Protocole d 'extraction de l 'ADN

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Extraction & observation d’ADN

Atelier d’extraction d’ADN- 2020 - Page 1 Extraction & observation d’ADN L’ADN est présent partout dans toutes les cellules vivantes Il est le même partout dans toutes les cellules les nôtres les cellules animales ou végétales ! Vu qu’il est le même partout et bien qu’il soit microscopique il est facile de l’isoler à

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Extraction d’ADN PCR et séquençage de l’ADN

Prélèvement de 10 à 30 ml de sang dans un tube contenant un anticoagulant (ex EDTA) Eclatement des globules rouges par une solution hypotonique Récupération des globules blancs par centrifugation Préparation du lysat cellulaire en utilisant la solution de lyse (détergent comme le SDS ou sarcosyl + Protéinase K) Cette étape permet la libération

PDF	Extraction de l’ADN Ce document décrit la procédure à suivre lors d’une demande de service pour de l’extraction d’ADN Les instructions détaillées pour la préparation la soumission d’échantillons et les exigences d’envoi sont fournies

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0802005 f20 (Sang) Extraction de lADN à partir du sang

Le but de ce document est de définir les procédures normalisées à suivre pour les banques du RCBT lors de l’extraction de l’ADN des cellules blanches du sang obtenues à partir de 5 à 10 ml d’un échantillon de sang total (EDTA ou ACD) utilisant la méthode au phénol/chloroforme (solvant organique)

Comment extraire l’ADN génomique ?
Stéphane Benedit1et Pierre Barret2 Résumé. L’extraction d’ADN génomique à partir d’une faible quantité de matériel végétal est couramment réalisée à l’aide de kits commerciaux qui ont pour avantage la rapidité, la reproductivité et l’absence d’utilisation de solvants toxiques.
Comment faire une extraction d’ADN ?
Protocole d’extraction d’ADN Prélèvement de 10 à 30 ml de sang dans un tube contenant un anticoagulant (ex. EDTA). Récupération des globules blancs par centrifugation. Préparation du lysat cellulaire en utilisant la solution de lyse (détergent comme le SDS ou sarcosyl + Protéinase K).
Où se trouve l'ADN dans la cellule ?
L’ADN est présent partout, dans toutes les cellules vivantes. Il est le même partout, dans toutes les cellules, les nôtres, les cellules animales ou végétales ! Vu qu’il est le même partout et bien qu’il soit microscopique, il est facile de l’isoler à partir d’un très grand nombre de cellules.
Qu'est-ce que l'extraction de l’ADN ?
Extraction de l’ADN L’extraction de l’ ADN (acide désoxyribonucléique) est une technique qui sole i de l’ADN à partir d’une cellule en quantité et en qualité suffisante pour permettre so n analyse.

4. Protocole d’extraction d’ADN

Prélèvement de 10 à 30 ml de sang dans un tube contenant un anticoagulant (ex. EDTA). Eclatement des globules rouges par une solution hypotonique Récupération des globules blancs par centrifugation. Préparation du lysat cellulaire en utilisant la solution de lyse (détergent comme le SDS ou sarcosyl + Protéinase K). Cette étape permet la libération

II. Réaction de Polymérisation en Chaîne "PCR"

La synthèse et le séquençage d’ADN ont permis l’émergence d’une méthode d’amplification de l’ADN appelée PCR (Polymerase Chain Reaction), à partir d’un gène (ou fragment) spécifique, de grande quantité d’ADN sont obtenues in vitro. L’ADN polymérase copiant jusqu'à un milliard de fois cette région cible « quantité suffisante pour être révélée ». univ.ency-education.com

Limite :

Taille : on ne peut amplifier que des petits fragments (taille inférieure à 2 kb) Connaissance d’une partie de l’ADN à amplifier (pour l’amorce) ADN pol thermorésistante est dépourvue de la fonction proof-reading d’où un risque d’erreur. Amplification parasite : mauvaise hybridation et contamination. univ.ency-education.com

Applications :

Génération de sondes Recherche de mutations RT-PCR : étude des ARN Clonage PCR quantitative PCR en temps réel : quantification précise. univ.ency-education.com

III. Séquençage

Le séquençage de l'ADN, consiste à déterminer l'ordre d'enchaînement des nucléotides d’un fragment d’ADN donné. Le séquençage d'un ADN, c'est-à-dire la détermination de la succession des nucléotides le composant. univ.ency-education.com

2. Méthode de Sanger

Le principe de cette méthode consiste à initier la polymérisation de l’ADN à l'aide d'un petit oligonucléotide (amorce) complémentaire à une partie du fragment d’ADN à séquencer. L’élongation de l’amorce est réalisée par le fragment de Klenow (une ADN polymérase I dépourvue d’activité exonucléase 5’→3’) et maintenue par des ADN polymérases thermost

Limitations

Si amplification (PCR) avant séquençage: des parties de la séquence du vecteur d’amplification sont retrouvées dans le séquençage Sanger. Erreurs en début de séquence: reconnaissance imparfaite de l’amorce Faible pouvoir de résolution entre séquences qui ne diffèrent en longueur que d’un nucléotide univ.ency-education.com

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