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2-destruction chimique des membranes biologiques 3-précipitation de l'ADN extrait (apparition sous une forme non soluble) II-Manipulation 1-Matériel et
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Isoler l'ADN de tissus végétaux Niveau : 2ème et 3ème degré Expérience présentée au stand (?) Matériel nécessaire : ? 1 beau Kiwi (? ± 100 g)
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But: Détruire les fibres du fruit Le sel sert à isoler l'ADN d'autres molécules Vous devez obtenir une pâte homogène 3) Ajoutez une cuillère à
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Etape 2: Ajouter 10 ml (équivalent de 2 cuillères à café) de surfactant (liquide vaisselle) et mélan- ger en tournant lentement Le mélange devient visqueux
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Poireaux kiwis oignons tomates bananes feuilles et Découper de fines lamelles de fruits constituées de plusieurs couches de briques (cellules) et
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le phosphore la potasse et le soufre deviennent des molécules d'ARN ADN des graisses distinguer le degré de maturité d'un fruit grâce à la couleur
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L'ADN de Jeanne et celui de son père montrent une bande correspondant au gène SRY Le fruit le plus riche en vitamine C est le kiwi
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techniques ont permis de “lire” les gènes sur l'ADN et de les comparer les kiwis oiseaux marcheurs d'Australie ne volent pas mais possèdent des ailes
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disciplines/svt/file/TS_Fich-antheres-lis doc – Les autres clichés de méiose (doc 2 et 3) sont tous deux issus d'articles scientifiques (voir le fichier
EXTRAIRE L’ADN DU KIWI - Science on Stage
et placer le bécher dans le bain-marie maintenu à 60° C pendant 15 min 5 Retirer le bécher du bain-marie et le placer dans un récipient contenant de l’eau glacée (eau + glaçons) pendant 5 min 6 Filtrer la mixture à travers la passoire et jus en écrasant la mixture avec le pilon 7 Placer ce premier filtrat dans un entonnoir
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L’extraction de l’ADN est réalisée sur un végétal le kiwi dont les cellules sont riches en ADN La manipulation consiste à récupérer l’ADN contenu au cœur des cellules Schéma d’une cellule végétale Noyau ? renferme l’ADN Le noyau est délimité par une enveloppe nucléaire (double membrane) Membrane plasmique
EXTRAIRE L'ADN DU KIWI.
Isoler l'ADN de tissus végétaux.
Niveau : 2
ème
et 3ème
degréExpérience présentée
au stand ...(?)Matériel nécessaire :
1 beau Kiwi ( ± 100 g)
1 filtre à café
1 mortier et son pilon
2 béchers ou récipients
en verre ou en plastique (250 ml)1 erlenmeyer
1 entonnoir
une petite passoire1 thermomètre
1bain-marie
pince en bois2 tubes à essai
1 verre de montre
Produits ch
imiques Sel de cuisine : (NaCl ± 3 g)Ethanol glacé
Eau déminéralisée
Détergeant vaisselle
(10 ml)HCl 1 N (t° ambiante)
Réactif de Schiff
Sécurité
Les précautions d'usage en
T.P seront adoptées avec le
bain- marie et la verrerie. Le port de lun ettes et de gants de protection est indispensable pour manipuler l'acide chlorhydrique (HCl) qui est corrosifProtocole à suivre
1. Eplucher le kiwi,
couper la pulpe en petits morceaux et déposer dans le mortier.2. Préparer le milieu
d'extraction dans un bécher ou un récipient de 250 ml : dissoudre leNaCl dans 20 ml d'eau
déminéralisée (en chauffant doucement).Ajouter le liquide de
vaisselle. Amener à 100 ml avec de l'eau déminéralisée.3. Verser le milieu
d'extraction dans le mortier et broyer avec le pilon jusqu'à obtenir une panade.4. Verser cette mixture
dans un bécher (250 ml) et placer le bécher dans
le bain-marie maintenuà 60° C pendant 15 min.
5. Retirer le bécher du
bain-marie et le placer dans un récipient contenant de l'eau glacée (eau + glaçons) pendant 5 min.6. Filtrer la mixture à
travers la passoire et extraire un maximum de jus en écrasant la mixture avec le pilon.7. Placer ce premier filtrat
dans un entonnoiréquipé d'un papier filtre
(à café), plié de façon adéquate et filtrer.8. Verser 10 ml de ce
second filtrat dans un tube à essai propre.9. Verser l'éthanol glacé,
sortant du congélateur dans un tube à essai propre et refroidi (dans le frigidaire).10. Verser do
ucement l'éthanol glacé le long de la paroi du tube à essai contenant le filtrat.11. Recouvrir ce tube d'un
film étirable et incliner lentement le tube plusieurs fois jusqu'à ce que l'ADN, insolubleNovembre 2008 Pour SonS.Be : Bernadette Lourtie
NSC©SonS.Be
Science on Stage 1 & 2 BIOLOGIE dans l'éthanol, précipite et forme une pelote blanc nacré qui flotte entre 2 couches.12. Avec une tige en verre
(agitateur) ou en plastique ou encore avec une pipettePasteur, prélever le
précipité et le placer dans un verre de montre.13. Colorer selon la
technique de Feulgen qui colore spécifiquement l'ADN :Rincer le précipité à
l'eau déminéralisée pendant 10 s. et absorber l'eau avec du papier absorbant.Ajouter HCl 1N à t°
ambiante, ensuite rincerà nouveau à l'eau
déminéralisée plusieurs fois.14. Ajouter quelques
gouttes du réactif deSchiff.
Vous observez
Le précipité se colore en
rose à magenta. Il s'agit bien de l'ADN du kiwi.Que s'est-il passé ?
Dans cette expérience, Le
broyage détruit les parois cellulosiques des cellules végétales. Le détergent vaisselle détruit les membranes phospholipidiques (cellulaire et nucléaire). Le sel (NaCl) précipite l'ADN enroulé autour des histones de nature protéique (phénomène du " salting out »). Le chauffage au bain-marie (60°) détruit les enzymes qui digèrent l'ADN.Dans cette expérience, il est
inutile d'ajouter une protéase pour détruire les protéines car le kiwi contient ses propres protéases.Le papier filtre de laboratoire
a des pores trop petits pour laisser passer l'ADN et c'est la raison pour laquelle on utilise des filtres à café dont les pores sont plus grands.L'éthanol glacé glisse
lentement le long de la paroi du tube et flotte à la surface tandis que l'ADN flotte à l'interface éthanol - filtrat.L'ADN est insoluble dans
l'éthanol glacé.Commentaires et
photos (B. Lourtie)Approfondir le sujet
Refaire cette expérience avec
une banane en ajoutant un comprimé de déprotéinisation (pour le nettoyage de lentilles de contact) au second filtrat et laisser reposer quelques minutes. Qu'observez-vous ?Technique de labo.
Préparation du réactif de Schiff
pour la méthode de coloration de Feulgen1. 200 cc d'H
2O bouillante
2. dissoudre de Fuschine
basique dans l'eau bouillante, agiter et laisser refroidir à 50° C.3. Filtrer
4. Ajouter 30 ml d'HCl 1N
5. Ajouter de bisulfite de
potassium (K 2 S 2 O 56. Laisser décolorer pendant
24 h à l'obscurité.
7. Purifier avec du " noir
animal ».8. Filtrer et conserver au
réfrigérateur, à l'obscurité dans un récipient étanche.Novembre 2008 Pour SonS.Be : Bernadette Lourtie
NSC©SonS.Be
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