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COURS 8: HYBRIDATION MOLECULAIRES ET SONDES HYBRIDATION MOLECULAIRE. • L'hybridation moléculaire est la propriété que présente une molécule d'acide.
1 Chapitre III. HYBRIDATION MOLECULAIRE Lhybridation
L'hybridation moléculaire est l'association de 2 simples brins d'ADN (ADNs) par formation de liaisons H entre ces deux brins. On distingue les hybrides:.
Chapitre 7 - Hybridation des acides nucléiques : principes et
Pour plus de simplicité nous ne montrons ici qu'un seul brin de sonde marquée. Au cours du passage des molécules de sondes simple brin marquées au contact du
Cours de Biologie Moléculaire et Génie Génétique
Cours de Biologie Moléculaire et Hybridation d'ADN sur support solide : SOUTHERN BLOT ... Hybridation sur colonie de bactéries sur plage de lyse.
La PCR en temps réel: principes et applications
assay) hybridation de 2 sondes (HybProbes)
LHYBRIDATION MOLECULAIRE
L'HYBRIDATION MOLECULAIRE. 2-1/ La température de fusion de l'ADN : C'est une température appelée également températurede demi dénaturation (Tm) qui
la liaison chimique II: la forme des molécules et lhybridation des
La forme des molécules. • considère un atome central A
Les outils de génétique moléculaire Les techniques liées aux acides
Hybridation moléculaire. Southern Blot au cours d'une synthèse d'un fragment d'ADN de contrôler si l'appariement de la base qui vient d'être.
TD1: Hybridation moléculaire
TD1: Hybridation moléculaire. 1. Principe de l'hybridation ADN-ADN. 2. Hybridation de type Southern. Module 9: B. Brunel. Septembre 2007
Principe de lamplification par PCR
séparer les deux brins qui le composent une hybridation des amorces aux Risque de contamination de la PCR : au cours de l'expérience
Chapitre III HYBRIDATION MOLECULAIRE
Chapitre III HYBRIDATION MOLECULAIRE L’hybridation moléculaire est l’association de 2 simples brins d'ADN (ADNs) par formation de liaisons H entre ces deux brins On distingue les hybrides: • ADN-ADN = Homoduplex • ADN-ARN = Hétéroduplex Sondes nucléiques sont des séquences d'acides nucléiques simple brin (d'au moins 15
L’HYBRIDATION MOLECULAIRE
La règle stipule que le type d’hybridation est déterminer à partir de la valeur de : ? +?NL ? : la somme des liaisons que l’atome central peut former avec les autres atomes de la molécule ?NL: la somme des doublets non liants de l’atome central ? +?NL= 4 hybridation sp3 ? +?NL= 3 hybridation sp2
L’HYBRIDATION MOLECULAIRE
2-3-3/ Hybridation in situ (HIS): C’est une technique qui permet par l’utilisation de sondes de mettre en évidence et de repérer dans des cellules ou des tissus des séquences d'acides nucléiques connues Elle est très proche dans son principe du Southern et du Northern Blot et repose comme eux sur l'hybridation d'une sonde d'acide
TD4a Hybridation moléculaire - INRA
L’hybridation moléculaire de type Southern – ADN sur ADN (dénaturés) – ADN sonde marqué (radioactivité ou sonde froide) – Incubation à Tm - 20°C – Composition des tampons importante • Sel nécessaire pour neutraliser les phosphates • formamide éventuelle pour abaisser la température d’hybridation
HYBRIDATION MOLECULAIRE SONDES ENZYMES ET VECTEURS
I HYBRIDATION MOLECULAIRE : L’hybridation moléculaire repose sur le principe qu’un fragment ADN simple brin s’apparie à un autre fragment ADN en respectant rigoureusement les règles de complémentarité L’hybridation est réalisée entre une sonde dont la séquence est connue et un
Quels sont les différents types d’hybridation ?
2-3/ Les différents types d’hybridation : 2-3-1/ Hybridation en phase liquide :Les segments complémentaires sont placés dans une solution contenant un tampon et de la formamide. L’agitation thermique assure la liaison entre les fragments complémentaires. Cette température est généralement inférieure de 15°C à la Tm de l’ADN concerné.
Comment calculer la température d’un hybride ?
Cette température est généralement inférieure de 15°C à la Tm de l’ADN concerné. Les hybrides formés sont quantifiés selon trois méthodes : 1. les méthodes spectrophotométriques (la diminution en DO à 260nm est due à l’augmentation du taux des hybrides) 2. la technique de la nucléase S1 (digestion des ADN et ARN simples brins) 3.
Qu'est-ce que la hybridation in situ ?
Hybridation in situ (HIS) C’est une technique qui permet, par l’utilisation de sondes, de mettre en évidence et de repérer, dans des cellules ou des tissus, des séquences d'acides nucléiques connues.
Quelle est la différence entre une molécule et une orbitale atomique hybride ?
Orbitales atomiques hybrides 3 Dans une molécule, le nuage électronique autour de l’atome s’adapte à son environnement et diffère de celui de l’atome isolé. Les orbitales atomiques se déforment.
![TD1: Hybridation moléculaire TD1: Hybridation moléculaire](https://pdfprof.com/Listes/18/33886-18BB-TD1-hyb-impr2007.pdf.pdf.jpg)
TD1: Hybridation moléculaire
1. Principe de l'hybridation ADN-ADN2. Hybridation de type
Southern
Module 9: B. Brunel
Septembre
20072 (1) dénaturation(2) r enaturation
1. Principe de l'hybridation ADN-ADN:
3 (1) dénaturation: "Force" de l'hybridation: Tf = t°C à laquelle 50% des doubles hélices sont associés courbe de fusion de l'ADN 100%50
0 70
50
90
%d'hyperchromacie
Temperature
o CTf (=Tm)
4Exercice 2
5 Tm: grandeur thermodynamique décrivant un état d'équilibreCalcul du
Tm (formule empirique) Tm = 81,5 + 16,6 log [Na ] + 0,41 (%[G+C])600/n -
0 ,61 (% formamide) pour n>100, 30%<%(G+C)<75%, 0%<% formamide<50%,0,01M<[Na+]<1M, n = longueur de l'ADN
Tm décroît en moyenne de 1,5°C pour 1% de bases différentes entre les deux chainesExercice 3
6E. coli
DNA, which is 50% G-C,has a T m of 69 o C 5070
60
80
Tm dépend
de: [cation] ----> Na+ teneur en G-C taille de la molécule % en formamide crée des liaisons H avec bases de l'ADN et entre e n compétition a vec le 2ème brin ----> dénaturation plus rapide avec augmentation du % en f o rmamide 7 (2) renaturation de l'ADN: obéit aux mêmes lois thermodynamiques: < T mplus lente: dépend de la probabilité de rencontre des molécules simple brin complémentaires dans le milieu réactionnel.
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