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2 Comptage avec des cellules de Malassez -Passer la culture au vortex pour dissocier les amas cellulaires ; -Repérer à l'œil nu le quadrillage sur le centre de  

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lame de comptage spéciale (ou cellule de numération) II-Technique de C'est une lame épaisse en verre, comportant des rigoles et un quadrillage : La cellule de Malassez possède un quadrillage spécifique comportant 100 rectangles :

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Placer l'extrémité de la pipette contre la lamelle et délivrer par capillarité le liquide en évitant tout débordement vers les rigoles Principe de comptage La totalité 

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Immédiatement, un prélèvement est effectué et le comptage est effectué Le temps t = 0 est noté Des prélèvements sont ensuite réalisés toutes les 1 ou 2 heures 

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Le comptage cellulaire fait partie du quotidien du biologiste cellulaire C'est une étape En culture cellulaire, on doit souvent connaître le nombre des cellules avec de lame (Par ex : Malassez, Neubauer, Bürker, Fuchs Rosenthal, Thoma  

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choisir la bonne technique selon le type de cellules à compter un volume précis et connu, les globules blancs, les globules rouges et les thrombocytes à l' objectif 40x ou Dilution de l'échantillon, préparation de la chambre de comptage

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La cellule de Malassez est constituée par une lame de La hauteur entre le plancher et la lamelle est de 0,20 avant de faire le comptage et le chiffre mesuré

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UTILISATION D'UNE LAME DE COMPTAGE MALASSEZ Quadrillage d'une cellule de Malassez La hauteur entre le plancher et la lamelle est de 0,20 mm  

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L'utilisation de la cellule de Malassez pour le comptage des cellules est également décrite Dilution de la suspension cellulaire et comptage au bleu de trypan

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Fiche mĠthode͗ utilisation d'une lame de comptage cellulaire. La cellule Te ÓalaVVeY eVW conVWiWuée par une lame Te verre épaiVVe creuVée Te 2 rigoleV TélimiWanW un plancUer au cenWre Tuquel eVW

Wracé un quaTrillage.

LeV 2 plaWeaux VurélevéV VervenW Te VupporW à la lamelle. LeV recWangleV quaTrilléVH forméV Te 20 carreaux conVWiWuenW leV YoneV Te compWage.

CUacun Te ceV recWangleV a une Vurface Te 0H05

mm2. La hauteur entre le plancher et la lamelle eVW Te 0H20 mmH le volume Te liquiTe au-TeVVuV Te cUaque recWangle quaTrillé (20 carreaux) eVW

Te 0H01mm3.

A- Remplissage de l'hématimètre

1. Mouiller légèrement les plateaux.

2. Poser la lamelle sur les plateaux en

appuyanW TélicaWemenW avec leV pouceV

WouW en la faiVanW légèremenW gliVVer.

3. Poser l'hématimètre sur la platine du

microVcope eW faire la miVe au poinW Vur une piVcine.

4. Déposer une gouWWe Te la VuVpenVion à

Ténombrer avec une pipeWWe PaVWeur TonW

lGeffilure Vera prèV Tu borT Te la lamelle.

B- Comptage de cellules

Remarque 1 J pour éviWer Te compWer Teux foiV

TeV levureV cUevaucUanW le quaTrillageH on

compWe uniquemenW leV celluleV qui " morTenW » Vur leV coWéV TroiW eW inférieur Te cUaque carré.

Nn compWanW leV celluleV on peuW Wrouver leur

concenWraWion J sur des suspensions suffisamment diluées pour que leV celluleV ne VoienW paV Wrop nombreuVeV

TanV le cUamp Tu microVcope.

Si la VuVpenVion eVW Wrop concenWréeH on la Tilue avanW Te faire le compWage eW le cUiffre meVuré eVW mulWiplié par le facWeur Te TiluWion (Vi la VuVpenVion a éWé Tiluée 10 foiVH le réVulWaW Tu compWage eVW mulWiplié par 10). p0 : plancher p1 : plateaux r : rigoles

L : lamelle

s : suspension à compter p0 r s p1 p1 L

Coupe hématimètre après remplissage

pipette pasteur

Remplissage de l'hématimètre

0,20 mm

0,25 mm

(l'hématimètre compte 25 piscines)

1 "piscine"

= recWangle Te 20 carreaux uWiliVé pour le compWage

Piscine observée avec objectif x10

lors du comptage de levuresquotesdbs_dbs16.pdfusesText_22