ENZYMOLOGIE
Plan. Cinétique enzymatique. ▫ Calcul de l'équation de Michaélis-Mention. ▫ Détermination graphique de Km et Vmax. (représentation V en fonction de S
Correction TD Série 2 (Enzymologie Partie 1) Correction. Exercice 1
Sur le graphique on voit que la réaction fonctionne en vitesse initiale On remarque que Vmax=Vmax app par contre Km est différent de Km apparent. Il ...
TD 6 : Cinétique enzymatique (deuxième partie)
4- Déterminer les 2 paramètres cinétiques Vmax et KM
Cours dEnzymologie
La vitesse d'une réaction enzymatique a été mesurée pour plusieurs concentrations du substrat. Calculer les valeurs de KM et Vmax de cette réaction. [S] (μM) v0
Chapitre 2: Spécificité enzymatique et régulation II-1-Spécificité
La détermination graphique de la Km et de vmax. 1-Pour déterminer les constantes Km déterminer graphiquement les valeurs de. Vmax et de Km plus précisément qu ...
1Étude préliminaire de léquation de Michaelis-Mentens
+ β o`u les constantes α et β sont `a déterminer. 10. Expliquer comment on peut déterminer graphiquement les param`etres KM et vmax `a partir de données.
Travaux Dirigés : série n° 2
Déterminez les paramètres cinétiques (Vmax KM et kcat) et les paramètres cinétiques en présence de l'inhibiteur
Untitled
A partir du graphique reliant concentration plasmatique et temps déterminer la demi-vie terminale . a) Pour déterminer Km et Vmax
ÉPREUVE DEXERCICES DAPPLICATION – Décembre 2015
a) Déterminer par une représentation graphique linéaire (Lineweaver-Burk ou Eadie-Hofstee). KM et Vmax dans le mélange B en précisant les unités des axes des
Exercice 1 EPREUVE DEXERCICES DAPPLICATION 2008-2009
1 – Déterminer graphiquement Km et Vmax (en 10-6mol.min-1.mg-1) du système enzyme- substrat en présence des inhibiteurs A et B. 2 – Déterminer les
2- Modélisation de la vitesse initiale
Pré-requis : savoir définir et déterminer une vitesse initiale (voir chapitre [S]0 +KM. Équation de Michaëlis-Menten. • pour [S]0 = KM : vi = vmax. KM.
ENZYMOLOGIE
Plan. Cinétique enzymatique. ? Calcul de l'équation de Michaélis-Mention. ? Détermination graphique de Km et Vmax. (représentation V en fonction de S
Exercice 3 EPREUVE DEXERCICES DAPPLICATION 2008-2009
1 – Déterminer graphiquement Km et Vmax (en 10 2 – Déterminer les caractéristiques du système enzyme-substrat (Km et Vmax) en l'absence.
Untitled
Vmax = vitesse de catalyse = vitesse de la réaction lorsque toutes Pour déterminer Km il ... Déterminer graphiquement la Vmax et le Km de l'enzyme.
DETERMINATION DE LA VITESSE INITIALE DUNE REACTION
-Déterminer l'équation de cette droite d'étalonnage A = a x n sucre inverti/tube + b. KM ET Vmax D'UNE REACTION ENZYMATIQUE. I. PAR METHODE CINETIQUE.
Enzymologie théorique
Expérimentalement il n'est pas possible de déterminer Vmax ? on ne connaît Km grâce à différents traitements mathématiques
Série TD Enzymologie N°2 Exercice1 La lactase (ß-galactosidase
Donner la signification de Vmax et Km. 4. Déterminer graphiquement les constantes cinétiques de cette enzyme. Exercice 3. Une enzyme catalyse la réaction :
Chapitre V : Cinétique enzymatique 5.1 Phases de la réaction
Km est la concentration de substrat nécessaire pour que l'enzyme atteint (1/2) Vmax. 5.3.1Représentation graphique de l'équation Michaelis-Menten. V = vmax.
Travaux pratiques La cinétique enzymatique et son contrôle
Vmax = vitesse de catalyse = vitesse de la réaction lorsque toutes les enzymes Déterminer graphiquement la Vmax et le Km de l'enzyme.
1 BC 1 1 TP6 enz TP 6 : enzymologie Exercices de cinétique
choisir toujours la courbe en double inverse pour déterminer Km et Vmax. Déduire du tableau les Km et Vmax des deux enzymes sans construction graphique.
[PDF] Correction TD Série 2 (Enzymologie Partie 1) Correction Exercice 1
Vous obtenez une droite pour chaque représentation A partir des deux représentations on détermine Km et Vmax pour les deux enzymes; Pour la Glucokinase
[PDF] ENZYMOLOGIE
Détermination graphique de Km et Vmax (représentation V en fonction de S selon Michaélis-Menton) ? Représentation en double inverse
[PDF] DETERMINATION DE LA VITESSE INITIALE DUNE REACTION
-Déterminer KM et Vmax -Comparer ces valeurs à celles obtenues la semaine précédente sans effecteur Remarque: les valeurs des pentes de chaque courbe de vi
[PDF] Cinétique enzymatique - Faculté de Médecine dOran
La cinétique enzymatique a pour but de déterminer les vitesses des réactions que l'enzyme catalyse et à mesurer son affinité pour les substrats
La cinétique des enzymes michaeliennes et léquation de Michaelis
22 nov 2012 · Pour déterminer les constantes KM et vmax il faut faire une étude cinétique Figure 2 - Vitesses initiales en fonction de la concentration en
Représentations graphiques en enzymologie détermination de Km
21 nov 2019 · Représentation graphique en cinétique enzymatique Linéarisation de l'équation de Michaelis Durée : 6:28Postée : 21 nov 2019
[PDF] Cours dEnzymologie
On définit : ? Vmax : par le point d'intersection de la droite avec l'axe des ordonnés ? KM : par le point d'intersection de la droite avec l'axe des abscisses
[PDF] 2- Modélisation de la vitesse initiale
Pré-requis : savoir définir et déterminer une vitesse initiale (voir chapitre précédent) 1 Influence de la concentration en substrat sur la vitesse
[PDF] Chapitre V : Cinétique enzymatique 51 Phases de la réaction
Km est la concentration de substrat nécessaire pour que l'enzyme atteint (1/2) Vmax 5 3 1Représentation graphique de l'équation Michaelis-Menten V = vmax
[PDF] Mesure de lactivité enzymatique
déterminer la force ionique Vérifier que le tampon ne saturante [S] = 10 Km ( pour atteindre la Vmax) détermination graphique après réalisation
Comment déterminer km et Vmax ?
Il faut connaître la Vmax pour calculer l'activité molaire. Or [S] =1 x 10-2 M >> Km= 1 x 10-5 M (facteur 1000) donc on est en conditions saturantes de S. Cela signifie que la vitesse mesurée à cette concentration en S est la Vmax. Donc Vmax = 3 x10-5 M/min.Comment calculer le km en enzymologie ?
Km est égale à la concentration de substrat à laquelle la vitesse de la réaction est égale à la moitié de la vitesse maximum Vmax. V = Vmax/2, alors [S] = Km. La constante de Michaelis Km est une caractéristique fondamentale très utile d'un couple enzyme-substrat.Comment calculer la vitesse maximale d'une enzyme ?
À tout instant, la vitesse de réaction v est donnée par v=d[P]dt=k2[ES]–k?2[E][P].22 nov. 2012- Km et activité enzymatique
La constante de Michaelis Km est la concentration en substrat pour laquelle la vitesse initiale de la réaction est à la moitié de la vitesse initiale maximale. Cette constante est une concentration, elle a la même unité : mol. L-1.
![ENZYMOLOGIE ENZYMOLOGIE](https://pdfprof.com/Listes/17/24095-17AGB-S2-M6.3-Enzymologie-CRS-Bouslamti.pdf.pdf.jpg)
ENZYMOLOGIE
MODULE: BIOCHIMIE II
AGB1Pr RabiaBouslamti
2019-2020
PlanCinétique enzymatique
Calcul de l'équation de Michaélis-MentionDétermination graphique de Km et Vmax
(représentation V en fonction de S selon Michaélis-Menton)Représentation en double inverse
Représentation de Eadie-Hofstee
Représentation de Haneset Woolf
Inhibiteurs enzymatiques
Définition
Inhibiteurs irréversibles et réversiblesEquation de Michaélis
E : Concentration en enzyme libre
S : Concentration en substrat
ES: Complexe de Michaélis-Menton
Et : Enzyme totale ( enzyme libre + enzyme
sous forme de ESRappel
Vitesse de la réaction
Elle est définie par la quantité de substrat transformé (dS) par unité de temps (dt) ou la quantité de produit apparu (dP) par unité de temps (dt).
Vitesse d'une réaction enzymatique
(Rappel)Calcul de l'équation de Michaélis
Equation de Michaélis-Menten(1913)
-La concentration de produit doit être négligeable par rapport à celle du substrat pour éviter la réaction inverse ( la réaction inverse ne rentre pas dans le calcul de l'équation de Michaélis) -La concentrationdu complexe ESdoit être constanteau cours du temps.Phase stationnaire :la concentration en ES
constanteVitesse de formation de ES = vitesse de
disparition de ESV= -dS/dt= dP/dt
V= KЇ [ES]
[ES]cst : Vf ES =Vd ESV f ES = k1 [E] [S]
VdES = k -1[ES]+ k2 [ES]
k1 [E] [S]= k -1[ES]+ k2 [ES] k1 [E] [S]= [ES] (k2+ k -1) => [E] [S]/ [ES]= (k2+ k -1)/ k1 on définitKm= (k2+ k -1)/ k1
Km : constante de Michaélis
[E][S]/ [ES] = KmSoit : [Et] la concentration totale de l'enzyme. La concentration libre de l'enzyme sera : [E]= [Et]-[ES]
L'expression de la constante de Michaélisdevient :Km = [E][S]/ [ES] = ([Et]-[ES]) [S]/ [ES]
= ([Et] [S]/ [ES]) -([ES] [S]/ [ES])= ([Et] [S]/ [ES]) -[S] => Km+ [S]= ([Et] [S]/ [ES] [ES]= [Et] [S]/ (Km+[S]) Or, la vitesse de la réaction enzymatique est égale à :V= k2 [ES] , en remplaçant[ES] :
V= k2 [Et] [S]/ (Km+[S])
Si on utilise une concentration illimitée de S par rapport à Enzyme, on peut considérer que ES = Et etVmax= k2 [Et]
d'où on tire : Km:Km est égale à la concentration de substrat à laquelle la vitesse de la réaction est égale à la moitié de la vitesse maximum Vmax.
V = Vmax/2, alors [S] = Km.
La constante de MichaelisKm est une caractéristique fondamentale très utile d'un couple enzyme-substrat.
Km est une fonction complexe des constantes k1, k-1 et k2.Affinité de l'enzyme :
Km est l'inverse de l'affinité de l'enzyme pour le substrat.Plus la valeur de Km est basse, plus l'affinité de l'enzyme pour le substrat est élevée.
Km/affinité
Km bas :
¾l'enzyme a une grande affinité pour substrat¾l'enzyme devient donc rapidement saturé
¾l'enzyme est donc peu influencé par les changements de concentrations.Km élevé :
¾l'enzyme a une faible affinité pour son substrat ¾l'enzyme devient donc saturé seulement à de fortes concentrations ¾l'enzyme est donc susceptible aux changements de concentrations. RMQVitesse initiale
Pour chaque cinétique, on trace unetangente, à partir de t = 0, correspondant à la plus grande portion "linéaire" (cette estimation visuelle dépend de l'expérimentateur).
Lapente de la tangente à l'originede la cinétique (d[P] / dt) s'appelle lavitesse initialede la réaction enzymatique, vi.
cette vitesse initiale (d[P]/dt= -d[S]/dt) est quasi-constante pendant une certaine duréeDans l'exemple ci-contre, les valeurs de visont :
[S] (mM) vi (µmoles.L-1.min-1)10 0,34
30 0,75
150 1,42
Représentation en double inverse
Selon lineweaverBurk
1/V en fonction de 1/S
-A partir de l'équation de Michaélis-Menton -Donner l'équation dite en double inverse1/V en fonction de 1/S
-Tracer cette courbe et donner les points d'intersection avec l'axe des x et l'axe des yReprésentation en double inverse
Points d'intersection
Axe des x : -1/Km
Axe des Y : 1/Vmax
Pente : Km/Vmax
Avantages
¾On obtient une droite (Linéarité de la courbe de Michaélis) ¾On Détermine avec précision les paramètres de la cinétique enzymatique ( Km et Vmax)¾Nécessite moins de points expérimentaux
Représentation de Eadie-Hofstee
La représentation de Eadie-Hofstee
V= f(V/[S])
Démonter que:
V= -Km x V/[S] + Vm
Points d'intersection
Y: VmX: Vm/Km
Pente : -Km
Représentation de Haneset Woolf
La représentation de Haneset Woolf
[S]/v= f([S]) [S]/v= 1/ Vmx [S] + KM/VmInhibiteurs enzymatiques
Définition
Inhibition irréversible
Inhibition réversible
inhibiteurs compétitifs IC inhibiteurs non compétitifs INC inhibiteurs incompétitifsIICDéfinition
L'inhibiteur est une molécule qui se lie à l'enzyme mais ne subit pas de transformation, il entraine une diminution de l'activité enzymatique.
L' inhibiteur est une substance qui inactive l' enzymeIl existe deux principaux types d'inhibition:
Inhibition réversible des enzymes: l'activité enzymatique peut être retrouvée en enlevant l'inhibiteur
Inhibition irréversible des enzymes: l'inhibiteur lie l'enzyme de manière covalente, inactivant ce dernier de façon irréversible.
Inhibiteurs irréversibles
Ils se lient de façon covalente au site actif de l'enzyme entrainant une inhibition définitive ex: Lapénicillineest un inhibiteur d'une enzyme (la transpeptidase) intervenant dans la synthèse dupeptidoglycane, composant de la paroi desbactéries.Inhibition enzymatique irréversible
pénicillineParoi bactérienne:
Peptidoglycane
La pénicilline empêche la formation d'une liaison entre le tétrapeptideet le pont pentaGly;Structure de la paroi
bactérienneSucresTétrapeptide
Ponts pentaGly PenLes inhibiteurs réversibles
Trois types d'inhibiteurs :
Les inhibiteurs compétitifs : IC
non competitifs:INC incompetitifs: IICInhibition compétitive IC
la liaison de l'inhibiteur, à l'enzyme libre, empêche la liaison du substrat S Enz SEnz IEnz IInhibition compétitive IC
Type d'inhibition le plus rencontrée
Les IC sont des analogues structuraux du substrat S (se fixent sur le même site actif que le substrat)
Inhibiteur et S sont en compétition pour le même site de liaison sur l'enzyme: le site actif P Exemplede IC l'acidemaloniqueet oxaloacétateressemblentà l'acidesucciniqueet inhibentla déhydrogénase de succinatelorsde la réaction:HO2CCH2CH2CO2H
acide succiniqueHO2CCH
CHCO2H
acide fumariqueEnzFAD+Enz-FADH2
HO2CCH2CO2H
acide maloniqueEnzFADSucc
EnzFADMal
l·oxaloacétateestaussi un inhibiteurcompétitif:HO2C-CO-CH2-CO2H
Exemplede IC S: acidesuccinique
P: acidefumarique
Enz.FAD
IC: acidemaloniqueet oxaloacétate
HO2CCH2CH2CO2H
acide succiniqueHO2CCH
CHCO2H
acide fumariqueEnzFAD+Enz-FADH2
HO2CCH2CO2H
acide maloniqueEnzFADSucc
EnzFADMal
l·oxaloacétateestaussi un inhibiteurcompétitif:HO2C-CO-CH2-CO2H
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