L’analyse quantitative des acides aminés est réalisée par une chromatographie d’échange d’ions avec dérivatisation post colonne par la ninhydrine La séparation des acides aminés sur colonne échangeuse d’ions s’opère grâce à une combinaison de variations du pH et de la force cationique Les produits de la réaction post-colonne
6 Chromatographie d'un mélange d'acides aminés sur résine échangeuse d'ions Sur une colonne d'une résine échangeuse d'anions (pH = 5 ) on dépose 0,5 ml d'une solution renfermant 2 acides aminés: de l'acide glutamique et un acide aminé neutre, chacun s'y trouvant à la concentration de 4 mg/ml On élue d'abord avec de l'eau distillée
Échangeuse d’ions Charge ionique Affinité Structure des protéines Il est rare de pouvoir associer une méthode chromatographique à un seul phénomène 4 Types de chromatographies Chromatographie échangeuse d’ions Chromatographie d’exclusion
1) CHROMATOGRAPHIE SUR ECHANGEUR D’IONS Dans ette Méthode une olonne de hromatographie est remplie d’une résine synthétique contenant des groupements chargés Il existe deux lasses de résines éhangeuses d’ions: - les échangeuses de cations - les éhangeuses d’anions Les acides aminés sont habituellement séparés sur une
3-chromatographie sur résine échangeuse de cations : Excellent procédé qui permet une évaluation qualitative et quantitative des Aa Technique actuellement automatisée Les phases stationnaires utilisée sont des résines échangeuses d’ions synthétiques une phase stationnaire peut contenir soit des
Chromatographie par échange d’ions Charge globale = somme algébrique des charges des chaînes latérales d’acides aminés Point isolélectrique (pI): pH où charge globale nulle pH >pI: charge globale négative pH
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TD ACIDES AMINÉS - fdanieaufreefr
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TECHNIQUES: Principes de la chromatographie
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EXERCICE 2 : Avant de réaliser une manipulation de Biochimie La normalité N d'une solution acide est le nombre de moles d'ions H+ ... 1- Voir cours.
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2-Pour obtenir une meilleure séparation des acides aminés sur la bande quel pH de la solution tampon peut-on choisir ? Page 2. 2 . Chromatographie couche mince
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