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Chapitre 1: LA CHROMATOGRAPHIE

Présenté par : Dr. MEDJAOUI. I

Université HassibaBenboualide Chlef| SNV | Département de Biologie M2

2020/2021

Plan du cours

I.La chromatographie

1.Définition

2.Historique

3.Principe

II.Les différents types de chromatographies

Chromatographies de surface

Chromatographies sur colonne

III.

IV.Le choix de la méthode chromatographique

I.La chromatographie

1.Définition

Avantage:

ng)

I.La chromatographie

LebotanisterusseMikhailTswett(1872-

1919)fut,en1906,lepremieràemployer

letermechromatographie. carbonatedecalciumpulvérulentcomme mélangecommeéluantpourséparer lachlorophylleetlescaroténoïdes.

2.Historique

*carbonate de calcium: phase stationnaire : phase liquide

Mikhail

Tswett

I.La chromatographie

I.La chromatographie

3.Principe

Kest égal au rapport des concentrations du soluté A dans les deux phases

II.Les différents types de chromatographie

-chromatographiessurcolonne paramètres physico-chimiques :

CHROMATOGRAPHIE

En phase liquideEn phase gazeuse

de surface sur papier sur couche mince (CCM)

échangeuse

de partage sur colonne

II.Les différents types de chromatographie

chromatographies de surface

Lachromatographiesurpapier

Phasemobile:solvant+eau

Inconvénients:

-La séparation demande beaucoup de temps (++heures) et moins bonne que la CCM.

Lachromatographiesurcouchemince(CCM)

desmolécules). phasemobile(solvants). lampeultraviolette. aminées). (révélation des acides amines par pulvérisation de la ninhydrine)

Les chromatographies de surface

Les chromatographies de surface

danslestables.

Rf= h/H

Principe générale de la chromatographie sur colonne

Les chromatographies sur colonne

Les chromatographies sur colonne

unechromatographieliquide-solide. parlaphasemobile. alumine,charbonactivé.

Application

Séparation des molécules organiques de MM inférieure à 1000 g/mol

Les chromatographies sur colonne

Lachromatographiedepartage:

unechromatographieliquide-liquide.

Application

Les chromatographies sur colonne

Le mécanisme de séparation se base sur les liaison ioniques entres la phase stationnaire qui porte des groupements

fonctionnels chargés et solutés.

Résine échangeuse de cations : est une résine chargée négativement (R-), accroche les molécules de charge (+)

est une résine chargée positivement (R+), accroche les molécules de charge (-)

Application

Séparation des molécules chargées (ex: acides aminés, protéines)

Les chromatographies sur colonne

promouvoirleurélutionunefoisliées.

échangeused'ionsleplusapproprié.

(Ph << Phi) aachrgé+ aanon chargé aafortement chargé - Cliquez ici https://www.youtube.com/watch?v=eZz-TrtqdCA

Les chromatographies sur colonne

La phase stationnaire est un solide (granule de gel poreux ) Séparation des molécules en fonction de leur taille et de leur forme: Les grosses molécules (dont le diamètre est supérieur à celui des pores) sont exclues et sont donc éluées les premières, Les petites et moyennes molécules sont éluées plus tardivement, car incluses dans le gel, leur migration est freinée.

Application

Séparation de molécules de même forme et de taille variable (protéines globulaires).

Les chromatographies sur colonne

Lachromatographie:

antigène-anticorps).

Application

Séparationdeprotéinesouligands

III.

1.Le chromatogramme

instantanée du soluté en sortie de colonne:

La séparation est complète quand le chromatogramme présente autant de pics chromatographiques revenant à la ligne

2. Notion de temps

-Temps mort tm(t0) Le temps que met la phase mobile pour traverser la colonne -Temps de rétention tr

Temps mis par les molécules d'un composé à analyser (soluté) pour parcourir le trajet entre l'entrée et la sortie de la colonne

Le temps de rétention, est caractéristique du constituant, pour des conditions d'analyse données.

La surface d'un pic est fonction de la quantité de constituant dont il est la trace.

Aucun soluté ne peut sortir avant le temps t0, temps qui correspond au transport dans la phase mobile.

La différence entre le temps de rétention et le temps mort est désignée par le temps de rétention réduit

représente le temps passé dans la phase stationnaire -t0 III.

IV.Le choix de la méthode chromatographique

Les différentes techniques sont complémentaires plutôt que concurrentes.

-de la nature du soluté : gaz, liquide volatil, liquide peu volatil, solide, macromolécule, espèce organique,

chromatographie avec une méthode spectroscopique ou avec la spectrométrie de masse (CPG/SM ou

GC/MS), contrôle de pureté, purification de produits (colonnes préparatives), suivi de réaction en continu pour

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