tp2 : chromatographie sur couche mince des acides amines
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Techniques chromatographiques : la CCM
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Plaque d'aluminium recouverte de cellulose ou plaque de gel de silice prêtes à l'emploi. - Pipettes pasteur ou tubes capillaires (diamètre 1/3 de millimètre).
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CHROMATOGRAPHIE DES ACIDES AMINES
Proposé par Mireille JOSEPH
PRINCIPE
Une technique très employée pour séparer les acides aminés en fonction de leur migrationMATERIEL
- Plaque d'aluminium recouverte de cellulose ou plaque de gel de silice prêtes à l'emploi - Pipettes pasteur ou tubes capillaires (diamètre 1/3 de millimètre)- Cuve à chromatographie (pot de confiture ou bécher recouvert d'un couvercle de boite de pétrie)
- Cuvette pour la révélation - Etuve ou sèche cheveux - Papier filtre ou essuie tout - Solutions témoins dans tubes à hémolyse - Solvant de migration - Solution de révélationREACTIFS
Solvant de migration
Butanol 70 ml
Acide acétique 18 ml
Eau distillée 12 ml
Acides aminés
Alanine, proline, leucine, valine, sérine, etc.... Ils doivent être à saturation dans de l'eau distilléeNe pas faire de grandes quantités puisqu'il ne faut qu'une micro goutte. 1 à 2 millilitres par TP.
Les solutions peuvent se garder au réfrigérateurRéactif à la ninhydrine
Ninhydrine 0,1 gr
Eau distillée 10 ml
La ninhydrine est un hydrate de tricétonhydrinlène. Elle doit être utilisée en solution fraîche et très
diluée (1% maximum)Comme elle s'altère très vite il est conseillé de la préparer en très petite quantité et juste au moment
de l'utilisation.TECHNIQUE
Le remplissage des cuves doit se faire 24 heures à l'avance. Le niveau du solvant ne doit pas être
supérieur au trait fait sur la plaque (entre 1,5 cm à 2 cm de hauteur)Découper les feuilles de gel de cellulose à une largeur inférieure à celle de la cuve, et en prenant
soins de ne pas mettre ses doigts dessus (prendre des gants latex à usage unique)Tirer un trait à 2 cm du bas de la plaque avec un crayon mine graphite, surtout pas de feutre ou de
stylo bille.Prélever avec une pipette capillaire, différente pour chaque acide aminé, un échantillon de chaque
solutionDéposer des gouttes des solutions témoin à intervalles réguliers sur le trait du départ. Ne jamais
mettre les doigts sur le gelSécher et renouveler l'opération.
Placer la plaque dans la cuve et laisser migrer environ 1 heure. Sécher la plaque et vaporiser la solution révélatrice sous hotte aspirante. Sécher aux sèche cheveux jusqu'à apparition des taches. La ninhydrine étant cancérigène, il faut travailler sous hotte aspirante.RESULTATS
1 : Clycine
2 : Tyrosine
3 : Tryptophane
4 : Leucine
M : Mélange des 4 acides
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