Le spectrophotomètre doit être étalonné pour les deux grandeurs mesurées : d'abord en longueur d'onde (λ) et ensuite pour le rapport photométrique (I/I0). dans lequel doivent se situer les résultats de l'étalonnage pour que l'instrument soit considéré conforme à l'application prévue.
Un bon étalonnage du spectrophotomètre est un facteur clé pour obtenir une mesure précise et fiable de la couleur.
Nous prendrons comme exemple le X-RITE MA3, l'un des modèles les plus utilisés aujourd'hui par les fabricants de peinture.
Pour régler la longueur d'onde de la radiation qui va traverser la solution dans le spectrophotomètre, il faut taper la valeur de cette longueur d'onde à l'aide du clavier qui se trouve sur l'appareil.