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La capacitation est accomplie par les spermatozo?s durant l'ascension du tractus génital (en contact avec les sécrétions de celui-ci). Il s'agit d'un processus de maturation physiologique de la membrane des spermatozo?s ; c'est une condition préalable à l'étape suivante, la réaction acrosomique.Quand se fait la capacitation ?
La capacitation est la phase finale du développement de spermatozo?s, nécessaire à la fécondation. In vivo, elle survient après l'éjaculation, lorsque les spermatozo?s entrent en contact avec les sécrétions du tractus génital féminin.- La capacitation correspond à un ensemble de modifications membranaires et intracellulaires du spermatozo? dans les voies génitales femelles qui provoquent sa maturation pour pouvoir se fixer à la zone pellucide et opérer sa réaction acrosomique pour féconder l'ovocyte.
UniversitédeMontréal
/i//3yq ParMarie-FranceLusignan
DépartementdeBiochimie
FacultédeMédecine
Envuedel'obtentiondugradede
MaîtreèsSciences(M.Sc.enBiochimie
Avril2006
©Marie-FranceLusignan,2006
I u2 7 Li '9Université
deMontréalDirectiondesbibliothèques
AVISNOTICE
researchpurposes. theauthor'spermission. contentfromthedocument. 11UniversitédeMontréal
Facultédesétudessupérieures
Cemémoireintitulé:
Inductïondelacapacitation
desspermatozoïdesépidîdymaîres
porcinsparpBlPrésentépar:
Marie-France
Lusîgnan
StephenMichnick,Ph.D.
Présïdent-Rapporteu
rPuttaswamyManjunath,
Ph.D.DirecteurdeRecherche
FrançoisDubé,Ph.D.
Membredujury
liiRésumé
Lacapacitationdesspermatozoïdes
estunprocessuscomplexedontles desfacteurs afind'élaborerun capacitationdesspermatozoïdes rapideetefficace(chromatographieA2surlacapacitation
desspermatozoïdes porcins.Desspermatozoïdes capacitationdesspermatozoïdes aétédéterminée enévaluantlacapacitédes spermatozoïdesàsubirlaréactiondel'acrosome
suiteàl'ajoutdel'ionophore CTC. decapacitationdes spermatozoïdesépididyrnaires pBloudeBSP-A1/-A2. (spermatozoïdespré-incubés sontpré- avecp31ouBSP-Al/-A2 surtyrosinedesprotéinesdes spermatozoïdes.BSPetleurshomologues
surlacapacitationdesspermatozoïdes. ivAbstract
understood.Thecharacterization offactorspiesentinboarserninalplasmais toimproveboarartificialinsemination. integritywasassessedbyCTCcoloration. donotinducetyrosine phosphorylation VTabledesmatières
Résumé
.iiiAbstract
ivTabledesmatières
yListedesTableauxetFigures
viiiListedesabréviationsetdessigles
ixRemerciements
xii1.Introduction
11.LLesspermatozoïdes
11.1.1.Laspermatogenèse
etlasperrniogenèse I1.1.2.Structuredesspermatozoïdes
2 31.2.Leplasmaséminal
51.3.L'éjaculation
6 61.4.1.Capacitationinvitro
7 8 9 10 101.4.7.Hyperactivation
desspermatozoïdes 121.4.8.Réactiondel'acrosome
121.5.RôleduP5surlacapacitation
131.5.1.LesprotéinesmajeuresduP5bovin
14 141.5.1.2.StructuredesprotéinesBSP
16 16 16 19 vi1.6.Leporc.
201.6.1.Systèmereproducteurduporc
211.6.2.LesprotéinesduPSdeporc
211.6.2.1.Lesspermadhésines
211.6.2.2.LaprotéinepBl
221.6.3.1.RôleduHC03
2525
1.6.3.3.RôledesGAGs
261.6.5.Laproductionporcine
2$1.7.Objectifsduprojet
292.MatérieletMéthodes
312.1.Matériel
312.2.Méthodes
312.2.1.Milieuxdeculture
3132
2.2.4.Viabilité
3333
34
2.2.$.Statistiques
343.Résultats
35Devetopment
353.2.Résultatscomplémentaires
66vii
PSporcin
66préliminaires) 66
69
69
4.Discussion
7274
4.2.1.ModuléeparlaprotéinepB1
7476
77
7$
4.6.Applications
$64.7.Perspectives
884.8.Conclusions
895.Bibliographie
91viii
ListedesTableauxetFigures
figure1:Structured'unspermatozoïde 2Figure2:Structured'untesticule
4Figure3:Systèmereproducteurduporc
5Figure4:Réactiondel'acrosome
13Figure5:StructuredesprotéinesBSP
15 protéinesBSP 18 desprotéinesBSPetcelledep31 24parlesprotéinestotalesduPSdeporc 68
70
71
protéineBSP-A1/-A2 77
p3183 ix
Listedesabréviationsetdessigles
¾Pourcentage
Environ
Micro (106Microgramme
piMicrolitre rMMicromolaireDegrécelsius
ADNAcidedésoxyribonucléique
ADNcAcidedésoxyribonucléique
complémentaireAMPcAdénosinemonophosphatecyclique
ATPAdénosinetriphosphate
Vesicleproteins»
Plasmaproteins»
Ca2Calcium
CMMilieucapacitant
CTCChlortétracycline
CtlContrôle
FSHHormonefolliculo-stimulante
"FollicleStimulatingHormone» gGrammeGAGGlycosaminoglycan
proteins» hHeureHCJAcidehydrochiorique
HC03Bicarbonate
X proteins»TAInséminationartificielle
IgGImmunoglobuline
GKPotassium
KDaKiloDalton
KLHKeyholeLimpetHemocyanin
MMolaire(mole/litre
mMètre mgMilligramme minMinute mlMillilitre mMMillimolaire nNombrederépétitionNaSodium
NCMMilieunoncapacitant
mnNanomètreFactor»
pBlProtéinedeporc1"proteinboar1»PIPointisoélectrique
PKAProtéineKinaseA
P5Plasmaséminal
labeledPisumsativumagglutinin» xi protein»PVFDFluoruredepolyvinyldiène
PRIADosageradioimmunologique
"RadiolmmunoAssay»ROSEspècesréactivesdel'oxygène
rpPhaseinverse"ReversePhase» proteins» dodécylsuiphate Gel lectrophoresis» secSecondeTFAAcidetrifluoroacétique
yVolume xiiRemerciements
enmoietàmieuxgérermonstress. questions.1.Introduction
nouvelêtre. femelle.1.1.Lesspermatozoïdes
reproductive suiteàlamitose,une celluleconventionnelle enspermatozoïde suiteàunprocessusdemétamorphose (spermiogenèse)[1].Lesspermatogonies proviennentdescellulesgerminales quientrentenméiose secondairesformerontdes [1].La1.1.2.Structuredesspermatozoïdes
Meinbi'aneplasimqtte
Membraiteaci.osornique
externeMembraiteiaosoiniqne
ùttente
Novait
Figure1:Structured'unspermatozoïde.
(ASchémad'unspermatozoïde.(3Lenoyauduspermatozoïde
ABActeront
Tête
Pit.c.r!.
coWbtX!erl t'n.li-oI,Acrosorne
Flagelle
z.::' 3 etl'ovocytelorsdelafécondationLeflagellefournitauspermatozoïde
laforcenécessairepoursedéplacerLapièceprincipaleestentourée
Cettecouchefibreuseest
Lacouchefibreusesertd'échafaudage
et/oula courbureduflagelle[4].Lesspermatozoïdes
lestesticules.Cesspermatozoïdes
nepeuventpasféconderunovocyte.Ils 4 (Figure2)[5].TubulesDoils
Épididyme
TubIes9minfôr
TunicaAIWgin
quisortentdestesticulesn'ontpasFigure2:Structured'untesticule.
51.2.Leplasmaséminal
mammifères[7].Figure3:Systèmereproducteurduporc.
glycolyse.Seminalvesicle
Prostate
Cowper's
g]andEpiddymis
IJOaf 61.3.L'éjaculation
n'ontpasàtraverserlevagin[8,9].Pendantlacapacitation,ilya
capacitationestlemieuxcaractérisé. aspectsdoiventêtreéclaircis. 71.4.1.Capacitationinvitro
telquel'albuminedesérum ti]. 2+ intracellulaire [241. plasmiqucdesspermatozoïdes (revuedans[6,25]). esttrèsvariableselonlesespèces, [31]etparla3-cyclodextrine[32]. suiteàl'effluxde 9 surtyrosine desprotéines[35]. capacitation[38,39].Chezlasouris,le
AMPc/PKA[35].
membrane[48]. cholestéroltelslesHDL[49-51,53-56]. 11 etaumoinsundes mg/mldurantl'oestrus[60]. 121.4.7.Hyperactivation
desspermatozoïdes desspermatozoïdes1.4.8.Réactiondel'acrosome
13Mernliraiieplas;mqtie -
]Iembrnne acrosoiniqtieterne1.5.Rô]eduPSsurlacapacitation
membraneacrosomiqueinterne. 14 l'héparinesurlespermatozoïde[82].1.5.1.LesprotéinesmajeuresduPSbovin
( - 65%)estsécrétéeparlesvésiculesséminalesetfaitpartiedelafamilledes protéinesacides[90]. 15ProtéinesBSP-A1/-A2
1 158descerclespleinsnoirs.
ProtéineBSP-A3
ProtéineBSP-3OIffla
161.5.1.2.StrncturedesprotéinesBSP
95].17 1051.
d'incubationaveclesprotéinesBSP[55, 1061.
LaliaisondesprotéinesBSPàla
1$ membranedesspermatozoïdes[56].Spennatmnïdsqididyrmfrs
Plasmashalbovin
Protnliantl'héparine
*Pt-ntnerESPMetrJwaiduentitozdide
±riestiid
picspîciipiieHéparine
CD FD)LTratiisnita1fen1
tpHtCa2+ tAMPtATP rPI I' tPautéiwTymsiiJ.PmteuTyresu 1dm fPltchatase
tPRepiuiyhtiunsur tyrnshîdespmIèhsCAPACITATION
protéinesBSP[56,104]. I 7 19 t109]. etlebouc(TableauI)[111-117].Espèceanimale
Protéineshomologues
Références
BovinBSP-A1/-A2;BSP-A3;BSP-3OkDa
[85-87]GSP-l4kDa;GSP-l5kDa;GSP-2OkDa;
Bouc [114]GSP-22kDa
RSP-l5kDa;RSP-l6kDa;RSP-22kDa;
Bélier
[116]RSP-24kDa
BiSV-l6kDa;BiSV-l7kDa;BiSV-18kDa;
Bison.
[115]BiSV-2$kDa
ChevalHSP-1;HSP-2;HSP-l2kDa
[111,117] Porc p31 [112] 20quotesdbs_dbs20.pdfusesText_26[PDF] capacitation des spermatozoide dans l'épididyme
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