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SALMONELLA SEROLOGY

SÉRODIAGNOSTIC DES FIÈVRES TYPHOIDES ET PARATYPHOIDES

881169 - 2014/11

1- INTERET CLINIQUE

Les Salmonelles sont des Enterobactériacées parasites du tube digestif de l'Homme et des animaux à l'origine de

salmonelloses majeures (fièvres typhoïdes ou paratyphoïdes) ou mineures (gastro-entérites). Si la présence d'anticorps anti-

salmonelles peut faire soupçonner une infection récente, le diagnostic de certitude reste l'isolement du germe pathogène.

2- PRINCIPE

Le sérodiagnostic des fièvres typhoïdes et paratyphoïdes de Widal et Felix est une technique de détection et de titrage des

agglutinines anti-O et anti-H spécifiques par dilution des sérums de patients. L'agglutination H est rapide (2 heures) et

floconneuse à 37°C ; l'agglutination O est lente (18 heures) et granulaire à température ambiante (18-30°C). Les résultats d'un

résultat positif sont interprétés en comparant les titres des agglutinines anti-O et anti-H sur un ou plusieurs prélèvements.

Remarque :bien que les infections à

Salmonella paratyphi C soient très rares en Europe, les suspensions CO et CH sont

préparées parce qu'elles permettent de dépister des infections dues à des Salmonella ayant des antigènes O et H communs

avec ce sérotype. Si les infections à Salmonella paratyphi A sont rares en France, elles sont fréquentes en Extrême-Orient et en

Afrique.

3- PRESENTATION- CONSERVATION - VALIDITE

Présentation : 1 flacon de 50 ml.

Oznaczenie Nr kat.

Salmonella typhi Antigen O (TO) 63402 Salmonella typhi Antigen H (TH) 63312

Salmonella typhi Antigen Vi 63572

Salmonella paratyphi A Antigen O (AO) 63412

Salmonella paratyphi A Antigen H (AH) 63322

Salmonella paratyphi B Antigen O (BO) 63422 Salmonella paratyphi B Antigen H (BH) 63332

Salmonella paratyphi C Antigen O (CO) 63432

Salmonella paratyphi C Antigen H (CH) 63342

Salmonella typhimurium Antigen H (TMH) 63542

Salmonella typhimurium Antigen H (ENH) 63272

Conservation : à + 2-8 °C.

Validité : jusqu'à la date de péremption indiquée sur le coffret (y compris après ouverture).

4- PRECAUTIONS D'UTILISATION

La qualité des résultats est dépendante du respect des bonnes pratiques de laboratoire suivantes :

Avant utilisation, laisser tous les réactifs atteindre la température ambiante (+18-30°C). Ne pas utiliser de réactifs après la date d'expiration.

Utiliser une verrerie parfaitement lavée et rincée à l'eau distillée ou de préférence du matériel à usage unique.

Utiliser un cône de distribution neuf pour chaque échantillon.

CONSIGNES D'HYGIENE ET SÉCURITÉ :

Porter des gants à usage unique lors de la manipulation des réactifs.

Ne pas pipeter à la bouche.

Considérer le matériel directement en contact avec les échantillons comme des produits contaminés.

Eviter les éclaboussures d'échantillons ou de solution les contenant.

Pour connaître les recommandations liées aux risques et les précautions relatives à certains produits chimiques contenus

dans ce kit, consulter le(s) pictogramme(s) figurant sur les étiquettes et les informations fournies à la fin des instructions

d'utilisation. La fiche technique de sécurité est disponible sur www.bio-rad.com. 2

5- ÉCHANTILLONS

1. Les tests sont effectués sur des échantillons de sérum prélevé sur tube sec uniquement.

2. Respecter les consignes suivantes pour le prélèvement, le traitement et la conservation de ces échantillons :

- Prélever un échantillon de sang selon les pratiques en usage. - Laisser le caillot se former complètement avant centrifugation. - Conserver les tubes fermés. - Après centrifugation, extraire le sérum et le conserver en tube fermé.

- Les échantillons seront conservés à +2-8°C si le test est effectué dans les 24 heures.

- Si le test n"est pas effectué dans les 24 heures, ou, pour tout envoi, les échantillons seront congelés à -20°C (ou plus

froid).

- Il est conseillé de ne congeler / décongeler les échantillons qu'une fois seulement. Les échantillons devront être

soigneusement homogénéisés (vortex) après décongélation avant le test.

3. Les interférences liées à une surcharge en albumine, lipide, hémoglobine et bilirubine n'ont pas été testées.

4. Ne pas chauffer les échantillons.

6- MODE OPÉRATOIRE

Ⱥ. MATÉRIEL NÉCESSAIRE NON FOURNI

Eau physiologique

Tubes à hémolyse

Incubateur ou bain-marie

Gants à usage unique

Pipettes, multipipettes, automatiques ou semi-automatiques, réglables ou fixes pouvant distribuer de 10 à 1000 µl et 1, 2 et

10 ml

B. TECHNIQUE CLASSIQUE A L'ETUVE A 37°C

1. Diluer les échantillons à tester au 1/10, 1/20, 1/40, 1/80 et 1/160 dans de l'eau physiologique.

2. Répartir dans une série de tubes et pour chaque suspension antigénique :

- 0,1 ml de chaque dilution de sérum - 0,9 ml de la suspension

La dilution finale des échantillons est alors de 1/100 à 1/1600 pour chaque suspension antigénique.

3. Incuber les tubes 2 heures à l'étuve ou au bain-marie à 37°C.

4. A la fin de l'incubation, lire les tubes ayant reçu les suspensions H. L'agglutination H, floconneuse, facilement dissociable (ne

pas agiter trop brusquement les tubes) est apparente si le sérum contenait des agglutinines anti-H correspondant à l'une des

suspensions.

5. Laisser les tubes ayant reçu les suspensions O jusqu'au lendemain, soit environ 24 heures, à température ambiante (18-

30°C).

6. Le lendemain, lire les tubes ayant reçu les suspensions O. L'agglutination O est fine, granulaire, difficilement dissociable.

Faire, de préférence, la lecture au-dessus d'un miroir concave.

C. TECHNIQUE RAPIDE PAR CENTRIFUGATION

1. Faire deux dilutions des sérums à tester

- Sérum 0,2 0,1 - Eau physiologique 1,8 1,9 - Dilution obtenue 1/10 1/20

2. Préparer un portoir de 16 petits tubes à hémolyse sans collerette.

N°TUBES 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Sérumau

1/20 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1

Sérumau

1/10 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1

Rajouter dans

chaque tube

0,9 ml des

suspensions TO TO TH TH AO AO AH AH BO BO BH BH CO CO CH CH

Dilutions

terminales 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200

3. Centrifuger 5 minutes à 3000 tours/minute pour faire sédimenter la suspension bactérienne.

4. Remettre le culot en suspension, par une chiquenaude sur le fond du tube. Si la suspension redevient homogène, le résultat

est négatif. Si des agglutinats sont facilement visibles à l'oeil nu, le résultat est positif.

En présence d'une agglutination, par exemple avec les suspensions TO et TH au 1/200

ème

alors que tout est négatif, recommencer l'opération avec des dilutions au 1/40

ème

, 1/80

ème

et 1/160

ème

du sérum à tester, afin de déterminer son titre ; ne

procéder à ce 2ème test que pour les suspensions ayant agglutiné, dans l'exemple TO et TH. Les titres finaux seront 1/400,

1/800, 1/1600.

Remarque : la morphologie des agglutinats est moins différenciée que par la méthode classique.

3

7- INTERPRETATION DES RESULTATS

Dans les fièvres typhoïdes ou paratyphoïdiques, les agglutinines anti-O apparaissent vers le 8

ème

jour de la maladie,

atteignent un titre moyen de 1/400 et disparaissent rapidement après la guérison clinique. Les agglutinines anti-H

apparaissent entre le 10

ème

et le 12

ème

jour, atteignent un titre moyen de 1/800 à 1/1600, baissent dans les semaines

suivants la guérison clinique et persistent des mois, voire des années à un titre moyen de 1/100 à 1/200.

Après injection d'un vaccin TAB, il y a production d'agglutinines anti-O et anti-H à titres faibles. Les agglutinines anti-H

persistent parfois pour T, B et parfois A à des titres inférieurs à 1/200.

Dans les fièvres typhoïdes ou paratyphoïdiques traitées précocement par un antibiotique actif, les agglutinines anti-O, qui

normalement signent la maladie, peuvent ne pas apparaître. Le diagnostic ne pourra être évoqué que par l'apparition ou

l'augmentation significative du titre des agglutinines anti-H au cours de deux prélèvements espacés de quelques jours.

Exemples :en présence d'agglutinines anti-TO, le diagnostic d'une fièvre typhoïde à S. typhi à son début peut être évoqué ;

quelques jours plus tard, la présence d'agglutinines anti-TH dans un second prélèvement signe le diagnostic.

Si, dans ce cas, une agglutinine anti-H autre qu'anti-TH est détectée, il peut s'agir d'une infection à Salmonella ayant

uniquement l'antigène O commun avec Salmonella typhi. La salmonelle la plus fréquemment rencontrée possédant ces

caractères est Salmonella enteritidis. Pour confirmer ou infirmer l'hypothèse, il est nécessaire de rechercher l'agglutination d'une

suspension H de Salmonella enteritidis.

Dans le cas où la suspension BO seule est agglutinée, il est nécessaire de rechercher l'agglutination d'une suspension H de

Salmonella typhimurium.

8- SÉRODIAGNOSTIC VI

A) SUSPENSION

La suspension antigénique Vi est préparée à partir d'une souche de S. typhi O non agglutinable, traitée à l'alcool (destruction de

l'antigène H) et stabilisée par 5 g/l de chlorure de calcium.

B) TECHNIQUE

Identique à celle de la recherche des agglutinines anti-O avec les dilutions finales au 1/10

ème

, 1/20

ème

, 1/40

ème

C) RESULTATS

Les anticorps anti-Vi apparaissent tardivement après les anticorps anti-O et anti-H. L'intérêt de leur recherche réside dans le

dépistage des porteurs sains de bacilles d'Eberth lors d'enquêtes épidémiologiques ; néanmoins, seuls l'isolement et

l'identification de S. typhipermet d'affirmer l'état de porteur.

9- PERFORMANCES / CONTROLE QUALITE DU TEST

Les performances des coffrets Salmonella Serology sont contrôlées à l'aide du coffret Antiserum Salmonella polyvalent T, A, B,

C, Vi (code 61261) Antiserum Salmonella monovalent H: i (code 60161) et Antiserum Salmonella monovalent H:g,m(code

61121) comme suit :

Diluer le sérum agglutinant en eau physiologique au 1/100

ème

pour la recherche d'agglutinines anti-H, au 1/50

ème

pour la recherche d'agglutinines anti-O et 1/10èmepour la recherche d'agglutinines anti-Vi. L'incubation et la lecture sont faites dans les conditions indiquées ci- dessus par la technique classique. Observer les agglutinations correspondantes.

10- CONTROLE QUALITE DU FABRICANT

Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la

réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un

contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la

production et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant. 4

Bio-Rad

3, boulevard Raymond Poincaré

92430 Marnes-la-Coquette France

Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 2014/11

Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 881169

www.bio-rad.comquotesdbs_dbs27.pdfusesText_33

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