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V

ǦRabatǦMAROCFilière SVI - S6

Module de Génétique et Biologie Moléculaire -M21

Taraji loubna

Nakach Imane

Raoui sanae

Lesplasmidesvecteursdeclonage

PRÉSENTÉPAR:TARAJILOUBNA

IMANESANAESANAE

SOMMAIRESOMMAIRE

Définitionduclonage

duGénie

Clonaged'ungènedansunplasmide

DéfinitionduGéniegénétique

dlid unplasmide

Usagedesplasmidesrecombinants

Défi

n d

Référencesbibli hi

Caractéristiquesdesp

lasmidesduclona

Enzymesderestriction

ligase ligase

LeclonageLeclonage

Terme du g recklôn:re

Leterme

estl'o q uià p artirde isolées p ermetd'obteniruneli cellulessimilairesa dérivantd'unseulancêtre.

Clonage(suite)Clonage(suite)

Le g

énétique(ou

in g g unensembledetechni faisant p artie la moléculaire a p ourob desconnaissancesac en

Ilpermet:

d'id en d'isoler detransférerddifidiètôlé d e d g

énéti

LeplasmideLeplasmide

Un désigneenmicrobiologieouen mo unemo d 'ADN del'ADNchromosomique capablede del'ADNchromosomique capablede autonome

Leterme

plasmide autonome

Leterme

plasmide p arlebiolo moléculaire

Joshua

en1952.

Leplasmide(suite)Leplasmide(suite)

Unecellulebactériennepeutencontenir:

lesgrandsplasmides=>unecopie plasmidesartificiels (construits plasmidesartificiels (construits descentaines degènes) centaines

Ontunepetitetaille

à contrôle de réplication relâché

se m ltiplient dansles cell les jsq'à ce qe chaq e se m u les du sélection sitesderestriction sitesderestriction La biotechnologie moderne, fondée sur la manipulation de l'ADN, Le principe du clonage Le principe du clonage

Le principe duclonage est simple. Ilconsiste à

vecteur de clonage. Un vecteur de plasmide bactérien. L'ADN du plasmide est coupé par une enzyme de in vitroau fragment d'ADN

étran

clonée. (Suite)(Suite)Parmi les caractéristiques connus pour être de Ǧils doivent porter des marqueurs génétiques aux antibiotiques ou le gène codant la galactosidase. ils doivent porter un ou plusieurs sites de ils doivent porter un ou plusieurs sites de restriction uniques dans une région qui n'est pas et si possible ils doivent avoir des sites de et si possible

Lesenzymes de restriction sont des

des séquences des séquences de 4 à 8 paires de base appelées " sites de Les sites de restriction sont de courtes séquences Les sites de restriction sont de courtes séquences repétées c dire identiques sur chaque brin lu repétées cest dire identiques sur chaque brin lu de 5' en 3'. Etant donné que l'ADN de chaque (suite)(suite) L'ADN propre de la bactérie est protégée contre l'incision Beaucoup d'enzymes de restriction produisent des fragments

d'ADN à bouts collants le mécanisme est le suivant : Certains fragments à bout franc c'est à direles nucléotides terminaux sont appariés à leur symétrie

extrémité cohésive Si on ajoute un autre extrémité cohésive cohésives, les bases vont

ADN ligase.

D'autres cou

fragments àbouts collants par un enzyme de restriction en un site donné (suite)(suite) Aè ii l él d f d'ADN A pr

él t h è

l i él ec de de leur taille

Après

ajout d On connaît environ 40 enzymes de restriction qui site de restriction Voici parmi site de restriction eux les plus utilisés Alu I L ligase: ligase:

C'est un enzyme qui rétablit une liaison

in vivo,l'ADNligase 5 entre les courts segments du brin d'ADN invitro A t l bt t ié t A umomen 5 ǦOH du brin d'un fragment et le Ǧterminal du brin d'un autre fragment de

Ǧci s'unissent de façon covalente par des

5 propre aux acides nucléiques

Certains enz

5 ' standards d'ADN.

Clonage d'un gène dans un

arles p lasmides:

Actiondel'enzymederestriction

A de l li

Identificationdesplasmidesrecombinés

Usageduclonagevia

plasmidebactérien

ProductiondesvaccinsProductiondesvaccins

le g

ènerecombiné

p rovientdel'a etcodel'antigèneresponsabledel protectrice l immunisationprotectrice

Productiond

d hormones

Apartirde1983,del

humaineproduiteparculture D' autres h telque :l'hormonedecroissance,GRF(GrowthhormonReleasingFactor)desexpériencesouvrentdes desanimauxd'éleva

Foucher.Paris :

agricoleformation

1991,287.(INRAP)

l ld d ansǦ l esǦpquotesdbs_dbs46.pdfusesText_46

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