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Exercice n=°1: Chromatographie d'exclusion stérique (9 pts). On veut déterminer la masse moléculaire (MM) d'une protéine p par chromatographie d'exclusion.
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d) Quel est lacide aminé présentant le Rf le plus important? Cela
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Fiche TD n°1
EXERCICE N : °1
On dĠtermine les temps de rĠtention de (tr) au cours d'une chromatographie sur séphadex, les protéines suivantes dont on connait la masse moléculaire (MM), le débit de la colonne est de 5ml/min.Protéines MM Tr(min)
Aldolase 145000 10.4
Lactate déshydrogénase 135000 11.4
Phosphatase alcaline 80000 18.4
Ovalbumine 45000 26.2
lactoglobuline 37100 28.61-Expliquer le principe de cette technique
2-Calculer les ǀolumes d'Ġlution (Ve) correspondants. Porter le log de MM en fonction de
Ve ; que remarquez-vous ?
3-Pour la glucokinase. Trс21. DĠterminer sa masse molĠculaire ă l'aide du graphique
précédent.EXERCICE N°2
On ǀeut dĠterminer la masse molĠculaire (MM) d'une protĠine P par chromatographie
L'Ġtalonnage du gel se fait par diǀerses substances, dont les MM (exprimées en daltons ) etProtéines MM Ve (ml)
Dextran 2000000 45
Fibrinogène 340000 60
Catalase 230000 75
Lactoglobuline 19000 132
1- Porter le log de MM en fonction de Ve. Que remarquez-vous ?
2- La protĠine P montre un ǀolume d'Ġlution Veс113ml. DĠterminer sa MM.
EXERCICE N°3
On veut séparer un mélange de protéines suivant : Thyroglobuline (669KDa), Ferritine
(440KDa), Catalase (232KDa), lactase dĠshydrogĠnase (140KDa) et l'albumine (66KDa) parLe profil d'Ġlution est tracĠ aprğs mesure d'absorbance ă 280nm des fractions ĠluĠes. Le
(2.106Da) permet de déterminer le volume mort Vo du gel.1- Tracer la droite de calibration : Ve/Vo=f (log PM). Que remarquez-vous ?
2- Calculer PM d'une protĠine. Si son Veс33ml
Ve (volume d'élution) = d (débit) x tr (temps de rétention)quotesdbs_dbs29.pdfusesText_35[PDF] sujet examen chromatographie
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