[PDF] TITRE : Contamination du matériel biologique

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UNIVERSITÉ DU QUÉBEC À CHICOUTIMI

COMITÉ DE GESTION DES RISQUES BIOLOGIQUES (CGRB)

TITRE : Contamination du matériel biologique

AUTEUR(ES) : Marie-Ève Ouellette, biotechnologue. OBJECTIF : Ce POS a pour objectif de vous guider lorsque de le matériel biologique est contaminé par des bactéries, des champignons ou des mycoplasmes.

NIVEAU DE CONFINEMENT : Niveau 1 et 2.

REFERENCE : Lignes directrices en matière de biosécurité en laboratoire, 3 e

édition,

Agence de santé publique du Canada, 2004.

1. Contamination du matériel biologique par des bactéries

Si des flacons contenant des cellules présentent une apparence opaque ou une odeur nauséabonde, ils sont probablement contaminés par des bactéries. La contamination peut provenir de plusieurs sources : air, milieu contaminé, incubateur contaminé, solution contaminée, manipulation en environnement non aseptique, etc. Dans un premier temps, jeter tous les flacons de cellules contaminées sans les ouvrir dans un sac biorisque qui sera autoclavé. Vérifiez les milieux de cultures et toutes les solutions que vous avez utilisées. Si l'une d'elles est trouble, ajouter de l'eau de javel pour 10% final, laisser agir 10 min et jeter à l'évier. Laver rapidement l'incubateur avec du savon doux et rincer à l'eau. Si vous travaillez dans un environnement de niveau 2, laver l'incubateur avec 1 % d'eau de javel et laisser agir 10 minutes. Rincer à l'eau (x 3) et changer l'eau de l'incubateur.

2. Contamination du matériel biologique par des champignons

Si les flacons contenant des cellules présentent des filaments (le plus souvent blancs), ils sont probablement contaminés par des champignons. La contamination peut provenir de plusieurs sources : air, milieu contaminé, incubateur contaminé, solution contaminée, manipulation en environnement non aseptique, etc. Dans un premier temps, jeter tous les flacons de cellules contaminées sans les ouvrir dans un sac biorisque qui sera autoclavé. Vérifiez les milieux de cultures et toutes les solutions que vous avez utilisées.

POS 06-2010

UNIVERSITÉ DU QUÉBEC À CHICOUTIMI

COMITÉ DE GESTION DES RISQUES BIOLOGIQUES (CGRB) Si l'une d'elles est trouble, ajouter de l'eau de javel pour 10% final, laisser agir 10 min et jeter à l'évier. Laver rapidement l'incubateur avec du savon doux et rincer à l'eau. Changer l'eau de l'incubateur (distillée et autoclavée). Il est possible de mettre un peu d'antifongique dans l'eau de l'incubateur, mais renseignez-vous sur les procédures du laboratoire à ce sujet.

3. Contamination du matériel biologique par des mycoplasmes

Les mycoplasmes peuvent contaminer les cellules provenant de muqueuses surtout ainsi que plusieurs lignées cellulaires. La contamination peut causer plusieurs problèmes : ralentissement de la croissance cellulaire, difficulté à transfecter, mauvais résultats de PCR ou RT-PCR, etc. Vérifier leur présence par la coloration au DAPI ou le " kit de détection des mycoplasmes ». Avant d'effectuer l'une ou l'autre de ces manipulations, vous devez en informer le responsable du laboratoire et vous conformer aux méthodes dictées.

Après chaque décongélation de cellules, vous devez procéder à la vérification de la

présence de mycoplasmes. S'il y a contamination, traiter les cellules avec le MRA (mycoplasma removal agent) pour une période de 10 jours avant de les réutiliser pour une expérience. Le masculin est utilisé à titre d'épicène

Dernière mise à jour du document : mai 2010

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