[PDF] Organisation et régulation des canaux sodiques et potassiques





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Le système cardio-vasculaire et sa régulation par le système

voie parasympathique est tr`es court de l'ordre du battement cardiaque (on parle de “coup de frein 2.4.2 Fonctionnement de la pompe et loi de Starling.



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Connaître l'anatomie de l'innervation cardiaque et le fonctionnement de l'arc réflexe cardiaque. • Expliquer la réponse de l'organisme à une augmentation de 



Échangeur Na+/H+ et régulation du pH des myocytes cardiaques

L'activation des systèmes membranaires dépendants du sodium en l'absence de fonctionnement nor- mal de l'ATPase Na+/K+ à la suite de l'ischémie



Chapitre 2 - Une boucle de régulation nerveuse

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exemple de régulation du rythme cardiaque : le cas dune hémorragie

Il y a alors levée de l'inhibition du centre nerveux sympathique : les potentiels d'action véhiculés par le nerf cardiaque vers le cœur sont donc plus fréquents 



Organisation et régulation des canaux sodiques et potassiques

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MODELISATION DE LACTIVITE ELECTRIQUE DU COEUR ET DE

30 oct. 2008 cellule cardiaque pour lesquels on parle de régulation intrinsèque ou ... certains canaux ioniques ayant un fonctionnement aléatoire.



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TROPONINES. Les troponines cardiaques sont des protéines intervenant dans la régulation de la contraction cardiaque. Elles constituent.



LE CŒUR ET LA CIRCULATION SANGUINE

CHAPITRE II : FONCTIONNEMENT DU CŒUR. CHAPITRE III: REGULATION CARDIAQUE. CHAPITRE IV: CIRCULATION DU SANG DANS. LES VAISSEAUX.

Université Pierre et Marie Curie

Ecole doctorale Physiologie, physiopathologie et thérapeutique

Organisation et régulation des canaux

sodiques et potassiques cardiaques par les protéines MAGUK

Par Catherine EICHEL

Thèse de doctorat de Physiologie, physiopathologie et thérapeutique Dirigée par : Pr Stéphane HATEM et Dr Élise BALSE Présentée et soutenue publiquement le 26 septembre 2014

Devant un jury composé de :

Pr Isabelle LIMON Présidente

Pr Patrick BOIS Rapporteur

Dr Grégoire VANDECASTEELE Rapporteur

Dr Isabelle BARÓ Examinatrice

Pr Hugues ABRIEL Examinateur

Table des matières

Liste des abréviations .................................................................................. 5

Introduction .................................................................................................... 7

A. ‡ ...à—" .................................................................................................................................. 7

1. Anatomie et fonction générale .................................................................................................... 7

2. Activités électrique et mécanique cardiaques ...................................................................... 8

3. Domaines membranaires spécialisés des cardiomyocytes .......................................... 13

4. Localisation des canaux ioniques au sein des domaines spécialisés du

sarcolemme des cardiomyocytes .................................................................................................................... 18

B. Propriétés, régulation et trafic des canaux dépendants du potentiel ......... 20

1. Structures et propriétés des canaux dépendants du potentiel sodiques et

potassiques à 6 segments transmembranaires ......................................................................................... 21

2. Synthèse et trafic des canaux ioniques dépendants du potentiel ............................. 24

3. Ancrage et agrégation .................................................................................................................. 28

C. Les MAGUKs ...................................................................................................................... 28

1. La famille des protéines MAGUK............................................................................................. 28

2. La famille des protéines ZO ....................................................................................................... 31

3. La protéine SAP97......................................................................................................................... 33

4. La famille des protéines MAGI ................................................................................................. 36

5. La protéine CASK ........................................................................................................................... 39

D. Organisation et régulation des canaux sodiques NaV1.5 .................................. 41

1. Généralités ....................................................................................................................................... 42

2. Les sous-unités NaVȾ .................................................................................................................... 43

3. Enzymes ............................................................................................................................................ 44

domaines spécialisés du sarcolemme ........................................................................................................... 48

E. Le courant potassique transitoire cardiaque : Ito ............................................... 50

1. Généralités ....................................................................................................................................... 50

2. Bases moléculaires du courant Ito ........................................................................................... 51

3. Régulation du courant Ito ............................................................................................................ 53

F. Contexte et objectifs du travail .................................................................................. 55

Matériel et méthodes ................................................................................. 57

A. Culture cellulaire ............................................................................................................ 57

1. Isolement des cardiomyocytes adultes ................................................................................ 57

2. Les lignées cellulaires .................................................................................................................. 58

B. Transfection et Infection adénovirale .................................................................... 59

1. Transfection..................................................................................................................................... 60

2. Infection adénovirale des cardiomyocytes ......................................................................... 62

C. Construction et infection in vivo par les AAV ....................................................... 62

3. Injection des animaux ................................................................................................................. 65

D. Échocardiographie et électrocardiographie ........................................................ 65

1. Échocardiographie-Doppler ..................................................................................................... 65

2. Électrocardiogramme de surface............................................................................................ 67

E. Immunohistochimie et immunocytochimie ......................................................... 68

1. Préparation des échantillons .................................................................................................... 68

2. Colorations hématoxiline-éosine (HE) et picro-sirius rouge (PS) ............................ 68

3. Immunofluorescence ................................................................................................................... 69

F. Biochimie ........................................................................................................................... 73

1. Extraction de protéines .............................................................................................................. 73

2. Western Blot .................................................................................................................................... 73

3. Biotinylation des protéines de surface ................................................................................. 73

4. Co-immunoprécipitation ............................................................................................................ 74

5. GST-pull down ................................................................................................................................ 75

G. Anticorps ........................................................................................................................... 75

H. Électrophysiologie cellulaire ..................................................................................... 76

1. Enregistrement des courants en configuration cellule entière .................................. 76

2. Enregistrement des courants sodiques en configuration cellule attachée, couplé à

la microscopie haute résolution ...................................................................................................................... 78

Résultats ........................................................................................................ 81

1. Contexte et objectifs ..................................................................................................................... 81

2. Résultats ............................................................................................................................................ 81

3. Discussion......................................................................................................................................... 87

1. Contexte et objectifs ..................................................................................................................... 91

2. Résultats ǣ DzThe MAGUK CASK regulates sodium channels density at the lateral

membrane of cardiomyocyte and prevents their accumulation in T-tubulesdz ............................ 93

3. Résultats complémentaires .................................................................................................... 127

Discussion et perspectives ....................................................................133

A. Résumé des travaux .................................................................................................... 133

B. Discussion ....................................................................................................................... 134

C. Perspectives ................................................................................................................... 140

Bibliographie .............................................................................................145

Annexes ........................................................................................................161

5

AAV : Adeno-associated virus

CACNB : Calcium channel Ⱦ-subunit

CAMKII : Calcium calmodulin kinase II

CARMA : CARD and MAGUK protein

CASK : Calcium/calmodulin dependent

serine/threonine kinase

CaV : Canaux calciques dépendant du

potentiel

CHO : Chinese hamster ovarian

DAG : Di-acyl-glycerol

DLG : Disc large homolog

ECG : Electrocardiogramme

FA : Fibrillation atriale

FAK : Focal adhesion kinase

GFP : Green fluorescent protein

GPDL-1 : Glycerol-3-phosphate

dehydrogenase 1-like

GST : Glutathione-sulfo-transferase

GUK : Guanylate kinase-linked

HCN : Canaux à cations

HEK293 : Human embryonic kidney 293

HRM : High resolution melt

HV : Canaux à protons

ICa : Courant calcique

IDM : Infarctus du myocarde

IK : Courant potassique à rectification

retardée

ILK : Integrin-linked kinase

INa : Courant sodique

IRES : Internal ribosomal entry site

Ito : Courant potassique transitoire

ITR : Inverted terminal repeat

KV : Canaux potassiques dépendant du

potentiel

L27 : Lin2-Lin7

MAGI : MAGUK with inverted orientation

MAGUK : Membrane-associated guanylate

kinase

MEC : Matrice extracellulaire

MPP : Membrane palmitoylated protein

NaV : Canaux sodiques dépendant du

potentiel

PDZ : PSD95-DLG-ZO1

PKA : Protein kinase de type A

PKC : Protein kinase de type C

PSD95 : Post-synaptic density

PTEN : Phosphatase and tensin homolog

RyR2 : Récepteur à la ryanodine de type 2

SAP97 : Synapse-associated protein 97

SERCA : Sarco/endoplasmique réticulum

calcium-ATPase

SH3 : Src homology 3

SICM : Scanning ion conductance

microscropy

SUMO : Small ubiquitin-related modifier

SynCAM : Synaptic cell adhesion molecule

TIRF : Total internal reflection fluorescence

Tubule-T : Tubule transverse

WW : Tryptophane tryptophane

ZO : Zona occludens

6 7

A. ‡ ...à—"

1. Anatomie et fonction générale

septums interauriculaire et interventriculaire qui permettent de séparer respectivement les deux quotesdbs_dbs46.pdfusesText_46
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