Anti-HCV
sérum humain positif pour les Ac anti-VHC; conservateur. Non réactif pour Ag HBs et les anticorps anti-VIH 1 + 2. Précautions d'emploi et mises en garde.
Monolisa™ Anti-HCV PLUS Version 3
Contrôle positif. Sérum humain contenant des anticorps anti-VHC négatif pour l'antigène HBs et pour les anticorps anti VIH-1 et anti VIH-2
Monolisa™ HCV Ag-Ab ULTRA V2
Contrôle positif. Sérum humain contenant des anticorps anti-VHC négatif pour l'antigène HBs et pour les anticorps anti VIH-1 et anti.
Analyses de laboratoire recommandées pour le dépistage de l
15 Dec 2014 le VHC (anti-VHC positif et présence d'ARN du VHC à partir de l'analyse la ... Le délai de détection des anticorps anti-VHC peut varier en ...
Elecsys Anti-HCV II
AHCV 2 Cal2 Calibrateur 2 positif 1 flacon
WHO Prequalification of In Vitro Diagnostics PUBLIC REPORT
Anti-HCV Test. Test de détection des anticorps anti-VHC. Prueba de VHC Diagnostic specificity on anti-HCV negative blood donors. Bioline™ HCV. Reactive.
Diagnostic virologiques des hépatites virales B et C
Résultat: anticorps anti-VHC négatifs. Interprétation: Absence de contact avec le VHC sauf si infection récente avant séroconversion ou immunodépression.
Elecsys Anti-HCV II
A?HCV II Cal2 Calibrateur positif 2 (bouchon noir) 2 godets contenant chacun 1.3 mL: sérum humain
AN16VIR1 - Controle nationale de qualite - Serologie virale
1 Dec 2017 L'échantillon 16VA1 était positif pour les anticorps anti-VHC les anticorps anti-CMV IgG
an04vir1
des Ac anti-CMV de type IgG (négatif) et IgM (négatif) et sur Tableau II - Anticorps anti-VIH : Détail des réponses des participants selon le réactif ...
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Si l'infection est récente la recherche d'anticorps anti-VHC peut être négative en raison de la période de latence entre l'infection et la séroconversion En
[PDF] Virus de lhépatite C (VHC) - Société Française de Microbiologie
Enfin lorsque seuls les anticorps anti-VHC sont présents il n'est habituellement pas possible de différencier une hépatite C ancienne guérie d'un faux positif
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Hépatite C : prise en charge simplifiée chez ladulte
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C'est quoi Anti-hcv ?
Anti-HCV est un test de diagnostic in vitro pour la détermination qualitative des anticorps dirigés contre le virus de l'hépatite C (VHC) dans le sérum et le plasma humains. Cet essai est indiqué comme un outil permettant le diagnostic d'une infection par le VHC.Comment interpréter sérologie hépatite C ?
Si l'ARN du VHC est indétectable, le patient est considéré en réponse virologique soutenue, c'est-à-dire guéri. Si l'ARN du VHC est détectable, le patient doit être orienté vers une prise en charge spécialisée. Les patients doivent être informés de la persistance des anticorps anti-VHC après guérison virologique.Quel est le taux normal de la charge virale VHC ?
Pour le VIH, la charge virale est, élevée à partir de 30.000 UI. Pour l'hépatite C, la charge virale est considérée comme élevée au-delà de 600.000 UI.- Les tests de diagnostic de l'hépatite C
Lorsqu'un médecin suspecte une hépatite C, il demande une recherche d'anticorps anti-VHC (sérologie) à l'aide d'une simple prise de sang : si ce test est positif, cela signifie que la personne a été en contact avec le VHC, mais elle a pu toutefois éliminer le virus spontanément.
Monolisa™ HCV Ag-Ab ULTRA V2
1 plaque -
96 72561
5 plaques -
480 72562
TROUSSE DE DÉPISTAGE COMBINE DES ANTICORPS ANTI-VHC ET DE L'ANTIGENE VIRAL DU VIRUS DE L'HÉPATITE C DANS LE SÉRUM OU LE P LASMAHUMAIN PAR TECHNIQUE IMMUNOENZYMATIQUE
862224 - 2014/09
2 [FR]
Table des Matières
1. UTILISATION PREVUE ........................................................................ ........... 3 2. RESUME ET EXPLICATION DU TEST ............................................................ 3 3. PRINCIPE DU TEST ........................................................................ ............... 3 4. REACTIFS ....................................................................... .............................. 4 5. AVERTISSEMENTS ET MESURE DE PRECAUTION ....................................... 5 6. ECHANTILLONS ....................................................................... ..................... 7 7. MODE OPERATOIRE ....................................................................... .............. 7 8. LIMITES DU TEST ....................................................................... ................ 10 9. CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ................................................ 11 10. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ........................................................... 133 [FR]
1. UTILISATION PREVUE :
Monolisa™ HCV Ag-Ab ULTRA V2 est un test qualitatif immuno-enzymatique pour la mise en évidence de
l'infection par le virus de l'hépatite C (VHC) basé sur la détection des anticorps anti VHC et de l'antigène de
capside dans le sérum ou le plasma humain. Ce test, destiné au dépistage de l'hépatite C, peut être utilisé
par les laboratoires de diagnostic et les banques de sang.2. RESUME ET EXPLICATION DU TEST :
Le virus de l'hépatite C (VHC) est un virus à enveloppe à ARN de sens positif (9,5 kb) appartenant à la
famille des Flaviviridae dont six génotypes majeurs ont été identifiés. Le VHC est reconnu comme la
principale cause des hépatites virales non-A et non-B. L'infection par le VHC se caractérise par une forme
aiguë et une forme chronique qui peut entrainer une cirrhose et des carcinomes hépatocellulaires.
La preuve sérologique de l'infection par le VHC peut être obtenue par des tests de détection d'antigènes et/
ou d'anticorps et/ou d'ARN du VHC. Comparativement à un test de détection des anticorps anti-VHC seul,
l'utilisation d'un test de dépistage combiné d'anticorps anti-VHC et de l'antigène de capside du VHC permet
de réduire la fenêtre sérologique et d'améliorer la détection de l'infection.3. PRINCIPE DU TEST :
Monolisa™ HCV Ag-Ab ULTRA V2 repose sur l'utilisation d'une phase solide préparée avec des antigènes
purifiés : deux protéines recombinantes de la région non structurale (NS3 et NS4), un peptide de la région
structurale (capside) du virus de l'hépatite C et un anticorps monoclonal dirigé contre la capside de l'hépatite
C. La phase liquide comprend deux conjugués. Le premier conjugué (R6) est constitué d'un anticorps
monoclonal murin biotinylé dirigé contre la capside de l'hépatite C. Cet anticorps monoclonal ne réagit pas
contre le peptide capside utilisé sur la phase solide. Le second conjugué (R7) est un mélange d'anticorps
murins anti IgG humaines marqués à la peroxydase et de streptavidine marquée à la peroxydase.
La mise en oeuvre du test comprend les étapes réactionnelles suivantes :1) Le conjugué 1 puis les échantillons à étudier et les sérums de contrôle sont distribués dans les puits de
la microplaque. Si des anticorps ant i-VHC sont présents, ils se lient aux antigènes fixés sur la phasesolide. Si des antigènes de capside de l'hépatite C sont présents, ces antigènes sont liés par les
anticorps monoclonaux de la phase solide et les anticorps monoclonaux biotinylés du conjugué 1.
2) Après une incubation de 90 minutes à 37°C et une étape de lavage, le conjugué 2 contenant des
anticorps anti IgG humaines marqués à la peroxydase et de la streptavidine marquée à la peroxydase
sont ajoutés à chaque puits de la microplaque. Dans le cas de présence d'IgG humaines ayant réagi
avec la phase solide, le conjugué anti IgG humain se lie aux anticorps humains. Le conjuguéperoxydase/streptavidine se fixe sur la biotine du conjugué 1 dans le cas d'une présence de l'antigène
de capside du virus de l'hépatite C dans l'échantillon.3) Après 30 minutes d'incubation à 37°C et élimination des conjugués enzymatiques non liés par lavage, la
présence des complexes antigène-anticorps-peroxydase sont révélés par addition du substrat.
4) Après 30 minutes d'incubation à température du laboratoire (18-30°C) et arrêt de la réaction, la lecture
s'effectue au spectrophotomètre à 450/620-700 nm. L'absorbance mesurée pour un échantillon permet
de conclure quant à la présence ou l'absence d'anticorps anti-VHC et/ou d'antigène de capside de
l'hépatite C dans l'échantillon testé. L'intensité de la coloration est proportionnelle à la quantité
d'anticorps anti-VHC et/ou d'antigène capside de l'hépatite C liés sur la phase solide.4 [FR]
4. REACTIFS :
4.1. Description :
Identification de
l'étiquetageDescription
Présentation
/ Préparation 72561Présentation
/ Préparation 72562R1 MICROPLATE Microplaque
12 barrettes sensibilisées avec un
anticorps monoclonal anti-capside duVHC, des antigènes recombinants
purifiés (NS3, NS4) et un peptide de la région capside du VHCIdentifiant spécifique = 93 1 plaque
Prêt à l'emploi
5 plaques
Prêt à l'emploi
R2 CONCENTRATED
WASHING
SOLUTION (20X) Solution de lavage concentrée 20 fois Tampon Tris NaCl pH 7,4Conservateur : ProClin™ 300 (0,04%) 1 flacon
(70 ml)A diluer 1 flacon
(235 ml)A diluer
R3 NEGATIVE
CONTROL Contrôle négatif
Tampon Tris HCl, contenant de la
S.A.B. (albumine de sérum bovin);
Conservateur : ProClin™ 300 (0,1%) 1 flacon
(1 ml)Prêt à l'emploi
1 flacon
(1 ml)Prêt à l'emploi
R4 POSITIVE
CONTROL Contrôle positif
Sérum humain contenant des anticorps
anti-VHC négatif pour l'antigène HBs et pour les anticorps anti VIH-1 et antiVIH-2 dilué dans un tampon Tris HCl
contenant de la S.A.B. et inactivé photochimiquementConservateur : ProClin™ 300 (0,1%) 1 flacon
(1,5 ml)Prêt à l'emploi
1 flacon
(3 ml)Prêt à l'emploi
R5a ANTIGEN
POSITIVE
CONTROL Contrôle positif
Antigène positif synthétique de contrôle
contenant un peptide de capside lyophilisé 1 flacon (1 ml)A reconstituer
q.s. ad 1 ml 1 flacon (1 ml)A reconstituer
q.s. ad 1 mlR5b ANTIGEN
DILUENT Diluant du R5a
Eau distillée contenant un
conservateur : ProClin™ 300 (0,5 %) 1 flacon (1 ml)A reconstituer 1 flacon
(1 ml)A reconstituer
R6 CONJUGATE 1 Conjugué 1
Anticorps monoclonal murin dirigé
contre la capside du VHC marqué à la biotine. Coloré en violet.Conservateur : Azide de sodium
(<0,1%), CosmocilCQ (0,025%) 1 flacon
(15 ml)Prêt à l'emploi
2 flacons
(2 x 30 ml)Prêt à l'emploi
R7 CONJUGATE 2 Conjugué 2
Anticorps murins anti-IgG humaines
marqués à la peroxydase et streptavidine marquée à la peroxydaseColoré en vert.
Conservateur : ProClin™ 300 (0,5 %) 1 flacon
(15 ml)Prêt à l'emploi
2 flacons
(2 x 30 ml)Prêt à l'emploi
R8 SUBSTRATE
BUFFER Substrat Solution d'acide citrique et d'acétate de sodium pH 4,0 contenant 0,015% d'H 2 O 2 et 4% de diméthylsulfoxyde (DMSO) 1 flacon (60 ml)A reconstituer 2 flacons
(2 x 60 ml)A reconstituer
5 [FR]
R9 CHROMOGEN :
TMB SOLUTION
(11X) Chromogène : solution TMBSolution contenant du 3,3', 5,5'-
tétraméthylbenzidine (TMB) 1 flacon (5 ml)A diluer
2 flacons
(2 x 5 ml)A diluer
R10 STOPPING
SOLUTION Solution d'arrêt Solution d'acide sulfurique (H 2 SO 41N) 1 flacon
(28 ml)Prêt à l'emploi
3 flacons
(3 x 28 ml)Prêt à l'emploi
4.2. Conditions de conservation et de manipulation :
La trousse doit être gardée à +2-8°C. Chaque élément de la trousse conservé à +2-8°C peut être utilisé
jusqu'à la date d'expiration indiquée sur le coffret (sauf indication spécifique).Après ouverture et en l'absence de contamination, les réactifs R2, R3, R4, R6, R7, R8, R9 et R10 conservés
à 2-8°C sont stables jusqu'à la date d'expiration indiquée sur l'étiquette.Identification Conservation
R1 Après ouverture du sachet sous vide, les barrettes conservées à +2-8°C sont stables pendant 1 mois dans leur sachet d'origine refermé avec soin avec du ruban adhésif. R2 La solution de lavage diluée peut être conservée à +2-30°C pendant 2 semaines. La solution de lavage concentrée (R2) peut être conservée à +2-30°C.R5a + R5b Après reconstitution la solution de travail de l'antigène positif de contrôle (R5) peut être
conservée 1 mois à +2-8°C et 2 mois à -20°C (jusqu'à 5 cycles de congélation/décongélation après congélation à -20°C).R8 + R9 Après reconstitution, les réactifs conservés à l'obscurité sont utilisables pendant 6
heures à la température ambiante (18-30°C).5. AVERTISSEMENTS ET MESURE DE PRECAUTION :
Pour utilisation en diagnostic
in vitro par un professionnel de santé.5.1. Précautions relatives à la santé et à la sécurité :
• Ce coffret doit être manipulé uniquement par du personnel qualifié formé aux procédures de
laboratoire et familier avec leur s risques potentiels. Porter des vêtements protecteurs appropriés,gants et protection des yeux/visage et manipuler de manière appropriée selon les bonnes pratiques
de laboratoire requises.• La trousse contient des composants du sang humain. Le matériel d'origine humaine utilisé dans la
préparation du réactif R4 (Positive Control) a été testé et trouvé non-réactif en antigène de surface
du virus de l'hépatite B (Ag HBs), et en anticorps dirigés contre les virus de l'immunodéficience
humaine (anti VIH-1 et anti VIH-2) et réactif en anticorps dirigés contre le virus de l'hépatite C (anti-
VHC). De ce fait, il a été inactivé photochimiquement. Aucune méthode d'analyse connue ne peut
offrir une complète assurance que des agents infectieux sont absents. Par conséquent, tous lesdérivés du sang humain, réactifs et échantillons humains, doivent être manipulés comme s'ils étaient
capables de transmettre une maladie infectieuse, en suivant les précautions universellesrecommandées pour les pathogènes sanguin comme définies par OSHA les guides actualisés du
CDC/NIH Biosafety in Microbiologique and Biomedical Laboratories et/ou les réglementations nationales, régionales et locales.• Projections Biologiques : les projections de matériel humain doivent être traitées comme
potentiellement infectieuses.Les projections ne contenant pas
d'acide doivent être immédiatement décontaminées (incluant lazone de projection, le matériel et toute surface contaminée ou équipement) avec un désinfectant
chimique approprié qui doit être efficace pour les risques potentiels relatifs aux échantillons
impliqués (communément une dilution à 1:10 d'eau de Javel, 70-80% Ethanol ou Isopropanol, un iodophor [tel que 0,5% Wescodyne™ Plus, etc.), et séchées.Les projections contenant de l'acide doivent être absorbées (essuyées) de manière appropriée ou
neutralisées, la zone lavée avec de l'eau et séchée; le matériel utilisé pour absorber la projection
peut nécessiter d'être jeté dans une poubelle pour risque biologique. Ensuite la zone doit être
décontaminée avec un des désinfectants chimiques.6 [FR]
NOTE : Ne pas mettre des solutions contenant de l'eau de Javel dans l'autoclave !• Jeter tous les échantillons et le matériel utilisés pour réaliser le test comme s'ils contenaient un
agent infectieux. Les déchets de laboratoire, chimiques ou biologiques doivent être manipulés et
jetés selon les réglementations locales, régionales et nationales.• Pour les risques et recommandations de précaution relatifs à certains composants chimiques dans
cette trousse, merci de vous référer au(x) pictogramme(s) indiqué(s) sur les étiquettes et à
l'information fournie à la fin de la notice. La fiche de données de sécurité du produit est disponible
sur www.bio-rad.com.5.2. Précautions relatives au protocole :
5.2.1. Préparation :
La qualité des résultats dépend du respect des bonnes pratiques de laboratoire suivantes : • Ne pas utiliser des réactifs dont la validité est expirée. • Ne pas mélanger des réactifs de lots différents au cours d'un même essai.• Avant utilisation, sortir les réactifs de la boite et attendre 30 minutes que les réactifs s'équilibrent à la
température ambiante (18-30°C).• Le nom du test ainsi qu'un numéro d'identification spécifique du test sont mentionnés sur le cadre de
chaque microplaque. Ce numéro d'identification spécifique figure également sur chaque barrette.
Monolisa™ HCV Ag-Ab ULTRA V2 : Numéro spécifique d'identification = 93Cette identification doit être véri
fiée avant chaque utilisation. Toute barrette dont le numéro de test estabsent ou différent de celui correspondant au test réalisé, ne doit pas être utilisée.
REMARQUE : Il est possible d'utiliser d'autres lots de solution de lavage (R2, identifié 20X en vert sur
l'étiquette), de tampon substrat (R8, identifié TMB buf. en bleu), de chromogène (R9, identifié TMB 11X en
violet) et de solution d'arrêt (R10, identifié 1N en rouge), que ceux fournis dans la trousse sous réserve
d'utiliser un seul et même lot de ceux-ci au cours d'une même série. Ces réactifs peuvent être utilisés avec
d'autres produits de notre soci été. Contacter nos services techniques pour obtenir des informations détaillées. • Reconstituer soigneusement les réactifs en évitant toute contamination.• Utiliser une verrerie parfaitement lavée et rincée à l'eau distillée ou de préférence du matériel à
usage unique.• Ne pas laisser la microplaque sécher entre la fin du lavage et la distribution des réactifs.
• La réaction enzymatique est très sensible à tous métaux ou ions métalliques. En conséquence,
aucun élément métallique ne doit entrer en contact avec les différentes solutions contenant le conjugué ou la solution substrat.• La solution de révélation (tampon substrat + chromogène) doit être colorée en rose. L'apparition
d'une autre coloration dans les minutes suivant la reconstitution indique que le réactif est inutilisable
et doit être remplacé.Pour cette préparation, utiliser de préférence des récipients et du matériel de distribution en
plastique à usage unique ou de la ve rrerie préalablement lavée à l'acide chlorhydrique 1N, rincée à l'eau distillée et séchée. Conserver cette solution à l'abri de la lumière.• Ne jamais utiliser le même récipient pour distribuer le conjugué et la solution de révélation.
5.2.2. Réalisation :
• Ne pas changer le mode opératoire• Ne pas réaliser le test en présence de vapeurs réactives (acides, alcalines, aldéhydes) ou de
poussières qui pourraient altérer l'activité enzymatique du conjugué. • Utiliser un cône de distribution neuf pour chaque sérum.• Le lavage des cupules est une étape essentielle de la manipulation : respecter le nombre de cycles
de lavages prescrits et s'assurer que toutes les cupules soient complètement remplies, puis complètement vidées. Un mauvais lavage peut entraîner des résultats incorrects.• Pour des performances optimales, suivre attentivement les procédures de lavage décrites. Selon les
instruments, il peut être nécessaire d'optimiser la procédure de lavage (augmentation du nombre
d'étapes de cycles de lavage et/ou le volume de la solution de lavage pour chaque cycle) afin d'obtenir un niveau acceptable de bruit de fond pour les échantillons négatifs. • Contacter Bio-Rad pour l'adaptation et les procédures spéciales.7 [FR]
6. ECHANTILLONS :
Prélever un échantillon de sang selon les pratiques en usage.Les tests sont effectués sur des échantillons non dilués de sérum ou de plasma (collectés sur EDTA, Citrate
de Sodium ou ACD).L'utilisation d'échantillon prélevé sur des tubes contenant de l'héparinate de lithium n'est pas recommandée.
Une diminution du signal a été observée sur les échantillons positifs pour l'antigène VHC.
Les échantillons présentant des agrégats doivent être clarifiés par centrifugation avant le test. Les particules
ou agrégats de fibrine en suspension peuvent donner des résultats faussement positifs.Les échantillons seront conservés à +2-8°C si le dépistage est effectué dans les 7 jours ou peuvent être
conservés congelés à -20°C.Eviter les congélations/décongélations répétées (au-delà de 3 cycles de congélation /décongélation).
Les échantillons doivent être décongelés à température ambiante (18-30°C). Il est recommandé de les
homogénéiser par retournement avant utilisation.Les échantillons contenant jusqu'à 120 g/l d'albumine, 50 µg/l de biotine, et 200 mg/l de bilirubine, les
échantillons lipémiques contenant jusqu'à l'équivalent de 33 g/l de trioléine et les échantillons contenant
jusqu'à 2 g/l d'hémoglobine n'affectent pas les résultats. Il est cependant recommandé de ne pas utiliser des
échantillons contaminés, hyper lipémiques et hyper hémolysés.Le chauffage des échantillons n'est pas recommandé car il peut réduire de façon significative la détection
antigénique VHC.Si les échantillons doivent voyager, les emballer selon la réglementation en usage pour le transport des
agents étiologiques et les transporter préférablement congelés.7. MODE OPERATOIRE :
7.1. Equipement nécessaire mais non fourni :
• Eau distillée ou complètement déminéralisée. • Eau de javel et bicarbonate de soude. • Papier absorbant. • Films adhésifs. • Gants à usage unique. • Lunettes de protection. • Tubes à usage unique.• Pipettes automatiques ou semi-automatiques réglables ou fixes pouvant distribuer 50 l, 80 l,
100 l, 200 l et 1 ml.
• Eprouvettes graduées de 10 ml, 200 ml et 1 000 ml. Agitateur type vortex. • Système de lavage, automatique*, semi-automatique* ou manuel pour microplaque. • Bain-marie, ou incubateur sec*, pouvant être thermostaté à 37°C ± 1°C. • Conteneur de déchets contaminés. • Appareil de lecture* pour microplaques (équipés de filtres 490, 620, 450/620-700 nm).(*) Nous consulter pour une information précise concernant les appareils validés par nos services
techniques.7.2. Préparation des réactifs :
7.2.1. Réactifs prêts à l'emploi :
Réactif 1 (R1) : Microplaque
Chaque support cadre contenant 12 barrettes est conditionné en sachet aluminium scellé. Couper le sachet
à l'aide de ciseaux ou scalpel 0,5 à 1 cm au-dessus de la soudure. Ouvrir le sachet et sortir le cadre.
Replacer dans le sachet les barrettes inutilisées. Refermer le sachet soigneusement avec du ruban adhésif
et le replacer à +2-8°C.Réactif 6 (R6) : Conjugué 1
Homogénéiser par retournement avant utilisation.Réactif 7 (R7) : Conjugué 2
Homogénéiser par retournement avant utilisation.8 [FR]
7.2.2. Réactifs à reconstituer
Réactif 2 (R2) : Solution de lavage concentrée (20X)Diluer 20 fois la solution dans l'eau distillée. On obtient ainsi la solution de lavage prête à l'emploi.
Prévoir 800 ml pour une plaque de 12 barrettes. Réactif 8 (R8) + Réactif 9 (R9) : Solution de révélation enzymatiqueDiluer le réactif R9 dans le réactif R8 au 1/11e (exemple : 1 ml de réactif R9 dans 10 ml de réactif R8)
sachant que 10 ml sont nécessaires et suffisants pour traiter 12 barrettes. Homogénéiser. Réactif 5a (R5a) + Réactif 5b (R5b) : Solution de travail (R5) Remplir le flacon de R5a avec la totalité de la solution du flacon R5b.Reboucher et attendre 10 minutes à température ambiante (18-30°C) en agitant de temps en temps le flacon
par inversion du flacon.7.3. Protocole opératoire :
Suivre strictement la procédure.
Utiliser les sérums des contrôles positifs et négatifs pour chaque test afin de valider la qualité du test.
Suivre les Bonnes Pratiques de Laboratoire suivantes :1) Etablir soigneusement le plan de distribution et d'identification des échantillons.
2) Préparer la solution de lavage diluée R2 et la solution de travail de l'antigène positif de contrôle (R5a
+ R5b) (se référer § 7.2).3) Sortir le cadre support et les barrettes (R1) de l'emballage protecteur.
Replacer dans le sachet les barrettes inutilisées. Refermer le sachet soigneusement et le replacer à
+2-8°C.4) Déposer directement, sans prélavage de la plaque, successivement :
• 100 l de conjugué 1 (R6) dans chaque cupule puis • 50 l de contrôle négatif (R3) en A1, • 50 l de contrôle positif (R4) en B1, C1, D1, • 50 l de la solution de travail de l'antigène positif de contrôle (R5a + R5b) en E1, • 50 l du premier échantillon en F1, • 50 l du deuxième échantillon en G1, etc...Homogénéiser le mélange par 3 aspirations minimum ou avec un agitateur de microplaque durant 5
secondes. Si la distribution des échantillons excède 10 minutes, il est alors recommandé de distribuer
les contrôles négatifs et positifs après les échantillons à tester. En fonction du système utilisé, il est possible de mo difier la position ou l'o rdre de distribution des contrôles.REMARQUE : Après la distribution des échantillons, la cupule contenant l'échantillon (ou les contrôles)
vire du violet au bleu. Il est possible de vérifier la présence de (échantillon + conjugué 1) dans les cupules par lecture spectrophotométrique à 620 nm (se référer § 7.7).5) Couvrir si possible d'un film autocollant en appuyant bien sur toute la surface pour assurer
l'étanchéité.6) Incuber la microplaque pendant 90 minutes (± 5 min.) à 37°C ± 1°C.
7) Si nécessaire, retirer le film adhésif. Aspirer le contenu de toutes les cupules dans un conteneur
pour déchets contaminés (contenant de l'hypochlorite de sodium) et ajouter dans chacune d'elles un
minimum de 370 µl de solution de lavage. Aspirer de nouveau. Répéter le lavage au moins 4 fois (autotal, au moins 5 lavages sont effectués). Le volume résiduel doit être inférieur à 10 l (si
nécessaire, sécher la plaque par retournement sur une feuille de papier absorbant). Si l'on dispose d'un laveur automatique, respecter le même cycle opératoire.8) Distribuer rapidement 100 l de la solution de conjugué 2 (R7) dans toutes les cupules.
Le conjugué doit être agité avant emploi. Recouvrir, si possible, d'un film neuf et incuber pendant 30
minutes (± 5 min.) à 37°C ± 1°C.REMARQUE : Le conjugué est coloré en vert. Il est possible de vérifier la présence du conjugué dans
les cupules par lecture spectrophotométrique à 620 nm (se référer § 7.7).quotesdbs_dbs44.pdfusesText_44[PDF] anticorps anti vhc indice
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