Cette étude s'effectue sur une souche de levure mutée appelée ADE2-, car elle porte une mutation sur un gène de la chaine de synthèse de l'adénine
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1/ Caractéristiques des souches de levures utilisées La souche de levure utilisée est Saccharomyces cerevisae Ade2- Cette souche porte une mutation qui
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1 sachet noté « extrait levures + peptone » contenant 20g d'extrait de levure et 20g de Prélever, avec un cure-dent stérile, quelques colonies de levures Ade2 -
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Des levures Saccharomyces cerevisiae de souche ade2 formant des colonies rouges sont cultivées sur un milieu nutritif gélosé dans des boîtes de Pétri
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Cette étude s'effectue sur une souche de levure mutée appelée ADE2-, car elle porte une mutation sur un gène de la chaine de synthèse de l'adénine
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on connaît 2 versions de ce gène chez les levures : - ade2+ qui permet une bonne division et des colonies de grande taille - ade2- ne permet pas une bonne
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Le phénotype ne dépend pas que du génotype : (TP 1.3).
Le milieu pourrait aussi agir directement sur le gène, c'est-à-dire modifier sa transcription et sa traduction en protéine.
On cherchet modifier ?
DEROULEMENT DU TP
e souche de levure mutée appelée ADE2-, car elle porte une mutation sur un gène de laCaractéristique de la levure
Influence du milieu sur les gènes
pour sa propre protection, pour éviter la contamination et la pollution du milieu. Conditions de stérilité
La culture de levure est mise en place dans une première séance. Matériel et ProtocoleSon développement nécessite une semaine à 28°C : le résultat sur les colonies. Résultats
COMPTE RENDU
Présenter en tableau les conditions expérimentales, les résultats et leur interprétation.
Schématiser le résultat et de la coloration blanche des levure. Par un court texte, expliquer comment le comprimé ; justifier. Schématiser l cellulaire de la coloration blanche (ou rose) sous la gélose.1°S TP 1.5 : INFLUENCE DU MILIEU SUR LS
CARACTERISTIQUES DE LA SOUCHE DE LEVURE retour
Les levures sauvages (= non mutées) fabriquent ladénine grâce à une chaine d un précurseur (P) en composés intermédiaires puis s. CHAINE DE SYNTHESE TRES SIMPLIFIEE DE LA LEVURE ADE (non mutée)Cytoplasme de la levure
Noyau de la levure
R ʊ: ... A.I.R ʊ: Adénine
Remarque :
La chaine de biosynthèse comprend transformant le précurseur enAMP (Adénosine mono phosphate) composé nucléotidique utilisé pour le nucléotide Adénine.
P = précurseur = Phosphoribosylpyrophosphate
A.I.R. = intermédiaire = Amino-Iminidazole-Robotide G1 G2 E2 E1 Dans la levure mutée ADE2-, le gène 2 est modifié E2 non fonctionnel.En conséquence, l
CHAINE DE SYNTHESE MODIFIEE DANS LA LEVURE ADE2-
Le ADE2- mais le E2 ne fonctionne pas :
ormé en adénine.Il dans le cytoplasme.
La couleur la présence
ygénée et la mutation des levures.P ʊĺ ... A.I.R ʊĺ adénine
couleur rouge G1 G2 E1 E2INFLUENCE DU MILIEU SUR LES GENES retour
Si le milieu contient , les levures activent leur : les gènes s et les précurseurs sont transformés en intermédiaires puis en adénine. Dans les levures sauvages, le précurseur est transformé en adénine.Dans les levures mutées, le précurseur est
transformé en A.I.R qui colore la levure en rouge.P ʊĺ A.I.R ʊĺ Adénine
P ʊĺ A.I.R ʊĺ adénine
G1 G2 E2 E1 G1 G2 E1 E2 transcription : les enzymes ne sont pas fabriqués : .Da : les levures restent blanches.
puisée dans le milieu.ADENINE
: P non transforméParentés entre les êtres vivants : En culture in vitro, une concentration importante d'adénine entraîne la
dégénérescence des neurones. Le gène codant pour l'enzyme N°2 de cette chaîne est porté par le chromosome 21.
Les trisomiques 21 portent donc 3 copies de ce gène. La synthèse de l'adénine est mal régulée chez ces personnes.
ŷ : Transcription bloquée
G1 G2CONDITIONS DE STERILITE retour
Lorsque l'on manipule des micro-organismes, il faut prendre des précautions de 3 sortes :1. se protéger des conditions de manipulation
2. ne pas contaminer la culture étudiée avec des souches externes
3. ne pas polluer l'environnement avec nos expériences.
1) Se protéger : : NE PAS LES APPROCHER DE LA FLAMME
Porter une blouse en coton, la fermer
2) Eviter la contamination de la culture
Nettoyer la paillasse à l'eau de javel. ATTENTION AUX VETEMENTS. Se passer les mains à l'alcool, mais en aucun cas cela ne permet de toucher la partie du matériel qui sera en contact avec les levures. Travailler dans un rayon de 30 cm autour de la flamme : le matériel ne doit pas quitter ce rayon. Ne mettre en contact que des matériels stérilisés.Ne pas parler devant des boîtes ouvertes.
Eviter les mouvements brusques.
3) : pot avec javel pour récupérer le matériel usagé.
MATERIEL PAR BINOME retour
2 boîtes de pétri avec milieu YPG (milieu de culture pour les levures).
1 ml de suspension C (contient les levures à ensemencer)
1 compte-gouttes stérile (prélèvement de la suspension C).
1 étaleur stérile (pour ensemencer les levures de la suspension C).
1 pastille d'adénine (à déposer sur une des 2 boites de culture).
1 scalpel à stériliser (découpe du carré de gélose).
1 pince à stériliser (dépôt de pastille d'adénine).
1 bec bunsen .
PROTOCOLE 1° SEANCE : retour
1) Couler la gélose dans la boite de péri ; laisser refroi
2) Déposer 2 gouttes de la suspension C sur les 2 boîtes de culture, à l'aide d'un compte-gouttes stérile.
3) Répartir la suspension sur la gélose de façon homogène avec l'étaleur stérile.
attention à ne pas transpercer la gélose. agir par mouvements délicats de va-et-vient ou circulaires.4) Laisser sécher les boîtes pendant 10 minutes.
5) Déposer une pastille d'adénine au centre d'une des deux boîtes de milieu, avec une pince stérile
6) Sur l'autre boîte, créer une zone de croissance anaérobiose (sans dioxygène) :
Découper un carré de 2 centimètres de coté dans la gélose à l'aide d'un scalpel stérile.
Soulever ce carré avec la lame et le retourner en le rabattant sur le reste de la gélose. Attention, la lame reste brûlante quelques dizaines de secondes ; la manipuler à froid.