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Enzymes de restriction Enzymes de restriction

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enzymes de restriction et électrophorèse en gel d'agarose. Obtenir plusieurs →Augmentation de la production de l'ADN double brin au cours des cycles.



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13‏/02‏/2006 1.2.2 Intérêt des enzymes de restriction de type II . . . . . . . . 21. 1.2 ... Au cours de cette th`ese nous sommes parvenus `a observer en ...



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Les enzymes de restriction sont des endonucléase qui peuvent couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence spécifique (4 à 6 paires de bases) appelée 



Enzymes de restriction

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Au cours du clonage d'un gène il est nécessaire d'obtenir de l'ADN enzymes de restriction ont été caractérisées et elles sont classés en 3 types :.



GÉNÉTIQUE MOLÉCULAIRE

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LE GENIE GENETIQUE ET LE CLONAGE DADN

fragmenter la molécule d'ADN à l'aide d'enzymes de restriction réunis peuvent être liés de façon covalente au cours d'une réaction très efficace ...



ADN plasmidique

de restriction. Termes clés. •. ADN. •. Bactéries E.coli K12. •. Plasmides. •. Résistance aux antibiotiques. •. Enzymes



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Les enzymes de restriction sont des protéines synthétisées par des bactéries pour se protéger des infections de virus (bactériophages) Ces enzymes coupent 



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Au cours du clonage d'un gène il est nécessaire d'obtenir de l'ADN enzymes de restriction ont été caractérisées et elles sont classés en 3 types :



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- Détecter le polymorphisme (exemple : RFLP AFLP) (Voir le cours polymorphisme) - Au cours des étapes du clonage afin d'insérer un fragment d'ADN exogène 

  • Quels sont les enzymes de restriction ?

    Les enzymes de restriction sont issus de bactéries. Leur rôle est de couper l'ADN étranger des virus qui infectent les bactéries, les bactériophages. Ainsi, les enzymes de restriction emp?hent les virus de se multiplier et permettent aux bactéries de survivre.
  • Pourquoi utiliser 2 enzymes de restriction ?

    Pour éviter que l'enzyme de restriction ne coupe l'ADN de son propre génome, la bactérie fabrique aussi une deuxième enzyme appelée méthylase, qui reconnaît également le site de restriction. La méthylase ne coupe pas l'ADN, mais le modifie en lui rajoutant un groupement méthyle sur un ou plusieurs nucléotides du site.
  • Où se trouve les enzymes de restriction ?

    Définition: ADN recombinant
    Les enzymes de restriction sont présentes naturellement chez les bactéries dans lesquelles elles sont utilisées comme moyen de défense contre les infections virales. Lorsqu'un virus infecte une bactérie, il insère son ADN dans la cellule afin de produire plus de copies de lui-même.
  • le choix de l'enzyme ne se fait généralement pas en fonction du plasmide (grace au polylinker). Le choix de l'enzyme dépend donc surtout du gène à isoler Si ce gène est (par exemple) compris entre deux séquences EcoRI, alors tu peux utiliser cette enzyme.

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COURS/TD N°01 :

ENZYMES DE RESTRICTION ET CARTOGRAPHIE

1. ENZYMES DE RESTRICTION

Les enzymes de restriction (ou endonucléases de restriction) sont des enzymes bactériennes qui

Les cellules protègent leur propre ADN des enzymes de restriction en méthylant des nucléotides

aux sites que ces enzymes reconnaissent. x mêmes sites et le plus souvent, il est clivé par les en enzymes de restriction : I, II et III. Les enzymes de restriction de type II sont Ces enzymes sont désignées " Endonucléases de restriction , elles sont capables de reconnaitre et en des sites très spécifiques. Les séquences reconnues par les enzymes de restriction ont le plus souvent des palindromes de

quatre à huit nucléotides à symétrie inversée ; -à-dire que la séquence du premier brin (lue dans le

ĺtoujours ĺ

Les noms des enzymes de restriction commencent par trois lettres indiquant la bactérie qui la HaeI,

HaeII et HaeIII sont trois enzymes de restriction différentes produites par Haemophilus aegyptius).

extrémités dites non cohésives (ou franchese ci-dessous :

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séquence palindromique, ce qui génère des extrémités dites cohésives (ou bouts collants). Par exemple,

de restriction EcoRI reconnaît spécifiquement une séquence GAA

G et A. Ceci

monocaténaire, extrémités : de restriction Pst I reconnaît spécifiquement une séquence CTGCAG et coupe

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Isoschizomères et enzymes compatibles

Les isoschizomères (du grec "iso»: égal, et "skhizein»: fendre) sont des enzymes de restriction qui

proviennent de sources bactériennes différentes, (et qui portent donc des noms différents). Ils ont des

constantes physiques différePar exemple, MboI et Sau-GATC- Bamas un isoschizomère de Sau3A, mais il reconnaît la séquence hexanucléotidique les fragments produits par Sau3A. On dit que BamHI et Sau3A sont des enzymes compatibles car, bien

que ne reconnaissant pas le même site de restriction, elles génèrent des fragments à extrémités cohésives

complémentaires :

2. CARTES DE RESTRICTION

Les enzymes de restriction constituent un outil très sur leurs sites spécifiques et produisent une série de fragments individuellement distincts. Les fragments de restriction forment (figure ci- contre).

La taille des fragments produits par digestion avec une enzyme déterminée correspond exactement

à la distance qui sépare les sites spécifiques de cette enzyme de fragments produits par plusieurs enzymes, utilisées séparément ou de façon combinénts dans la molécule originale. de la détermination génome en entier.

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Exemple : Soit une mo

enzymes différentes (seules et en combinaison) a donné les fragments de restriction suivants :

BamHI EcoRI PstI

BamHI +

EcoRI

BamHI +

PstI

EcoRI +

PstI

BamHI +

EcoRI +

PstI

Taille

des fragments générés (kb)

14 12 8 11 8 7 6

1 3 7 3 6 5 5

1 1 3 3

1 permet restriction :

ADN déduite

obtenus après digestion par des enzymes de restriction.

Dans cet exemple, une première digestion

de restriction pour cette enzyme, mais rien dans la molécule de 17 Kb digérée. Une digestion combinée par les enzymes 1 et 2 donne les segments de 6 et 8 Kb intacts, le segment de 3 Kb est clivé, ceci montre que fragments séquence étudiée, la digestion par

2, le fragment de 3 Kb doit se situer au

2 (RE2) est plus proche de fragment de 6

peut avoir deux fragments de 7 et 10 Kb

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Vérification :

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