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DISQUES POUR ANTIFONGIGRAMME

CARTOUCHE DE 50 DISQUES

ETUDE DE LA SENSIBILITE DES CHAMPIGNONS AUX ANTIFONGIQUES

1- INTERET CLINIQUE

Ces disques permettent de déterminer la sensibilité des levures (Candida, Cryptococcus,...) et des champignons filamenteux

sporulés (Aspergillus) aux agents antifongiques, par une méthode de diffusion en milieu gélosé.

2- PRINCIPE

Des disques de papier imprégnés avec une concentration déterminée d'antifongique sont déposés à la surface du milieu

semisynthetic (5-Fluorocytosin) ou casitone (Amphotericin B, Nystatin, Econazole, Clotrimazole, Miconazole, Ketoconazole)

préalablement ensemencé avec un inoculum calibré, préparé à partir d'une culture pure du champignon à tester. Un gradient de

concentration d'antifongique s'établit autour des disques dans la gélose. Après incubation, le diamètre des zones d'inhibition

observées autour des disques permet de déduire les Concentrations Minimum Inhibitrices (CMI) des différents antifongiques

pour la souche testée et la catégorisation clinique (Sensible, Intermédiaire, Résistant). 3- PRESENTATION

Les disques, fabriqués à partir de papier absorbant de qualité supérieure, ont 6,5 mm de diamètre et sont imprégnés

d'antifongiques à des concentrations précises.

Ces disques sont clairement identifiés par un symbole comportant 2 à 3 lettres, imprimé de chaque côté du disque (tableau 1).

Les disques Bio-Rad sont présentés en cartouche de 50 disques conditionnés en containers étanches contenant un

deshydratant. CHARGE DU DISQUE SYMBOLE CONDITIONNEMENT CODE PRODUIT

5-Fluorocytosine 1ȝg 5FC 1 1 x 50 disques 62846 Amphotericin B 100 ȝg AB 100 1 x 50 disques 62806

Nystatin 100 IU NY 100 1 x 50 disques 62856

Econazole 50 ȝg EC 50 1 x 50 disques 62826

Clotrim

azo l e

50 ȝg CTR 50 1 x 50 disques 62816 Miconazole 50 ȝg MCZ 50 1 x 50 disques 62836

Ketoconazole 50 ȝg KET 50 1 x 50 disques 62866

4- CONSERVATION La date de péremption s'applique uniquement aux disques contenus dans des cartouches intactes conservées conformément

aux instructions du fabricant. La date de péremption et le numéro de lot figurent sur chaque conditionnement (cartouche et

container).

Les cartouches de disques doivent être conservées dans leur container entre + 2 et + 8 ° C au sec.

Ramener les cartouches à température ambiante (18-30°C) avant de les ouvrir, remettre les cartouches inutilisées entre +

2 et + 8 ° C une fois la pose des disques terminée.

Ne pas utiliser les disques dont la date de péremption est dépassée.

Si les cartouches sont conservées dans le distributeur après dépôt, il est nécéssaire de conserver celui-ci à + 2-8°C au sec

avec des dessicants à l'intérieur. La stabilité des disques, de cartouches ouvertes placées dans des distributeurs a été validée en conditions de routine

pendant 6 semaines.

5- MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI

8 disques ref # 50270

12-16 disques ref # 50295

souches fongiques pour le contrôle de qualité

6- PRECAUTIONS D'UTILISATION

Observer à tout moment les techniques et précautions en vigueur en matière de protection contre les dangers microbiologiques.

Après usage, stériliser les cultures et tout le matériel contaminé. 2

7- MODE OPERATOIRE

de l'inoculum à partir d'une culture pure et fraîche, le mode d'ensemencement, la température et le délai d'incubation.

8- INTERPRETATION DES RESULTATS

Résistant) est résumée dans le tableau suivant :

Diamètre de la zone

d'inhibition en mm CMI en ȝg / ml Interpretation pour les levures (a - b)

5-Fluorocytosine* (1 ȝg) = 20

20 - 10

= 10 = 1.56

1.56 - 25

= 25 Sensible

Intermédiaire

Résistant

Amphotericin B < 10

= 10 < 1 = 1 Sensible

Intermédiaire ou Résistant

Nystatin > 10

= 10 Sensible

Résistant

Imidazoles ** (Econazole,

Clotrimazole, Miconazole,

Ketoconazole) = 20

20 - 10

= 10 = 1.56

1.56 - 6.4

= 6.4 Sensible

Intermédiaire

Résistant

5-Fluorocytosine (1 ȝg) > 10

= 10 pour A. fumigatus

Sensible

Intermédiaire ou Résistant

Pour les souches considérées résistantes (diamètre de la zone d'inhibition inférieur à 10 mm), il est conseillé de réaliser une

détermination de la C.M.I. ou d'adresser les souches à un Laboratoire de Référence en Mycologie.

* Pour la 5-fluorocytosine, l'existence possible de petites colonies dans la zone d'inhibition, correspond à des mutants

résistants.

** Pour les imidazolés, l'évaluation est parfois difficile. Certaines souches présentent deux zones d'inhibition :

- une grande zone

- une zone plus réduite avec des petites colonies qui n'apparaissent pas résistantes lorsqu'on évalue à nouveau leur

sensibilité : la croissance de ces petites colonies est observée également lors de la détermination des C.M.I.

a- Résultats obtenus avec Candida albicans et autres champignons levuriformes (1), (3)

b- La catégorisation Sensible, Intermédiaire ou Résistante est donnée après comparaison des C.M.I. et des concentrations

sériques en antifongique obtenues avec les posologies usuelles par voie orale ou intraveineuse (2) .

L'antifongigramme des champignons filamenteux sporulés (comme Aspergillus fumigatus) peut être réalisé dans des conditions

similaires à celles des champignons levuriformes (inoculum= 10

6 spores/ml).

9- PERFORMANCES / CONTROLE QUALITE DU TEST

Le tableau suivant rassemble les limites acceptables des diamètres d'inhibition obtenus par diffusion en milieu gélosé pour les

souches de référence citées ci-après : Limites acceptables des diamètres d'inhibition (mm)

Charge du disque Candida albicans

DP 3153A Candida albicans

DP 41R5FC

5-Fluorocytosine 1 ȝg 30 - 38 Résistant

Nystatin 100 IU 16 - 25 17 - 26

Econazole 50 ȝg 23 - 33 25 - 35

Clotrimazole 50 ȝg 18 - 28 18 - 30

Miconazole 50 ȝg 18 - 25 20 - 30

Ketoconazole 50 ȝg 25 - 36 29 - 39

Candida albicans

ATCC 24433 Candida albicans

ATCC 90028

Amphotericin B 100 ȝg 15 - 21 15 - 21

10- CONTROLE QUALITE DU FABRICANT

Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la

réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un

contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la

production et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant. 3

11- LIMITES D'UTILISATION

Les performances du test dépendent non seulement de l'activité des disques, mais également des facteurs tels que l'utilisation

d'un inoculum standardisé, de souches de contrôle appropriées, de milieux de culture adaptés pré-testés et d'une température

de stockage des disques adéquate.

12- REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

1. DROUHET E. et DUPONT B.. Bull. Soc. Fr. Mycol. Med. 1978, 2, 165-170 - Antibiogramme des chamipgnons aux

antifongiques.

2. DROUHET E. et DUPONT B.. Encyclopédie médico-chirurgicale (Paris. 1976, 9. La. Infect. 8004 M10 : Traitements

antifongiques.

3. DROUHET E. and al., Standardization of the antifungal sensitivity tests. Report of the Study Group of the French Society for

Medical Mycology, Bull. Soc. Fr. Mycol. Med., 1981, 10, n°1, 131-134.

4. GRILLOT R., Les antifongiques. Présentation synoptique et tests in vitro, :Grillot R.(éd), Les mycoses humaines : démarche

diagnostique, Elsevier, Paris, 1996, pp.323-353.

Bio-Rad

3, boulevard Raymond Poincaré

92430 Marnes-la-Coquette France

Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00

Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33

03/2009

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