La chromatographie ionique
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Chromatographie Ionique
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Quel est le principe de la chromatographie d'échange d'ions ?
Le principe de la chromatographie ionique est basé sur les propriétés des résines échangeuses d'ions qui permettent une fixation sélective des anions ou des cations présents dans une solution. Sur la résine échangeuse d'ions conditionnée sous forme d'une colonne chromatographie circule en permanence un éluant.Quels sont les principes de la chromatographie ?
La chromatographie est une technique séparative analytique et/ou préparative. Elle consiste à faire migrer les constituants à séparer sur une phase stationnaire immobile, à l'aide d'une phase mobile, liquide ou gazeuse, de nature différente.Quel est le principe de la chromatographie HPLC ?
Le principe de la HPLC est, comme pour les autres variantes de chromatographie, d'utiliser les différences de propriétés physico-chimiques de différents composés pour les séparer. Un liquide, l'éluant, constitue la phase mobile, qui va entraîner plus ou moins facilement les molécules du mélange.- La chromatographie échangeuse d'ions est couramment utilisée comme une étape intermédiaire dans une méthode de purification des protéines, mais elle peut donner une résolution élevée pour certaines protéines lorsqu'elle est utilisée plus tôt ou plus tard au cours de la purification.
1Lachromatographieionique
Théorieetmiseenoeuvre
Laboratoire
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Principesgénéraux·de lachromatographie
Le terme chromatographie désigne unetechniquede séparation danslaquelleles diverscomposantsd'unéchantilloncirculentau traversd'une colonne avec des vitessesdifférentes.Dans toute séparationchromatographique,il ya unephasestationnaire,qui correspond au remplissage de la colonne, et unephase mobile,qui est celle qui circule à travers la colonne. .On chromatographie: • selon lanaturephysiquedes deuxphases:laphase ..stationnairepeut êtreliquideou solide alors que la phase mobile est soit liquide soit gazeuse. On peut donc avoirquatre typesde.solide.Demanièregénéraleondénommelesdeuxpremièreschromatographieliquideet les deux autreschromatographie
gazeuse,c'est-à-dire en ne tenant compte que de la phase mobile. • selon le l'échantillon:par adsorptionde la phasemobilesur la phase stationnaire,par partition de laphasemobilesur.lesupport stationnaireou paréchange-.ioniquedes composants de la phase
mobile avec les sites d'échange du substrat.. méthodedeséparation.Celle-cidoit ensuite êtresuiviepar la. mesure d'un paramètre afin depouvoirréaliser unedétermination systèmesolvant soluté tel que saconductivitéélectriqueouthermique,sa couleur, sescaractéristiquesspectralesou même saradioactivité. 110Le schéma général de fonctionnement est donc le suivant ( fig. .t): contenantla phase stationnaire et on fixe ce moment comme étant t=O.Lescomposantsàanalysersontimmédiatementfixés, par adsorption,.partition ou échange ionique, sur lapremière portion de laphasestationnaire.A partir de cetinstant,leliquideou le gaz utilisécomme phase mobile est mis encirculation.Il estànoter que celiquideou gazpeut'être le mêmesolvantque celui de .l'échantillon,mais il peut aussi êtredifférent.Avec le temps, les composantsdel'échantillononttendance
àsesépareren bandes
distinctesdufaitde leur vitesse demigrationdifférentedans le solvant. Enchromatographieionique, les vitesses de migration sont fonctionprincipalementde latailledesionset de leur charge· électriqueetdépendentaussinaturellementde la nature et de la .force ionique de la phase mobile.Fig;.1:Représentation"·
schématlque de larétention(A) et del'élution(B) d'un.mélangeàdeuxcomposants A BJ,Phasetationnire
Composant 2 .
Composant 1
J,J, t=Ot=i 111Un peu determinologie
Elution:processus par lequel lescomposantsd'unéchantillon sedéplacentàtraverslacolonnesuite au fluxpermanentde la
phase mobile. Eluant:le liquide ou le gazconstituantla phase mobile. Eluat:ce qui se retrouve en sortie decolonne,c-à-dl'éluant plus lecomposantqu'ilcontient'àuninstantdéterminé.
Tempsderétentiond'un composant: tempsrequispour que cecomposantarriveàl'extrémitéde lacolonne."estmesuré
.depuislemomentdel'injectionjusqu'ausommetdu pic qui lui correspond. Volumederétention'd'un'composant:volumede la phase mobilequi doits'écoulerpour que cecomposantsoitélué.Adébit
constant, il est égal au temps de rétentionmultipliéparle débit. dépendentnaturellementdes composants mais aussi deparamètres' opératoires(longueuretdiamètresde lacolonnesnotamment)et desconditions ·température).C'est pourquoi. on utiliseplutôtlesnotionsde temps etvolumede rétention relatifs. Par ailleurs, ilya évidemmentintérêtàobtenirune séparation aussi nette que possible entre lesdifférentscomposants.Cela peut se faire enjouantsur ces· mêmes paramètres. Iln'esttoutefoispas •toujourspossible pics ont tendance às'élargiravec le temps. Cela est dû. notamment à desvariationsdans lacompactionde lacolonne,ce qui a une incidencesur le débit, et à ladiffusiondusolutédans le solvant' Le chromatographeioniqueL'appareilcomporte4 éléments:
• une pompeanalytiquequi assure undébittrèsrégulieret réglable avec précision (entre 0 et 9.9 ml/min. pour le DIONEX); • le module dechromatographiequi comporte en ensemble de colonne;. 112mais quipeut êtreremplacéselon le typed'analyseàeffectuerpar un module f1uorimétrique ou uncolorimètre; • unestationd'acquisitionet traitementdesdonnéesassurant l'enregistrementet le·traitementqualitatifetquantitatifdes spectres.
La colonnecontient,
,cationiqueselonlesanalysesque l'onveutréaliser.Cetterésine' est lerésultatde lapolymérisationd'unmélangedestyrèneet ,divinylbenzènsqui estsulfonaté(groupementS03H+ où H+ est départ. Pour la rendre échangeuse anionique, on y greffe des amines quaternaires(groupementN(CH3)3+0H-avec OH-échangeable).
Lorsquel'onintroduitlasolution
àanalyser,lesanionssont
aussitôtfixés par la résine. Si "on faitensuitepasserun éluant, il ycompétitionentreles anions decelui-ciet ceux del'échantillon, . ce qui amène'leurdésorptionetleurentrainementdans la colonne selon lacolonne.Pour letypedecolonnem'onté'actuellementsur l'appareilDIONEX du LFS (colonneanioniqueAS4A), onutiliseun mélangeNa2C031.80mM0NaHC031-.70mM. A la sortie de la
due àl'éluant,demanièreànemesurerque lesvariationsde conductivitéliées aupassagedesdifférentsanions.Celles-cisont .enregistréespar lastationd'acquisitionqui sechargedescalculs enfin,de mesure. Pour cela, il.faut aupréalableymémoriserles tempsderétentiondes ions que l'onsouhaiteanalyserainsi que divers'autresparamètrestels quel'atténuationque l'on donne au signal,la significat}f,'lapentenécessairepour qu'un pic soitdétecté.Domained'application
Ledomained'applicationde lachromatographieioniqueest sontdosablesen utilisantunréacteurchimiquepost-colonneet undétecteurUV visibleoufluorimétrique.Dans ledomaineminéral,pratiquement 113dosables,mais latechniquen'est passouventconcurentiellevis-à vis desméthodesclassiquesd'absorptionoud'émissionatomique, particulièrementau point devuerapidité et prix de revient. Pour ce qui est des anions par contre, cettetechniqueest trèsperformante simultanémentF-, CI-,
N02-,s-.NOà-,P04
3-et 5042-avec une
limitededétectiondel'ordred'1 ppm oumieux.Elleestdonc particulièrementbienadaptéeàl'étudedesmilieuxrichesen sels
minéraux(sols ou eaux) departsasensibilitéet saspécificité ..maisaussigrâceàsespossibilitésmutti-élérnentaires.Il est à l'utilisationd'un autreéluant.Précautionsetlimites
•.Dégazage des réactifs • Purge de l'air dans le circuit •Eliminerlesmolécules'organiques (filtreO.2J.lm+cartoucheC18)
•Eliminerles anions tropconcentrésdont les picspeuvent masquerles pics suivants (ex. CI- surN02-) enutilisantdes·
.résines de garde • Amener les solutions dans .Ie domained'étalonnagede l'appareil certainsions •Contrôlerlapressiondans lecircuitafind'éviterle tassementdes résines 1 1 1 114CALCULDELADESPICSETDESTEMPSDERETENTIO;/
4 1, 1 1 :J _. o S 10 "1Minut..
15 20 l ' ..NO 3. :résolution=(100)(1 -a/b) temps de rètention(t R)10,5minutes.
résolution=(100)(1 -c/b) tempsderetention17,5minutes. 1;. L __ \J1 oooo o oConc:iucllvlly
Deleclor
1· L.D. li' r::::l0000000000
[J Cl CC CC111111
Separalor
7 Valve A 'Off'W8lIIe
Wallle
r--Injection
Valve 'Inl'AdvancedChromalographyModule
Recorder
116InorganicAnions
OrganicAcids
AlkaliandAlkaline
EarthMetals
Flllore.cenci.
Detlctor.
Carbamates.
Glyphosates
Polynuclear.
Aromatic
Hydrocarbons.
Carbamates
,."'.......Q...... "....-ur.."".Delivery
Module
Quaterna"
Gradient.
Module
ClÎromltography
Module
InorganicsbyFIA.
Ammonium
Nitrite/Nitrate
Phosphate
Etc.Metalsbyle
TransitionMetals
Lanthanides
Vlriable
W8velength
Detectar.
PhenoxyAcid
Herbicides
Carbamates
Polynuclear
Aromatic
Hvdrccarbcns
Isocyanates
Phenolics
Cyanide
Sulfide
Phenolics
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