[PDF] PREPARATION DUNE LAME HISTOLOGIQUE


PREPARATION DUNE LAME HISTOLOGIQUE


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Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV

Pour l'étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : TD N°2 : Techniques de préparation des coupes histologiques ...



TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en

ou en ME les coupes examinées sont le fruit de procédures techniques qui requièrent plusieurs étapes successives : fixation



Aperçu des principales colorations histologiques et intérêt pour le Aperçu des principales colorations histologiques et intérêt pour le

→ Les colorations réalisées sur lames accentuent les contrastes pour pouvoir reconnaître différents éléments du tissu. Page 5. LES ETAPES DE LA COLORATION. - 



Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies

Le plus souvent le matériel histologique (= cellules contenues dans un tissu) est fixé



Protocole de détermination des structures histologiques dovaires et

4 juil. 2019 Protocole de détermination des structures histologiques d'ovaires de la plie ... Préparation des lames histologiques ...



Protocole n°82 Coloration de May–Grünwald Giemsa pour coupes

25 mai 2016 pour coupes histologiques. Principe : La coloration selon Pappenheim fait agir successivement deux colorants neutres : le May-Grünwald et le ...



Fiche 1 : Les méthodes dobservation

Ces deux contraintes identifiées la préparation des coupes histologiques se fait en plusieurs étapes avant l'observation au microscope optique. 1/ La 



LIMAGERIE POST MORTEM TRIDIMENSIONNELLE CEREBRALE

17 nov. 2008 Sur les coupes avec une coloration spéciale marquant les ... le protocole du chapitre 3 dans lequel elle remplace la coupe histologique marquée.



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7 mars 2018 Coloration Hémalun/Eosine. Grossissement X. 800. 1. Fig. n° 2 : Lésions histologiques observées sur coupes de branchies d' ...



FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE

prélevée est rigide en présence de paraffine solide dans l'espace intracellulaire de chaque cellule composant le tissu. OU. 7. Confection des coupes 



TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en

diverses (préparation des échantillons) que l'on applique au matériel. L'inclusion a pour but de permettre la réalisation de coupes fines et régulières.



MODULE 1 – Introduction Comment préparer un prélèvement de

comment les tissus biologiques sont traités pour préparer les lames histologiques qui seront observées sous le microscope. Nous voici dans le laboratoire de 



Aperçu des principales colorations histologiques et intérêt pour le

L'inclusion a pour but la réalisation de coupes histologiques. Le milieu d'inclusion le plus utilisé est la paraffine. Comme la paraffine est hydrophobe le.



Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV

1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique. Pour l'étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs 



Préparation des tissus : information générale

1- Préparation et mise en cassette des prélèvements a. Le tissu est acheminé au laboratoire dans un fixateur standard (Formaline. 10% tamponnée). b. La coupe 



Protocole n°82 Coloration de May–Grünwald Giemsa pour coupes

25 mai 2016 Protocole n°82. Coloration de May–Grünwald Giemsa pour coupes histologiques. Principe : La coloration selon Pappenheim fait agir ...



HISTOLOGIE

Figure 1.2 Préparation des coupes histologiques en paraffine. 2.1.4 Coloration. L'observation des coupes directement après leur confection



Guide sur lassurance qualité en anatomopathologie - Phases pré

lames) que l'analyse et les composantes post-analytiques en histologie (entreposage du au laboratoire de pathologie où une préparation particulière ...



Réalisation dune coupe de racines et schéma dhistologie végétale

préparations histologiques de racines jeunes. ? Réalisation d'une coupe de racines coloration au carmin-vert d'iode : protocole. • Réaliser des coupes 



Chapitre II : Méthodes d’étude de la cellule TD N°2

1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus



Les colorations histologiques - Université Paris-Saclay

Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d’obtenir des sections (coupes histologiques) de 3 à 5 microns d’épaisseur Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C) - La plupart des tissus sont transparents



FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE PREPARATION D’UNE LAME

la confection des coupes histologiques comporte alors 3 étapes : - L’étalement : de segments de ruban de paraffine sur une lame de verre contenant un liquide d’étalement tel que l’eau albumineuse - Le collage: les lames de verre sont placées sur une plaque chauffante réglée à une température de 40°C pendant 15 min

Comment faire une coupe histologique ?

La préparation d’une coupe histologique consiste à réaliser des sections, c’est-à-dire des tranches très fines de tissus destinés à être observés par transparence au microscope. Les coupes à congélation présentent certains avantages que la technique en paraffine n’offre pas : la congélation permet une conservation optimale de l’ADN et de l’ARN.

Comment faire des coupes fines dans un tissu biologique ?

Le but est d’éliminer l’eau des tissus et de la remplacer par un milieu qui se solidifie pour permettre la réalisation de coupes fines (4 à 5µm). Pour cela, le tissu biologique doit être inclus dans une matrice dure (paraffine). Les principales étapes de ce processus sont la déshydratation, la clarification et l’imprégnation. Déshydratation

Quelle est la différence entre les colorations spéciales et les histochimiques?

Les colorations spéciales sont réalisées pour préciser des structures ou substances suspectées par le pathologiste lors de son analyse initiale sur les coupes de technique standard. Les techniques histochimiques sont basées sur des réactions biochimiques qui permettent de mettre en évidence

Comment faire des coupes de tissu?

Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C). - La plupart des tissus sont transparents ?Les colorationsréalisées sur lames, accentuent les contrastes pour pouvoir reconnaîtredifférents éléments du tissu. LES ETAPES DE LA COLORATION -Déparaffinage (toluène / xylène - éthanol)

- Faculté de médecine

1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020

1

FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE

- HISTOLOGIQUE -

OBJECTIFS SPECIFIQUES :

¾ Décrire les étapes de

¾ Connaître en détail les techniques histologiques de routine et comprendre le rôle de chaque réactif utilisé

¾ Comprendre la c

MATERIELS

VERRERIES

Lame & Lamelle

cuve de coloration en verre (type Coplin & type Hellendhal)

Cuve de rinçage en verre

Cristallisoir

Bécher

Entonnoir

Erlenmeyer

Compte-goutte Pipette Pasteur

MATERIELS

Microtome

Etuve - Faculté de médecine

1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020

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Plaque chauffante Barres de Leuckart

Microscope photonique

REACTIFS

Formol

Liquide de Bouin

Alcool absolu à 100°

Eau distillée

Xylène

Toluène

Paraffine

Colorants (Hématéine éosine Safran -vert lumière-

Baume de Canada

Nombre de postes : 15 postes par binôme

- Faculté de médecine

1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020

3 - Faculté de médecine

1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020

4

11 ETAPES

1. Prélèvement

Le prélèvement doit se faire aussi délicatement que pos tissulaire. Une fois obtenu, ce prélèvement doit immédiatement être immergé dans un grand volume de liquide fixateur.

2. Fixation

La fixation a pour but la conservation des structures dans un état aussi proche que

possible de leur état vivant, avec arrêt de toutes activités mitotique et enzymatique. Ainsi que

le durcissement de la pièce anatomique. Les liquides fixateurs les plus utilisés en pratique courante sont le formol ou le liquide de Bouin La durée de la fixation varie selon le volume des prélèvements.

3. Déshydratation

fine par la suite sans perdre la structure cellulaire initiale au moment de la rupture de la rations croissantes (de lcool à dilué .

4. Imprégnation

le xylène ou le toluène, solvant intermédiaire

5. Inclusion

Le prélèvement baigne dans de la paraffine fondue (chauffée à 56°C pendant 4h dans une étuve) et qui infiltre alors toutes les cellules.

Remarque :

laboratoires de routine - Faculté de médecine

1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020

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6. Mise en bloc

liquide est coulée dans un petit moule en métal

" Barres de Leuckart ». Après refroidissement (dans un congélateur pendant toute une nuit),

paraffine dur prélevée est rigide en pr cellule composant le tissu. OU

7. Confection des coupes histologiques

Le passage du bloc de paraffine dans un microtome permet de réaliser des sections de 2 à

5 µm disposées en séries ré

- Faculté de médecine

1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020

6 la confection des coupes histologiques comporte alors 3 étapes : - : de segments de ruban de paraffine sur une lame de verre contenant un eau albumineuse. - Le collage : les lames de verre sont placées sur une plaque chauffante, réglée à une température de 40°C, pendant 15 min. - Le séchage de la préparation : en inclinant les lames et en les séchant au moyen de papier buvard absorbant.

8. Déparaffinage

-à-dire plaque chauffante (de 45 à 60°C) périphérique.

Plaque chauffante

9. Réhydratation

50eau distillée.

10. Coloration

constituants tissulaires (noyau, membrane plasmique et cytoplasme).

10-1 Par histochimie :

La coloration se base sur des réactions chimiques connues entre des réactifs de laboratoire (colorants) et des composants des tissus étudiés. Ex1 : coloration hématéine- éosine-safran (HES) est un colorant basique se fixe par affinité aux molécules acides (ADN) permettant de colorer le noyau, de colorer le cytoplasme et le safran se fixe par affinité entre les fibres de collagène. Ex 2 : coloration Bleu Alcian ou du Rouge Mucicarmin : Le mucus présent dans certains tissus peut être coloré par la révélation des mucopolysaccharides acides respectivement en bleu ou en rouge. Ex 3 : coloration à périodique de Schiff (PAS) met en évidence les glucides par un colorant rouge à pourpre. Permettant de mieux visualiser le glycogène ou les mucines contenus dans certaines cellules ou encore les lames basales des épithéliums qui sont riches en glycoprotéines - Faculté de médecine

1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020

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10-2 Par histochimie enzymatique : la distribution tissulaire de certaines enzymes

spécifiques peut être étudiée sur des coupes fraiches en y ajoutant un substrat spécifique de cet enzyme. un produit de réaction primaire, insoluble et pouvant être mis en évidence par une coloration. La plupart des systèmes enzymatiques sont détruits lors de la fixation, enzymatique sont le plus souvent réalisées sur coupes en congélation. Ces techniques permettent de

10-3 Par Immunohistochimie : Des anticorps spécifiques sont utilisés pour venir se

fixer à une molécule (antigène) de la coupe histologique. partir de la protéine purifiée est couplé à:

9 une enzyme (peroxydase) qui catalyse une réaction avec production de couleur

9 un marqueur (fluorophore), le plus souvent fluorescent. On parle alors

à fluorescence.

11. Montage & Observation microscopique

Les coupes colorées sont montées entre lame et lamelle avec une résine synthétique

On obtient, ainsi, une préparation histologique (ou par abus de langage : une lame histologique) prête à être observée au microscope optique.quotesdbs_dbs44.pdfusesText_44
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