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Université Batna 2
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Département de Microbiologie et de Biochimie
de purification des enzymesMaster1Microbiologie Appliquée
Chargé de cours: Mme.BENAMMAR Leyla
2020-2021
1.Extraction des enzymes
désignedesépareruneenzyme composédontellefaitpartie. cellulaire. estspécifiqueauxenzymes intracellulaires, passerpar.1.1. Choix de la techniques
Plusieurschoixpourdes
enzymes.Cechoixcefaitenfonctionde:Typedecelluleutilisée.
Lalocalisationde.
disponible.Mécaniques
Physiques
Chimiques
Enzymatiques
physiquesA.Chocosmotique
Un choc osmotique peut suffire à briser la membrane cellulaire de cellules fragiles, avec un minimum de dommages. Les cellules sont incubées dans une solution hypo-osmotique = hypotonique. et finit par causer une rupture de la membrane plasmique. est de cette technique. libérée. chimique tampon de lyse : rompre les cellules.Lestamponsdelysecontiennent:
lysat. enzymatique La lyse enzymatique permet la destruction de la paroi par des enzymes.A.Lelysozyme
tampon(leTris-EDTA): Le Tris est réputé être un agent perméabilisant des membranes externes.B.Lalyticase
desparoisdeslevures. mécaniqueA. Homogénéisateur de type Dounce
unappareilenverre borosilicaté.Lepassagedescellulesdans
extrêmementexigu entrelepistonetlaparoi internedutubecauseleur ruptureB. Homogénéisateur de type Potter-Elvehjem
undispositifutilisé pourperturberlestissus (animalouvégétal).Unpistoncylindriqueen
téflon(PTFE)surunetige enacierinoxydabletourne dansuntubeenverre borosilicatébienajusté (0,1à0,15mm).C. Sonication
introduitedanslasuspensiondecellules.2.Purificaion des enzymes
enlever toutes les impuretés extrait brut plusieurs techniques successives et/ou complémentaires.Leurtaillemoléculaire;
Leursolubilité;
leurchargeélectrique;Leursdifférencescaractéristiques.
solubilité -Dialyse -Filtrationsurmembrane -Filtrationsurgel -CentrifugationetUltracentrifugation. -Chromatographiemoléculairesurgel. -Electrophorèsesimple -Chromatographieéchangeuse biomolécules -Chromatographie desprotéines -Chromatographiedepartage3. Forme et techniques de conservation des enzymes
1.Concentréliquidestabilisé
2.Solide(poudreouparticules)
effetde:Stabiliser l'enzyme
Faciliter l'étape dedéshydratation
partir de la forme liquide); Préservation contre la contamination microbienne ;Eviter la précipitation
Optimisation de critères esthétiques.
atomisation,soitparlyophilisation. d'enzymed'agentsprotecteurs: aminéslorsdelalyophilisation. liquides:Desdisaccharides:lactose.
Dessels:NaCl,MgSO4.
de:Benzoatedesodium(E212),
Sorbatedesodium(E201),
Ascorbatedesodium(E301),
cequipermetunebonneconservationde.4. Règles de base pour la manipulation
d'une enzyme préalable). diluéespourunstockageàlongterme. manipulationpeutruinerleflaconentier. utiliséessurlapaillassedulaboratoire. contamination. flaconinitial.Bon courage !
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