forment une droite sur le graphe, qui intersecte l'axe des abscisses au point -1/Km, et l'axe des ordonnées au point 1/Vmax.

  • C'est quoi Vmax ?

    Vmax est une asymptote, la limite de la vitesse initiale quand [S] tend vers l'infini.

  • L'EQUATION DE MICHAELIS-MENTEN
    L'enzyme est soit sous forme libre E, soit complexé au substrat ES: [ ET ]= [ E] + [ ES]  [ ET ] étant la concentration totale de l'enzyme.  Donc: Km=([ ET ]-[ ES] )[ S]/ [ ES] =[ ET ]-[ S]/ [ ES] -[ S]  d'où [ ES]= [ ET ][ S]/ km + [ S].

  • Comment déterminer km et Vmax ?

    Elle présente deux points intéressants pour l'étude cinétique : La Vmax (vitesse maximum de réaction) et la KM.
    La KM est la concentration en substrat pour laquelle on obtient une vitesse = Vmax/2 .
    Elle s'exprime en molarité.
    Elle correspond à l'inverse de l'affinité de l'enzyme pour son substrat.

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    Comment tracer la courbe de Lineweaver et Burk ?

    Le diagramme de Lineweaver-Burk permet, en mesurant la vitesse d'une réaction pour différentes concentrations de substrat, d'identifier Km et Vmax : les données forment une droite sur le graphe, qui intersecte l'axe des abscisses au point -1/Km, et l'axe des ordonnées au point 1/Vmax.

    Comment déterminer km et Vmax ?

    Le coefficient Km doit être défini ainsi : c'est la concentration en substrat qui conduit à vi=Vmax/2 (sachant que Vmax est une valeur asymptotique).
    . Que l'on peut énoncer aussi ainsi : c'est la concentration en substrat qui conduit à un taux de saturation de 50% de l'enzyme.

    Comment tracer la courbe de Michaelis ?

    C'est une enzyme dite michaelienne : un substrat S se lie avec l'enzyme E pour donner un intermédiaire ES, qui se dissocie pour donner un produit P avec régénération de l'enzyme E.










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