[PDF] LE MILIEU UREE-INDOLE Urée. 2. Lecture d'

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1ère STL Fiche technique n°26

LE MILIEU UREE-INDOLE

1. Intérêt

Ce milieu permet de mettre en évidence les caractères suivants :

SUpVHQŃH G·XQH uréase

SUpVHQŃH G·XQH tryptophanase

SUpVHQŃH G·XQH tryptophane désaminase (TDA)

FH PLOLHX HVP XPLOLVp SRXU O·LGHQPLILŃMPLRQ GHV HQPpURNMŃPpULHs (bacille gram -, oxydase -).

2. Composition Milieu synthétique

Composant Quantité (g/L) Rôle

Urée 2 IHŃPXUH G·XQ ŃMUMŃPqUH NLRŃOLPLTXH VXNVPUMP GH O·XUpMVH L-tryptophane 0,3 IHŃPXUH G·XQ ŃMUMŃPqUH NLRŃOLPLTXH MŃLGH MPLQp SHUPHP OM recherche GH O·LQGROH HP GH OM 7G$

Chlorure de sodium 0,5

Source de sels minéraux

Maintien de la pression osmotique

Dihydrogénophosphate

de potassium 0,1

Hydrogénophosphate

de potassium 0,1

Rouge de phénol 0,0025 Indicateur de pH

pH 7

3. Principe

recherche GH O·XUpMVH L·XUpMVH GpJUMGH O·XUpH VHORQ OM UpMŃPLRQ VXLYMQPH : Urée + H2O AE 2 NH4+ + CO32-

Les ions CO32- vont entraîner une forte alcalinisation du milieu qui sera révélée par un virage

GH O·LQGLŃMPHXU GH S+ OH URXJH GH Shénol) à sa teinte basique (rouge). UHŃOHUŃOH GH OM SURGXŃPLRQ G·LQGROH PLVH HQ pYLGHQŃH GH OM PU\SPRSOMQMVH La tryptophanase hydrolyse le tryptophane selon la réaction suivante : Tryptophane + H2O ĺ indole + acide pyruvique + NH3

I·indole forme un complexe coloré en rouge HQ SUpVHQŃH G·XQ UpMŃPLI : le réactif de Kovacs.

recherche de la tryptophane désaminase La TDA dégrade le tryptophane selon la réaction suivante : Tryptophane + H2O ĺ acide indole pyruvique + NH3

I·MŃLGH LQGROH S\UXYLTXH IRUPH XQ précipité marron foncé HQ SUpVHQŃH G·XQ UpMŃPLI : le

chlorure de fer en solution acide.

4. Ensemencement

Ensemencer avec quelques gouttes de suspension bactérienne ou avec une colonie prélevée à

O·MQVH VXU XQ PLOLHX Volide.

Incubation 24 heures à 37°.

1ère STL Fiche technique n°26

5. Lecture

Caractère

recherché Observation Interprétation Conclusion

Uréase

(lecture après

24 heures

G·LQŃXNMPLRQ

Milieu rouge

Alcalinisation du milieu

due à la dégradation de

O·XUpH

IM NMŃPpULH SRVVqGH O·XUpMVH

Elle est dite uréase +

Milieu orangé

(inchangé)

3MV G·MOŃMOLQLVMPLRQ GX

milieu

IM NMŃPpULH QH SRVVqGH SMV O·XUpMVH

Elle est dite uréase -

Après avoir effectué la lecture, séparer le milieu urée indole en deux (prélever une partie du milieu et le

transvaser dans un tube à hémolyse propre) puis réaliser les tests suivants :

1er tube : UHŃOHUŃOH GH OM SURGXŃPLRQ G·LQGROH :

Ajouter 3 gouttes du réactif de Kovacs et effectuer la lecture sans agiter le milieu

Indole

$SSMULPLRQ G·XQ anneau rouge

3UpVHQŃH G·LQGROHB

Le tryptophane a donc

été hydrolysé

IM NMŃPpULH M SURGXLP GH O·LQGROH

Elle est dite indole +

I·MQQHMX UHVPH

orangé $NVHQŃH G·LQGROH

IM NMŃPpULH Q·M SMV SURGXLP G·LQGROH

Elle est dite indole -

2ème tube : recherche de la tryptophane désaminase (TDA) :

Ajouter 3 gouttes du réactif (= chlorure de fer III en solution acide) et effectuer la lecture TDA

Coloration

marron foncé

3UpVHQŃH G·MŃLGH LQGROH

pyruvique.

Le tryptophane a été

désaminé.

La bactérie possède la tryptophane

désaminase.

Elle est dite TDA +

Coloration inchangé

$NVHQŃH G·MŃLGH LQGROH pyruvique

La bactérie ne posssède pas la

tryptophane désaminase.

Elle est dite TDA -

Milieu

Urée-Indole

24h

G·LQŃXNMPLRQ

Recherche de

l'uréase

Recherche de

la TDA

Recherche de

la tryptophanase

SURGXŃPLRQ G·LQGROH

Ajout de chlorure de

fer III

Ajout de réactif de

Kovacs

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