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THESE

Pour l'obtention du Grade de

DOCTEUR DE L'UNIVERSITE DE POITIERS

(Faculté Médecine et Pharmacie) (Diplôme National - Arrêté du 25 mai 2016) Ecole Doctorale : Biosanté, ED n°524 du PRES Limousin Poitou-Charentes Secteur de Recherche : Recherche clinique, innovation thérapeutique, santé publique

Présentée par :

Audrey VOISIN

Développement d'un modèle cellulaire de la DMLA à partir de cellules de patients pour étudier la physiopathologie de la maladie

Directeurs de Thèse : Pr Afsaneh Gaillard & Pr Nicolas Leveziel

Soutenue le Jeudi 09 Novembre 2017

devant la Commission d'Examen JURY Dr Vasiliki Kalatzis IMN, INSERM U844, Montpellier Rapporteur Dr Marina Yefimova Académie des Sciences de Russie Rapporteur Dr Xavier Nissan ISTEM, INSERM U861, Evry Membre Dr Pierre Voisin STIM, CNRS-ERL 7368, Poitiers Membre Pr Afsaneh Gaillard LNEC, INSERM U1084, Poitiers Membre Pr Nicolas Leveziel LNEC, INSERM U1084, Poitiers Membre

Remerciements

Je tiens à remercier le

Professeur Marina Yefimova et le Docteur

Vasiliki Kalatzis d'avoir accepté d'être les rapporteurs de mon travail de thèse. Je remercie également le

Docteur Xavier Nissan et le Docteur Pierre Voisin

d'avoir évalué mon travail en tant que membres du jury.

Je remercie le

Professeur Marc Peschanski de m'avoir accueillie pour ma première année de thèse dans l'unité de recherche U-861 ; ainsi que le

Professeur

Mohamed Jaber de m'avoir permis d'intégrer l'unité U-1084 où j'ai réalisé ma deuxième et troisième année de thèse. Merci à Novartis, à la région Poitou-Charentes et au CHU de Poitiers pour leur soutien. Un remerciement particulier au CHU de Poitiers qui me permet aujourd'hui de poursuivre mes recherches même après la thèse. Merci aussi à tous les patients qui ont participé à ce projet. Je tiens à remercier chaleureusement mes deux directeurs de thèse, le Professeur Afsaneh Gaillard et le Professeur Nicolas Leveziel. Je vous remercie du fond du coeur pour la confiance que vous m'avez accordé, votre présence ces 3 dernières années ainsi que votre patience. Tout au long de mon doctorat, je me suis sentie soutenue et écoutée ce qui m'a permis de m'épanouir totalement scientifiquement. J'ai pu réaliser cette thèse dans des conditions idéales et j'ai

énormément appris à vos côtés. J'ai été très honorée de pouvoir travailler avec vous.

Encore merci.

Je souhaite aussi remercier de tout coeur le

Professeur Christelle

Monville de m'avoir accueillie et encadrée pendant ma première année de thèse.

C'est à tes côtés que j'ai commencé ce travail et je ne peux que te remercier pour tout ce

que tu m'as apporté scientifiquement, ainsi que pour ton soutien et ta présence dans ce projet même après mon départ du laboratoire. Je remercie également ma technicienne préférée, ma chère Alexandra. Avant de te rencontrer, je ne connaissais rien aux cellules souches ou à la reprogrammation cellulaire ! Tout ce que je peux savoir à ces sujets aujourd'hui c'est toi qui me l'a appris alors merci pour tout, pour avoir partagé tes connaissances, pour ta gentillesse et ta patience, merci pour ton amitié...

Je souhaite remercier

Florian, Walter et Karim de m'avoir accepté dans leur

équipe

et pour leur sympathie durant ma première année de thèse à Evry ; ainsi que tout le laboratoire I-STEM pour leur accueil, leur gentillesse et leur aide. Je pense particulièrement à Michel, toi que j'ai harcelé de questions diverses et variées, ainsi qu'à Sophie et Yolande pour avoir partagé mes déjeuners. Un grand merci aussi à Déborah et Anaïs. Les filles, je vous kiffe ! Vous avez été mes rayons de soleil durant cette année parisienne, toujours présente scientifiquement... mais surtout pour rigoler ! Un grand merci à mon équipe au sein du LNEC ! Dès mon arrivée, je me suis

sentie à l'aise à vos côtés. Merci à tous pour votre soutien, votre aide et votre bonne

humeur ! Merci à Tristan, je n'ai pas pu travailler longtemps avec toi mais ce fût un réel plaisir, à Sébastien le spécialiste du microscope, à Marie-Laure sans qui personne ne ferait rien, à Maureen pour sa gaieté sans faille et à Anaïs ma partenaire (Oui oui ! On est une équipe à nous deux !). Merci également à

Hammam,

Sarah et Nissrine pour votre gentillesse à mon égard. Je remercie bien sûr chaque personne du laboratoire LNEC pour son aide et sa bonne humeur ces deux dernières années. Vous avez tous d'une façon ou d'un autre participé

à ce travail de thèse alors merci

Emilie, Mejda, Marianne, Laetitia, Josette,

Virginie, Marcello, Nathalie, Konstantin, Pierre-Olivier (Guichet et Fernagut), Christos, Pauline, Tareq, Emile et Emmanuel. Un merci particulier à Valérie, merci pour ces petites discussions du matin, pour ta disponibilité administrative et ta sympathie. Merci aussi à celles qui ont depuis vogué vers de nouveaux horizons

Magdalena, Joanna et Marine.

Je souhaite remercier également

Adriana pour son aide au FACS, Valérie de

l'accueil pour sa bonne humeur, ainsi que

Daniel pour sa gentillesse et son aide pour

le séquençage.

Un merci particulier aux copiiiiiiiiines

Audrey, Adélie, Mathilde, Julie

et Mélina ! Non les filles, je ne vous ai pas oublié... mais il fallait bien un paragraphe entier à vous consacrer ! Au moins ça ! Un grand, un immense, un énorme que dis-je... un gigantesque merci à Sandie et Obélia : qu'aurait été ma thèse sans vous ? Merci les filles pour tous ces fous rires, ces délires, ces soirées inoubliables, merci pour tous ces moments qui m'ont permis de relâcher la pression (car la thèse ça stresse un peu...!). Merci aussi pour votre soutien quand le ciel était un peu plus gris... Plus que des collègues, vous êtes de véritables amies. MERCI. Je remercie également mes meilleurs amis : ma

Constance chérie, mon

Nicolas d'amour et Constantin alias ma Boulette. Depuis plus de 15 ans maintenant vous partagez ma vie, mes joies, mes peines. Même si la distance nous

sépare, vous avez toujours été là pour moi, et moi pour vous. Merci pour tout, vous êtes

ma famille de coeur... Bien entendu, je remercie aussi vos pièces rapportées

Yann et Charline, ainsi que

tous mes amis pour les week-ends détente, les rigolades, les apéros, tout ce qui permet de près ou de loin d'oublier la thèse le temps de quelques heures... Merci à Laura &Julien, Julie & Andres, merci à mes copains de master et à leur moitié(e) Virginie et Rémi, mon super binôme Camille alias Bibi & Céline, Clément & Anne-Sophie, Eléna & Florimond, Sophie & Sofiane. Une mention spéciale à ma Fanny chérie et Thomas. Merci ma pucette pour ton amitié, ta présence et ton soutien, ta gentillesse et ta bonne humeur. Merci à ma belle-famille, merci pour tous ces moments partagés ainsi que pour votre intérêt pour mon travail. Merci à mes beaux-parents

Corinne & Jean-

Marie, et à mes belles-soeurs et beaux-frères Michael & Emilie, Séverine & David, Céline & Sébastien, Emmanuelle alias Manou & Michelle ainsi que Carole-Anne et Julien. Merci aussi à mes neveux et nièces Jason, Kimberley, Clément, Sarah, Dorian, Manon et Noé. Merci à toute ma famille, mes oncles et tantes, mes cousins et cousines... Vous êtes bien trop nombreux pour tous vous citer mais merci. Je souhaite remercier tout particulièrement mer grands-parents,

Mamie & Pitou et Mamie Solange de

m'avoir toujours soutenu.

Merci à mon papa

Robert et à ma maman Isabelle sans qui je ne serais pas qui je suis maintenant. Merci pour votre amour. Depuis mon enfance, vous m'avez

poussé à me dépasser, à viser toujours plus haut et j'espère que vous êtes fiers de moi

aujourd'hui. Merci aussi à mon beau-papa

Bruno, toujours aux petits soins ; et merci

à ma soeur d'amour,

Doriane, mon " bloc » indispensable à mon bonheur.

Merci à ma chienne

Surra d'avoir été près de moi tous les jours et encore pour de nombreuses années je l'espère. Tu ne parles pas notre langage mais notre amour n'a pas besoin de mots. Je ne peux clôturer ces remerciements sans penser à l'amour de ma vie, mon mari Vivien. Merci mon Loulou de me faire rire jour après jour, et d'être aussi présent pour essuyer mes larmes. Merci pour ton soutien, pour toutes ces fois où tu m'as écouté parler de mon projet sans forcément toujours tout comprendre. La thèse n'a pas été de tout repos pour toi non plus mais tu as été près de moi chaque seconde

ces 3 dernières années et, si j'en suis là aujourd'hui, c'est aussi grâce à toi. Merci de

faire de moi la femme la plus heureuse au monde. Je t'aime.

J'espère n'avoir oublié personne.

Je dédie cette thèse à mon grand-père. Papi,

Tu es parti il y a quelques mois maintenant...

Sache que tu resteras toujours près de moi, dans mon coeur et mon esprit. J'ai de la chance d'avoir eu un grand-père tel que toi. J'espère que là où tu es, tu es fier de moi aujourd'hui. Ta petite fille qui t'aime et qui ne t'oubliera jamais. " Le chercheur doit être libre de tenter des expériences audacieuses, de soutenir des théories révolutionnaires, voire paradoxales. Il doit disposer du droit à l'erreur »

Pierre Joliot Curie

Cetravailafaitl'objetde:

Articlesencoursdepublication

Audrey Voisin, Christelle Monville, Alexandra Plancheron, Anaïs Balbous, Afsaneh (2017). Audrey Voisin, Christelle Monville, Alexandra Plancheron, Anaïs Balbous, Afsaneh

Congrès

NeuroimagerieFonctionnelle,Poitiers.

Prix du meilleur poster obtenu dans l'axe "Physiopathologie du développement et du vieillissement». Communication orale(Interview) au près de Macular News, service presse de la

Vulgarisationscientifique

maladieset à quelle échéance?» par l'intermédiaire de l'association Retina France,

Poitiers.

Mars2015:Exposé grand publicparl'intermédiairedela"SemaineduCerveau»au

PalaisdelaDécouverte,Paris.

ARTICLE I "HRPE CELLS DERIVED FROMINDUCED PLURIPOTENTSTEM CELLS BETTER 21
22

GMPc:guanosylemonophosphate

cyclique

GTP:guanosinetriphosphate

H:heavy

H

2O2:Peroxyded'hydrogène

HLA:humanleukocyteantigen

HTRA1:high-temperaturerequirementA

serinepeptidase1

IGF1:insulin-likegrowthfactor-1

IL-1:interleukine1

IL-6:interleukine6

IL-8:interleukine8

IMC:indicedemassecorporelle

InsP3:inositol1,4,5-triphosphate

L:light

LC3:microtubuleassociated

protein1A/1B-lightchain3

LX-PCR:longextension-polymerase

chainreaction

Kb:kilobases

KeV:kiloelectron-volt

Klf4:kruppel-likefactor4

MII:métharhodopsineII

MAC:complexed'attaquemembranaire

MESA:mutli-ethnicstudyof

atherosclerosis

MERTK:myeloid-epithelial-reproductive

tyrosinekinase

MITF:microphtalmia-asociated

transcriptionfactor

MLA:maculopathieliéeàl'âge

MMPS:métalloprotéinasesdelamatrice

NCBI:nationalcenterforbiological

information

NO:monoxyded'azote

Nrf2:nuclearfactorerythroid2-related

factor 0

2Ÿ-:anionsuperoxyde

OCT:tomographieparcohérenceoptique

Oct3/4:octamer-bindingtranscription

factor4

OMS:organisationmondialedelasanté

ONOO -:peroxynitrite OH -:radicalhydroxyle

OTX2:orthodenticlehomeobox2

PBMC:cellulemononucléesusang

périphérique

PBS:tamponphosphatesalin

PEDF:pigmenteptheliumderivedFactor

PFA:paraformaldéhyde

PKC:protéinekinaseC

PLC:phospholipaseC

PINL1:PTEN-inducedputativekinase1

PIP2:phosphatidylinositol-4.5-

biphosphate

PTG:produitsterminauxdelaglycation

RCS:royalcollegeofsurgeron

RPE65:retinalpigmentepithelium-

specific65kDaprotein

RT-qPCR:reversetranscription-

réactionenchaineparpolymérase quantitativeSCARB1:scavengerreceptor classBmember1 23
pigmentédelarétine

SEP:segmentexternedes

photorécepteurs

Shh:sonichedgehog

SNCT:somaticnuclearcellulartransfert

outransfertcellulairedecellule somatique

SSEA-3:stage-specificembryonicantigen3

SSEA-4:stage-specificembryonicantigen4

SVF:sérumdeveaufoetal

TGFβ:transforminggrowthfactorbeta

V-ATPase:vacuolar-typeH-ATPase

VEGF:vascularendothelialgrowth

factor.

VSX2:thepaired-likehomeodomaine

transcriptionfacteur

ZO-1:zonulaoccludens-1

24
25

ETHIQUEETL

LALYSECELLULAIRE

FIGURE29:SCHEMATISATION DES PRINCIPALES STRATEGIESUTILISEES POUR DIFFERENCIER DES CELLULESSOUCHES EN

CELLULESDEL

FIGURE32:A)SCHEMA TRIDIMENSIONNEL D'UNE MITOCHONDRIE COUPE LONGITUDINALEMENT.B)MICROSCOPIE

ELECTRONIQUED

POURL FIGURE34:ANALYSE DE LA MORPHOLOGIE DES MITOCHONDRIES PAR MICROSCOPIE ELECTRONIQUE A TRANSMISSION AU

NIVEAUDECELLULESH

GRAPHIQUE

(B)EN CONDITION CONTROLE OU LORS DE TRAITEMENT AUFE-NTADE24HEURES AU NIVEAU DES FIGURE37:A)RELATIVE AMPLIFICATION DE L'ADNMITOCHONDRIAL DES CELLULES HCSPI-EPRCONTROLE(N=2)ET DE FIGURE38:HYPOTHESE DU DEVELOPPEMENT DE LADMLABASE SUR L'IMPLICATION DES DOMMAGES DE L'ADN DEL

TRAITEMENTSAU

TRAITEMENTAU

FIGURE41:HYPOTHESESUR L'INTERACTION ENTRE LESTRESS OXYDATIF ET DELAPHAGOCYTOSEETSON ROLE DANS LE

DEVELOPPEMENTDELA

CULTURE PROLONGEE DANS DU MILIEU A1OU10%DE SERUM LORS DE DIFFERENTS TRAITEMENTSAUFE-NTA

PENDANT

26
OU A

TABLEAUX:

TABLEAUIII:RECAPITULATIF DES PRINCIPAUX FACTEURS DERISQUES GENETIQUES POUR LADMLA,LEUR ROLE,LEUR

HOMOZYGOTE

ETLES 27

Avant-propos

Grâce au soutien de la région Poitou-Charentes et du CHU de Poitiers, nous avons pu vieillissementetles facteurs responsables de ce phénomène.La troisièmepartie de centraldenotreprojet. Durant ma thèse, nous nous sommes principalement intéressésà l'hypothèse accumulation intracellulairedefer,responsabledela productionimportanted'espèces précédemment été mis en évidence une diminution de l'efficacité de la phagocytose 28
dégénérescence des cellules de larétine (cellules de l'EPR et photorécepteurs)(Kolar,quotesdbs_dbs50.pdfusesText_50

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