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CREATINE-KINASE ET ISOENZYMES
De la CK totale : la détermination de l'activité CK sérique totale se fait par cinétique enzymatique. Le principe utilise la déphosphorylation de la
APPLICATIONS DE LA CINETIQUE ENZYMATIQUE
- Calcul de l'AE (activité enzymatique) après réalisation d'un étalon ou Activité enzymatique totale de l'extrait / Activité enzymatique totale de départ.
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Phosphatases acides totales
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Purification des protéines
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Purification des enzymes et mesure de lactivité enzymatique
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16 mai 2020 3.4.1 Calcul de l'activité SOD ... L'activité enzymatique peut être rapportée à la concentration totale en protéines dans le.
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Méthodes de mesure des activités enzymatiques
sont constantes et proportionnelles à la concentration totale en enzyme pour le calcul des activités à partir des variations d'absorbance.
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Mesure de l'activité de l'?-amylase totale : mesure en cinétique enzymatique de l'activité enzymatique sur un substrat chromogène. Différents substrats peuvent
Correction TP 2 SV-D : Méthodes détude des protéines
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A. Principes de base. - l'activité enzymatique est influencée à la fois par des propriétés spécifiques à l'enzyme (concentrations des substrats activateurs
APPLICATIONS DE LA CINETIQUE ENZYMATIQUE
1) Dosage enzymatique : C'est la détermination de l'activité enzymatique maximale et elle est proportionnelle à la concentration totale d'enzyme.
TRAVAUX PRATIQUES de BIOCHIMIE
GENERALITES SUR L'ACTIVITE ENZYMATIQUE . Il faut enfin calculer la concentration de l'étalon dans le tube coloré. Dans le cas d'une.
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L'activité d'une enzyme se mesure : 1 Soit par la vitesse de disparition d'un substrat 2 Soit par la vitesse d'apparition d'
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L'activité enzymatique se mesure par la vitesse de la réaction de transformation sont constantes et proportionnelles à la concentration totale en enzyme
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1 août 2012 · c) Calcul de la concentration d'activité enzymatique – En UI mL-1 : l'unité internationale est la quantité d'enzyme qui catalyse la
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— Si on divise la vitesse par la concentration massique d'enzyme en g/L on obtient l'activité spécifique en mol de substrat transformé par litre de milieu
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Comment calculer l'activité enzymatique totale ?
L'activité enzymatique se mesure par la vitesse de la réaction de transformation du substrat S en produit P : S ? P (fig. 1).Comment calculer l'activité totale ?
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AM = Vmax / nombre de mole d' enzyme. L'enzyme catalyse la transformation de 3 x 10-5 mol de P/min pour 1 litre de milieu réactionnel. Or la concentration de l'enzyme est de 150 mg/ml donc dans 1 litre on a : 150 x 10-6 x 1000 = 0,15 g d'enzyme.- Une activité enzymatique est l'action d'une enzyme sur des molécules de substrat transformé en un produit de la réaction. Sans entrer dans les détails, une activité enzymatique est réversible et fonctionne dans un sens ou un autre selon les concentrations relatives du substrat et du produit .
DR AKSAS
1Il
2Cette mesure consiste à évaluer la
3L'actiǀitĠ d'une enzyme se mesure
1.d'un
d'apparition d'un3.d'utilisation d'un
4Méthodes de mesure
2 Méthode en point final ou " à deux points »Méthodes cinétiques:
1. 5 Si expérimentales[S]0 et[S]0 la d'enzyme C'est doser d'enzyme 6Conditions opératoires
et maximale a)0et déterminer contient. b) optimale c) [S]( activateurs 7Le substrat
Le Pour Pour Il doitMais Un de on exige que S > 10 Km. 8Température
En , CSFBC(société
C 9La durée de la mesure
AE = Vi en [ ] saturante de substrat
10 10Le Témoin
Dans les méthodes " 2 points »
On Ce que .Dans les méthodes cinétiques
On 11Les unités enzymatiques
katalquantité seconde trop-Launité
internationalequi catalyse minute 6012
Les unités enzymatiques
Nombre
AEMNombre
ASElle enzymatique
13Les unités enzymatiques
Le=
/ Activité enzymatique totale de départ (x Le=
spécifique de départ 14 1 manuelle 1. durée, 2.son 3.Į .15
Méthode en point final ou à " 2 points »
Ladoit
Le lorsque nécessaire¾soit
¾soit
zone0en¾soit.
16Méthode en point final ou à " 2 points »
Faire Ce (Exemple transformer 17Méthode en point final ou à " 2 points »
Exemple:
LetĮ-;
-30. -Dinitro 18 ALATMéthode en point final ou à " 2 points »
C solution 19 2Consiste de
La spécifiqueUV visible
tempsplus 20Cinétique enzymatique en Ultra
LeNAD/NADH NADP/NADPH
employé LaUV NAD+/NADHqui
sont Ces Cette 21Méthodes cinétiques
Dans continu, fixée La réactif) stabilise EllePpermet
22Cinétique enzymatique en Ultra
NAD considérés(réactionAH2 + NAD+ A + NADH,H
AH2 + NADP+ A + NADPH,H
[NAD+ ] > 10 NAD 23Cinétique enzymatique en
NADH NAD+, Si réduction NAD+,la; oxydation deDO. LeNADPHİ -cm- 24
Cinétique enzymatique en
NADH-cm-
NAD+ 25AEMesure
de 340nmAE diminution
de A340nm LDH NADн et NADH2 prĠsentent un pic d'absorbtion ( surtout NAD+) a 260 nm alors on mesure électivement Le NADH2 a 26A 340 nm ( UV) Si on mesure :
27Cinétique enzymatique en Ultra Violet
Condition cte
permet Dans tampon àNADH,H .
Puispyruvate
On La droite 28Lactate déshydrogénase
(EC 1.1.1.27)Lactate = substrat
Pyruvate = produit
NAD+/NADH = cofacteur
29Cinétique enzymatique en
OnDO/min
déclenchée, Les OnT E 3 UI.l-
VTet VE en3
30Cinétique enzymatique en
DO = İ
DO1 İ 1 1=1 İ
DO2 İ 2 2=2 İ
2-1=DO2 İ DO1 İ
0 31Cinétique enzymatique en
= x x 6A 340 nm İNADH,H + = -. cm-.l.
AE en 32VE VT
Réactions enzymatiques couplées
déshydrogénase à NAD+ ou NADP+ et que ni S et ni P ne possèdent de propriétés spectrales, alors on couple la première R à une deuxième, catalysée par une déshydrogénase dont P est le substrat. S P PH2 33E1
NADH,H NAD+
Réactions enzymatiques couplées
La 1ere R principale
La 2eme R indicatrice
34Réactions enzymatiques couplées
Exemple
Acɲ-
AOANADH,H Malate NAD+
35ASAT
Réactions enzymatiques couplées
A correspond NADH,H . Dans 36Réactions enzymatiques couplées
AE1 = AE2
Pour 1. pendant en 2. Dans pourV 37Etude de trois R couplées
on couple la 1ere même couplée à une R indicatrice. S P X XH2 38NADH,H
NAD+ E1 V2 V1 E2 V3 E3R principale
R auxiliaire R indicatrice
Etude de trois R couplées
ExempleCK
RCréatineATP
RATPglucose+
RG+ NADPH,H+
On 39CK hexokinase G6P
Déshydrogénase
Cinétique enzymatique colorimétrique
Exemple: Dosage des phosphatases alcalines (PAL)
p Le Le2;Dosage
enregistrement = İ VT E 6UI-İ 405 - -.
40PALquotesdbs_dbs11.pdfusesText_17
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