[PDF] Mesure de lactivité enzymatique
Mesure de l'activité enzymatique ? Il est difficile de mesurer la quantité d'enzyme en unités de masse ou de concentration molaire
[PDF] 221- Notion vitesse enzymatique
La concentration d'activité catalytique correspond au nombre de mole de substrat (S) transformé par seconde par un litre de solution enzymatique La mesure d'
[PDF] 6-Activité enzymatique (Biochimistes)pdf
l'activité enzymatique est influencée à la fois par des propriétés spécifiques à l'enzyme (concentrations des substrats activateurs et inhibiteurs) et par
[PDF] Méthodes de mesure des activités enzymatiques - Remedeorg
La vitesse de la réaction enzymatique étant assimilée à la quantité d'enzyme il est possible de parler de concentration d'activité catalytique soit en unités
[PDF] Cinétique enzymatique - Faculté de Médecine dOran
modulation de l'activité enzymatique a pour but de déterminer les vitesses des réactions que l'enzyme catalyse et à mesurer son Formule d'HENRI:
[PDF] ENZYMOLOGIE
l'activité enzymatique L' inhibiteur est une substance qui inactive l' enzyme Il existe deux principaux types d'inhibition:
[PDF] cour dENZYMOLOGIE 2018FINALpdf
L'activité catalytique des enzymes de ce type est largement influencée par le pH 1 2 2 Catalyse par covalence (aussi appelée catalyse nucléophile) : elle
[PDF] TD1 ENZYMOLOGIEpdf
(pH 75 est le pH optimum de l'enzyme) 3-Calcul de l'activité enzymatique de la LDH en UI/Litre ; on applique la même formule que l'exercice 1
[PDF] Dosage denzyme ou détermination de la concentration dactivité
La concentration d'activité catalytique (b) est la quantité de substrat transformé par unité de temps et par litre de solution d'enzyme = = é
[PDF] Mesure de lactivité enzymatique
L'activité d'une enzyme se mesure : 1 Soit par la vitesse de disparition d'un substrat 2 Soit par la vitesse d'apparition d'
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La vitesse de la réaction enzymatique étant assimilée à la quantité d'enzyme il est possible de parler de concentration d'activité catalytique soit en unités
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1 Définir l'activité catalytique d'une enzyme en UI et en katal ? 2 Sachant que la variation d'absorbance est de 360 /min calculer l'activité de cette
TD_enzymo+correction by BEN CHIR - Issuu
1 août 2012 · mL-1 : le katal est la quantité d'enzyme qui catalyse la transformation de 1 mole de substrat par seconde donc la concentration d'activité
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l'activité enzymatique L' inhibiteur est une substance qui inactive l' enzyme Il existe deux principaux types d'inhibition:
Mesures denzymes par mesures dactivité catalytique
coli partiellement purifées (appelées gal-prepx) L'unité de ?-galactosidase (U) est définie par la catalyse de 1 µmol de substrat ONPG par minute à 37°C à
[PDF] Les enzymes
3-Quels substrats peuvent être pris en charge par une enzyme ? ? Cf activité 1 : Etude de la spécificité de la catalyse enzymatique Etude de la ?-
Enzymes Enzymologie Métabolisme Exercices - takweencom
La spécificité (efficacité) enzymatique peut être évaluée par Vmax/Km Enzymes Activité molaire (http://www ac-nice fr/): Une enzyme purifiée de masse molaire
[PDF] Cinétique enzymatique - Faculté de Médecine dOran
modulation de l'activité enzymatique a pour but de déterminer les vitesses des réactions que l'enzyme catalyse et à mesurer son Formule d'HENRI:
Comment calculer l'activité catalytique ?
7- Calcul de l'activité volumique (ou concentration d'activité ou concentration en enzyme) ou concentration d'activité catalytique en katal par litre d'enzyme (AV = CAC = AEMR / VE (kat/LE), VE étant le volume d'enzyme introduit dans le milieu réactionnel).Comment calculer l'activité d'une enzyme ?
AM = Vmax / nombre de mole d' enzyme. L'enzyme catalyse la transformation de 3 x 10-5 mol de P/min pour 1 litre de milieu réactionnel. Or la concentration de l'enzyme est de 150 mg/ml donc dans 1 litre on a : 150 x 10-6 x 1000 = 0,15 g d'enzyme.Comment calculer l'activité enzymatique en katal ?
internationale (UI), qui est la quantité d'enzyme qui catalyse la transformation de 1 µmole de substrat par minute. 60 IU valent donc 1 µkat. Nombre de moles de substrat transformé par mole d'enzyme par minute. AS = µmol/min /mg de protéine = UI/ mg de protéines.- L'unité enzymatique est liée au katal, unité du Système international de l'activité enzymatique, par la relation : 1 kat = 6 × 107 U.
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ENZYMOLOGIE
MODULE: BIOCHIMIE II
AGB1Pr RabiaBouslamti
2019-2020
PlanCinétique enzymatique
Calcul de l'équation de Michaélis-MentionDétermination graphique de Km et Vmax
(représentation V en fonction de S selon Michaélis-Menton)Représentation en double inverse
Représentation de Eadie-Hofstee
Représentation de Haneset Woolf
Inhibiteurs enzymatiques
Définition
Inhibiteurs irréversibles et réversiblesEquation de Michaélis
E : Concentration en enzyme libre
S : Concentration en substrat
ES: Complexe de Michaélis-Menton
Et : Enzyme totale ( enzyme libre + enzyme
sous forme de ESRappel
Vitesse de la réaction
Elle est définie par la quantité de substrat transformé (dS) par unité de temps (dt) ou la quantité de produit apparu (dP) par unité de temps (dt).
Vitesse d'une réaction enzymatique
(Rappel)Calcul de l'équation de Michaélis
Equation de Michaélis-Menten(1913)
-La concentration de produit doit être négligeable par rapport à celle du substrat pour éviter la réaction inverse ( la réaction inverse ne rentre pas dans le calcul de l'équation de Michaélis) -La concentrationdu complexe ESdoit être constanteau cours du temps.Phase stationnaire :la concentration en ES
constanteVitesse de formation de ES = vitesse de
disparition de ESV= -dS/dt= dP/dt
V= KЇ [ES]
[ES]cst : Vf ES =Vd ESV f ES = k1 [E] [S]
VdES = k -1[ES]+ k2 [ES]
k1 [E] [S]= k -1[ES]+ k2 [ES] k1 [E] [S]= [ES] (k2+ k -1) => [E] [S]/ [ES]= (k2+ k -1)/ k1 on définitKm= (k2+ k -1)/ k1
Km : constante de Michaélis
[E][S]/ [ES] = KmSoit : [Et] la concentration totale de l'enzyme. La concentration libre de l'enzyme sera : [E]= [Et]-[ES]
L'expression de la constante de Michaélisdevient :Km = [E][S]/ [ES] = ([Et]-[ES]) [S]/ [ES]
= ([Et] [S]/ [ES]) -([ES] [S]/ [ES])= ([Et] [S]/ [ES]) -[S] => Km+ [S]= ([Et] [S]/ [ES] [ES]= [Et] [S]/ (Km+[S]) Or, la vitesse de la réaction enzymatique est égale à :V= k2 [ES] , en remplaçant[ES] :
V= k2 [Et] [S]/ (Km+[S])
Si on utilise une concentration illimitée de S par rapport à Enzyme, on peut considérer que ES = Et etVmax= k2 [Et]
d'où on tire : Km:Km est égale à la concentration de substrat à laquelle la vitesse de la réaction est égale à la moitié de la vitesse maximum Vmax.
V = Vmax/2, alors [S] = Km.
La constante de MichaelisKm est une caractéristique fondamentale très utile d'un couple enzyme-substrat.
Km est une fonction complexe des constantes k1, k-1 et k2.Affinité de l'enzyme :
Km est l'inverse de l'affinité de l'enzyme pour le substrat.Plus la valeur de Km est basse, plus l'affinité de l'enzyme pour le substrat est élevée.
Km/affinité
Km bas :
¾l'enzyme a une grande affinité pour substrat¾l'enzyme devient donc rapidement saturé
¾l'enzyme est donc peu influencé par les changements de concentrations.Km élevé :
¾l'enzyme a une faible affinité pour son substrat ¾l'enzyme devient donc saturé seulement à de fortes concentrations ¾l'enzyme est donc susceptible aux changements de concentrations. RMQVitesse initiale
Pour chaque cinétique, on trace unetangente, à partir de t = 0, correspondant à la plus grande portion "linéaire" (cette estimation visuelle dépend de l'expérimentateur).
Lapente de la tangente à l'originede la cinétique (d[P] / dt) s'appelle lavitesse initialede la réaction enzymatique, vi.
cette vitesse initiale (d[P]/dt= -d[S]/dt) est quasi-constante pendant une certaine duréeDans l'exemple ci-contre, les valeurs de visont :
[S] (mM) vi (µmoles.L-1.min-1)10 0,34
30 0,75
150 1,42
Représentation en double inverse
Selon lineweaverBurk
1/V en fonction de 1/S
-A partir de l'équation de Michaélis-Menton -Donner l'équation dite en double inverse1/V en fonction de 1/S
-Tracer cette courbe et donner les points d'intersection avec l'axe des x et l'axe des yReprésentation en double inverse
Points d'intersection
Axe des x : -1/Km
Axe des Y : 1/Vmax
Pente : Km/Vmax
Avantages
¾On obtient une droite (Linéarité de la courbe de Michaélis) ¾On Détermine avec précision les paramètres de la cinétique enzymatique ( Km et Vmax)¾Nécessite moins de points expérimentaux
Représentation de Eadie-Hofstee
La représentation de Eadie-Hofstee
V= f(V/[S])
Démonter que:
V= -Km x V/[S] + Vm
Points d'intersection
Y: VmX: Vm/Km
Pente : -Km
Représentation de Haneset Woolf
La représentation de Haneset Woolf
[S]/v= f([S]) [S]/v= 1/ Vmx [S] + KM/VmInhibiteurs enzymatiques
Définition
Inhibition irréversible
Inhibition réversible
inhibiteurs compétitifs IC inhibiteurs non compétitifs INC inhibiteurs incompétitifsIICDéfinition
L'inhibiteur est une molécule qui se lie à l'enzyme mais ne subit pas de transformation, il entraine une diminution de l'activité enzymatique.
L' inhibiteur est une substance qui inactive l' enzymeIl existe deux principaux types d'inhibition:
Inhibition réversible des enzymes: l'activité enzymatique peut être retrouvée en enlevant l'inhibiteur
Inhibition irréversible des enzymes: l'inhibiteur lie l'enzyme de manière covalente, inactivant ce dernier de façon irréversible.
Inhibiteurs irréversibles
Ils se lient de façon covalente au site actif de l'enzyme entrainant une inhibition définitive ex: Lapénicillineest un inhibiteur d'une enzyme (la transpeptidase) intervenant dans la synthèse dupeptidoglycane, composant de la paroi desbactéries.Inhibition enzymatique irréversible
pénicillineParoi bactérienne:
Peptidoglycane
La pénicilline empêche la formation d'une liaison entre le tétrapeptideet le pont pentaGly;Structure de la paroi
bactérienneSucresTétrapeptide
Ponts pentaGly PenLes inhibiteurs réversibles
Trois types d'inhibiteurs :
Les inhibiteurs compétitifs : IC
non competitifs:INC incompetitifs: IICInhibition compétitive IC
la liaison de l'inhibiteur, à l'enzyme libre, empêche la liaison du substrat S Enz SEnz IEnz IInhibition compétitive IC
Type d'inhibition le plus rencontrée
Les IC sont des analogues structuraux du substrat S (se fixent sur le même site actif que le substrat)
Inhibiteur et S sont en compétition pour le même site de liaison sur l'enzyme: le site actif P Exemplede IC l'acidemaloniqueet oxaloacétateressemblentà l'acidesucciniqueet inhibentla déhydrogénase de succinatelorsde la réaction:HO2CCH2CH2CO2H
acide succiniqueHO2CCH
CHCO2H
acide fumariqueEnzFAD+Enz-FADH2
HO2CCH2CO2H
acide maloniqueEnzFADSucc
EnzFADMal
l·oxaloacétateestaussi un inhibiteurcompétitif:HO2C-CO-CH2-CO2H
Exemplede IC S: acidesuccinique
P: acidefumarique
Enz.FAD
IC: acidemaloniqueet oxaloacétate
HO2CCH2CH2CO2H
acide succiniqueHO2CCH
CHCO2H
acide fumariqueEnzFAD+Enz-FADH2
HO2CCH2CO2H
acide maloniqueEnzFADSucc
EnzFADMal
l·oxaloacétateestaussi un inhibiteurcompétitif:HO2C-CO-CH2-CO2H
quotesdbs_dbs28.pdfusesText_34[PDF] méthode de dosage enzymatique
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