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Exercice n=°1: Chromatographie d'exclusion stérique (9 pts). On veut déterminer la masse moléculaire (MM) d'une protéine p par chromatographie d'exclusion.



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Fiche TD n°1 : La chromatographie d'exclusion moléculaire. EXERCICE N : °1 La limite d'exclusion du gel se situe entre 40000et 400000 de MM.



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La chromatographie est une technique d'analyse pour séparer les constituants d'un mélange ;. • les molécules à séparer sont entraînées par un fluide qui 



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d) Quel est lacide aminé présentant le Rf le plus important ? Cela

EXERCICE 2 La tropomyosine protéine musculaire de 70 kDa est constituée de deux est utilisé dans le cadre de la chromatographie d'affinité.



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Chromatographie d'exclusion stérique (filtration sur gel ou tamisage moléculaire). 3. 4. 1. 2. Cours et exercices corrigés. Partie 1:.





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On réalise une étude comparative de deux gels utilisés en chromatographie d'exclusion moléculaire en vue d'en utiliser un pour séparer les antibiotiques des 



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Correction exercice 1 :1 - Cet exercice met en jeu une chromatographie d'exclusion (encore appelée : tamisage moléculairegel filtration perméation de gel) 



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Exercice n°1 Un mélange d'acide glutamique et d'histidine à pH 5 est soumis à une électrophorèse sur papier et à une chromatographie sur résine échangeuse 

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Fiche TD n°1

EXERCICE N : °1

On dĠtermine les temps de rĠtention de (tr) au cours d͛une chromatographie sur séphadex, les protéines suivantes dont on connait la masse moléculaire (MM), le débit de la colonne est de 5ml/min.

Protéines MM Tr(min)

Aldolase 145000 10.4

Lactate déshydrogénase 135000 11.4

Phosphatase alcaline 80000 18.4

Ovalbumine 45000 26.2

lactoglobuline 37100 28.6

1-Expliquer le principe de cette technique

2-Calculer les ǀolumes d͛Ġlution (Ve) correspondants. Porter le log de MM en fonction de

Ve ; que remarquez-vous ?

3-Pour la glucokinase. Trс21. DĠterminer sa masse molĠculaire ă l͛aide du graphique

précédent.

EXERCICE N°2

On ǀeut dĠterminer la masse molĠculaire (MM) d͛une protĠine P par chromatographie

L͛Ġtalonnage du gel se fait par diǀerses substances, dont les MM (exprimées en daltons ) et

Protéines MM Ve (ml)

Dextran 2000000 45

Fibrinogène 340000 60

Catalase 230000 75

Lactoglobuline 19000 132

1- Porter le log de MM en fonction de Ve. Que remarquez-vous ?

2- La protĠine P montre un ǀolume d͛Ġlution Veс113ml. DĠterminer sa MM.

EXERCICE N°3

On veut séparer un mélange de protéines suivant : Thyroglobuline (669KDa), Ferritine

(440KDa), Catalase (232KDa), lactase dĠshydrogĠnase (140KDa) et l͛albumine (66KDa) par

Le profil d͛Ġlution est tracĠ aprğs mesure d͛absorbance ă 280nm des fractions ĠluĠes. Le

(2.106Da) permet de déterminer le volume mort Vo du gel.

1- Tracer la droite de calibration : Ve/Vo=f (log PM). Que remarquez-vous ?

2- Calculer PM d͛une protĠine. Si son Veс33ml

Ve (volume d'élution) = d (débit) x tr (temps de rétention)quotesdbs_dbs2.pdfusesText_4
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