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1èreSTLBTK-15/10/2015 Page1sur4 TPn°7:ObservationsmacroscopiquesetmicroscopiquesaucoursdelafabricationduyaourtetsuividelafermentationlactiqueCommentévoluel'aspectdulaitaucoursdelafabricationduyaourt?Lafloremicrobienneduyaourtévolue-t-elle?Pourquoilelaitcoagule-t-ilaucoursdesafabrication?Leyaourtest-ilplusacidequelelait?Contexte:Julieestpressée.Obtiendra-t-elledesyaourtssiellearrêtleurfabricationauboutde1,2,3ou4heures?I. Lafermentationdulaitenyaourtetévolutionmacroscopiqueü MatérieletréactifØ 1fioled'Erlenmeyeravec190mLdelaitUHTØ Pipettesgraduéesstérilesde10mLØ TubesàessaiØ BacàglaceØ 1yaourtØ 1bainthermostatéà44°Cü ModeopératoireØ Agiterfermementleyaourtavantdel'ouvrir.Ø Autemps0h,introduire10mLdeyaourtdans190mLdelaitUHTpréalablementtiédià44°CØ Incuberlafioled'Erlenmeyerdansunbainà44°Cagité.Ø Autemps0h,1h,2h,3het4h:§ Bienhomogénéiserettransférer2fois10mLdans2tubesàessai(lapremièresérieseranotéeM0,M1,M2,M3etM4etladeuxièmeA0,A1,A2,A3etA4).§ Placerlesdifférentsprélèvementsdansunbainàglace.§ Poursuivrelafermentationenlaissantlafioled'Erlenmeyerdanslebainthermostatéagitéjusqu'autemps18h.Stockerensuitelafioleà4°C.ü Compterendu1) Pourquoiplacerà44°Clafioledelaitensemencépar10mLdeyaourt?2) Pourquoiplacerlesdifférentsprélèvementsdansunbaindeglace?3) Décrirelaconsistancecontenuedanslestubes0,1,2,3et4hdefermentation.Commentévoluel'aspectmacroscopiquedulaitfermentéaucoursdutemps?4) Nommerlephénomènephysico-chimiqueobservé.II. ObservationsmicroscopiquesdesbactériesaucoursdelafermentationLesobservationsmicroscopiquesdoiventpermettredecomparerlesconcentrationsenmicroorganismesaucoursdelafermentation.Pourcela,10µLdechaqueprélèvementsontdéposésetétalésdemanièrecomparablesurunelamepuiscoloréaubleudeméthylène.
1èreSTLBTK-15/10/2015 Page2sur4 ü MatérieletréactifØ LesdifférentsprélèvementsM0,M1,M2,M3etM4à0°CØ Ansecalibréede10µLØ Bleudeméthylèneü ModeopératoireØ Dessineruncarréde1cm²surunelameàl'aided'unmarqueur.Ø Étaler10µLdechaqueprélèvementdanschacundecescarrésàl'aidedel'ansecalibréede10µL.Ø Fixerlefrottispuiscolorerleaubleudeméthylène.Ø Déterminerlenombredemoyendemicroorganismesparchamps(notén)enobservant10champs.ü Compterendu5) Établiruntableau donnantpo urchaqueprélèv ement:lade scripti ondesobservationsmicroscopiques,et"n»,lenombremoyendemicroorganismesparchampsmicroscopique.6) Quellessontlesdeuxmorphologiesmicrobiennesobservées?7) Commentévoluequalitativementetquantitativementlafloremicrobienneaucoursdelafermentationduyaourt?III. Suividelafermentationlactiqueaucoursdelafabricationduyaourtü MatérieletréactifØ PrélèvementsM0,M1,M2,M3etM4à0°CØ PrélèvementsA0,A1,A2,A3etA4à0°CØ Fioled'Erlenmeyerdelaitfermentéaprès18hà44°CØ PotsdeyaourtvidesØ PapierpHØ IndicateursdepH:Rougedeméthyle(RM)etbleudebromothymol(BBT)Ø pH-mètre+solutionétalonpH4et7ü Modeopératoire:estimationdupHàl'aidedupapierpHLepapierpHpermetd'estimerlepHaudébut(M0)etàlafin(temps18h)delafermentationdulaitenyaourt.CetintervalledepHpermettradechoisirdesindicateursdepHappropriéspourlasuiteduTP.Ø HomogénéiserlesprélèvementsM0etlafioled'Erlenmeyerdelaitfermentéde18h.Ø Déposerunegoutteàl'aided'uncompte-gouttesurunmorceaudepapierpH.Ø EvaluerlepHdec haqueprél èvemen tencomp arantlacolorationobten ueàcelledel'abaquefourniparlefabriquantdupapierpH.
1èreSTLBTK-15/10/2015 Page3sur4 ü Modeopératoire:estimationdupHàl'aided'indicateurdepHØ HomogénéiserlesprélèvementsM0àM4ainsiquelafioled'Erlenmeyerdelaitfermentéde18h.Ø Transférer2x1mLdechaqueprélèvement(M0àM18)dans2tubesàhémolyse.Ø Ajouter,danschaquetube,àhémolyse2à3gouttesd'indicateurdepH.Pourdéterminerquelsindicateursu tiliser,utiliserl'intervallede pHestiméàl'aided u papierpHetledocument1delapage81devotrelivre.Ø ÉvaluerlepHdechaqueprélèvementencomparantlacolorationobtenueauxcouleursdel'indicateurdepHenfonctiondupH.ü Modeopératoire:estimationdupHàl'aided'unpH-mètreØ HomogénéiserlesprélèvementsA0,A1,A2,A3etA4ainsiquelafioled'Erlenmeyerdelaitfermentéde18h.Ø Pourchaqueprélèvementetlafiole:viderletubecorrespondantdansunpotdeyaourtpuisrincerletubeavecdel'eaudistilléeenrecueillantleseauxderinçage.Ø AjusterlepH-mètreenutilisantlessolutionsétalonspH4et7.Ø ReleverlepHpourchaqueprélèvement.Ø Aprèschaquemesure,rincerl'électrodeau-dessusdubécherdemesure.Ø Conserverl'ensembledesbécherspourledosagevolumétriquedel'acidelactique.èRemarque:l'électrodedepHesttrèsfragile.Ilfautveillerànepaslalaissertroplongtempsdanslesdifférentsprélèvementsrichesenprotéines.ü Compterendu8) Remplirletableauci-dessous:Tempsdefermentation(heure)0123418pHestiméavecpapierpHpHestiméavecl'indicateur1pHestiméavecl'indicateur2pHmesuréparlepH-mètreetcorrigé**Remarque:onadmettraunecorrectionde-0,15surlepHcarleprélèvementaétédiluéavecl'eauderinçagecequifausselerésultat.9) ListerlesavantagesetlesinconvénientspourchaqueméthodedemesuredupH.10) CommentévoluelepHaucoursdelafabricationduyaourt?11) Expliquercetteévolution.
1èreSTLBTK-15/10/2015 Page4sur4 IV. Dosagedel'acidelactiqueparvolumétrieL'acidelactiqueproduitlorsdelafabricationduyaourtestdoséparvolumétrieenutilisantunesolutiond'hydroxydedesodium(NaOH)deconcentrationexacteetconnud'environ0,1mol.L-1.L'équationdelaréactionchimiqueestlasuivante:CH3-CHOH-COOH+HO-èCH3-CHOH-COO-+H2Oü MatérieletréactifØ PrélèvementsA0,A1,A2,A3,A4etA18obtenusàl'issuedesmesuresaupH-mètreØ BuretteØ Bécher25mLØ PhénolphtaléineØ Fiolesd'Erlenmeyerde250mLØ SolutionNaOHétalonnéeà0,1mol.L-1ü ModeopératoireØ Transvaserlecontenudechaquepotdeyaourtenfioled'Erlenmeyerde250mL.Ø Rinceretrecueillirleseauxderinçage.Ø Ajouter4gouttesdephénolphtaléine.Ø RemplirlaburettedeNaOHàl'aidedubécher.Ø Doserchaqueprélèvementjusqu'àvirageaurosepersistantpendantaumoins10secondes.èATTENTION:UNEGOUTTESUFFITPOURPERMETTRELAPERSISTANCEDELACOLORATION.N'ALLEZDONCPASTROPVITEETFAITESDUGOUTTEÀGOUTTE!!ü Compterendu(Cf.FM2)12) Établiruntableauder ésultatsdo nnantlevolumeéqu ivalentdeNaOHpourchaqueprélèvement.13) Schématiserlemodeopératoire.14) Pourquoiest-ilutilederincerlespotsdeyaourtetderécupérerleseauxderinçage?15) CommentévoluelevolumeéquivalententreleprélèvementA0etleA18?Quemontrecetteévolution?16) Calculerlesdifférentesconcentrationsenacidelactiqueρ(acidelactiquedslaitfermentéA0àA18)eng.L-1avec2chiffressignificatifs,enétablissant:§ l'équationauxgrandeurs,§ l'équationauxunités§ l'équationauxvaleursnumériques.Donnée:M(acidelactique)=90g.mol-117) Commentévoluelaconcentrationenacidelactiqueaucoursdelafermentation?18) Quelleestl'originedecetteévolution?
quotesdbs_dbs27.pdfusesText_33[PDF] microbiologie medicale pdf
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