[PDF] LE MICROSCOPE OPTIQUE - Principes





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avantage que la chaleur émise par la source de lumière ne traverse pas l'objet. Les microscopes Microscope de lumière réfléchie (microscope optique).



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de faible épaisseur Ce microscope il a l’avantage de donner une vue générale des cellules ou des tissus et aussi de permettre l’examen de cellules vivantes ; mais le pouvoir séparateur du microscope optique ne peut dépasser 02 ?m le grandissement étant au maximum de 1000 1 Présentation du microscope optique :



Principes et utilisations de base du microscope

base d'optique instrumentale (optique géométrique et diffraction) sur lesquels sont fondés tous les systèmes de microscopie1 Un deuxième grain présente plus spécifiquement les nombreuses techniques permettant d'améliorer le contraste des objets observés A Structure du microscope 1 Structure du microscope



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Elle permet de rendre visible les éléments invisibles à l’œil nu soit par leur taille soit par leurs couleurs La microscopie est un ensemble de techniques d’imagerie des objets de petites dimensions L’unité de mesure utilisée en microscopie est le µ µm nm et A °



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Quels sont les avantages d’un microscope optique ?

Elle consiste à grossir l’image optique d’un objet de petites dimensions en utilisant un microscope optique. Cet appareil utilise des lentilles optiques pour former l’image en contrôlant le faisceau lumineux et pour illuminer l’échantillon. Elle permet l’observation de la structure globale des cellules eucaryotes.

Qu'est-ce que le microscope optique ?

Le microscope optique permet d’observer au niveau cellulaire des êtres vivants ou des échantillons fixes (coupes de tissus). Il est utilisé en science des matériaux, ainsi qu’en géologie. Les tissus sont colorés afin de les voir clairement. Les colorations de Gram sont utilisées pour déterminer si les bactéries ont été manipulées correctement.

Quels sont les différents types de microscopie optique ?

Figure 1 : Schéma annoté d’un microscope On distingue plusieurs types de microscopie optique : - La microscopie optique à fluorescence - La microscopie optique à lumière transmise - La microscopie optique à contraste de phase - La microscopie confocale.

Comment fonctionne le microscope électronique ?

L’objet est bombardé par un faisceau d’électrons. Le microscope électronique utilise des lentilles électrostatiques et des lentilles magnétiques pour former l’image. Le ME révèle l’ultrastructure des cellules eucaryotes et permet une observation plus poussée de la structure procaryote.

LE MICROSCOPE OPTIQUE - Principes 11

LE MICROSCOPE OPTIQUE

Principes

Marc Moreau, Directeur de recherche CNRS

Catherine Leclerc, Chargé de recherche CNRS

Centre de Biologie du Développement, UMR 5547, Université Paul Sabatier, 118 route de Narbonne,

31062 Toulouse CEDEX 09

marc.moreau@univ-tlse3.fr catherine.leclerc@univ-tlse3.fr de centrage des pièces optiques (fig.1).

Figure 1 ͗ coupe d'un microscope moderne

Il existe des microscopes dits droits (objectif pointant vers le bas) et des microscopes dits inversés

(objectifs pointant vers le haut).

1. Principe :

L'objet est transformĠ en une image rĠelle ă l'aide d'un objectif. L'image se forme au plan focal d'un

oculaire qui va pouvoir en donner ensuite une image virtuelle située à l'infini (fig2). On peut déduire

oculaires mais aussi des distances qui séparent les composants.

Initialement, pour la plupart des constructeurs, la longueur de tube était de 160 mm, sauf Leica qui

utilisait des tubes de 170 mm et certains microscopes métallographiques avec des tubes de 250 mm.

L'image se forme ă 14 mm du plan focal de o[oculaire. Le pas de vis et le diamètre de la monture

étaient fixés et universels. Ainsi, on pouvait passer un objectif d'un microscope d'une marque à un

microscope d'une autre marque.

Toutefois, depuis quelques années les constructeurs ont mis sur le marché les optiques dites à

l'infini. Ces objectifs ne forment plus d'image en un plan dĠfini mais ă l'infini. Le faisceau sortant de

rajouter des lentilles additionnelles de correction. Cependant, les tailles de montures et de pas de vis

ont été modifiés rendant impossible le transfert des objectifs d'une marque à l'autre. 12

2. Mécanique

Le microscope comporte :

une base une potence qui supporte le revolver porte-objectif, le tube porte-oculaires la platine qui se déplace dans deux dimensions le support du condensateur

Des systèmes de crémaillères permettent de réaliser une mise au point rapide et fine. Différentes

mécaniques existent pour réaliser ces réglages.

3. Optique

Les objectifs sont les éléments les plus critiques d'un microscope. Ils déterminent sa qualité optique.

Un objectif est un système à lentille convergente plus ou moins complexe avec une distance focale

courte, qui projette l'image agrandie et inversée de l'échantillon vers le plan focal inférieur de

l'oculaire, de sorte que celui-ci puisse "voir" et grossir encore l'image.

Les objectifs sont placés dans une tourelle porte-objectifs ou tourelle revolver qui comporte six ou

sept objectifs avec des grossissements différents. En général les caractéristiques sont écrites sur

l'objectif (fig.3).

Il existe un certain nombre de constantes :

dans le système optique) le grandissement contraste de phase ou pas immersion 13 longueur du tube

épaisseur de la lamelle couvre-objet.

O.N = n sin

Cette expression indique la largeur maximale du cône de lumière pénétrant dans la lentille. On peut

voir que l'ouverture numérique est directement proportionnelle à l'indice de réfraction n du milieu

situé entre l'échantillon et la lentille de l'objectif (fig.4).

Pouvoir séparateur- Résolution

Le pouvoir séparateur est la capacité de distinguer deux points particules d'un diamètre pouvant atteindre 0.1 µm. Toutefois,

OBJECTIF

Figure 5

5 µm

0,1 µm

14

elles doivent être séparées entre elles d'une distance d'au moins 5 µm. Le pouvoir séparateur de

L'image reconstruite ă traǀers le

pas constituée de points mais de figures circulaires de diffraction (figure ci-contre). La région comportant 84 % de l'Ġnergie lumineuse est appelĠe ]quotesdbs_dbs33.pdfusesText_39
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