[PDF] TD 1 : Les différents types de milieux de culture PDF Support%20du%20TD%20Microbiologie%20pour%20%20Etudiants%20L2.pdf

Le milieu viande foie ; c'est un milieu semi-solide, ce milieu est principalement utilisé dans longs Page 3 Dr Khadir Abdelmounaim, TD Microbiologie, L2,

[PDF] Les milieux de culture - Chapter 2

Milieux de culture à utilisation générale ○ Supporte la croissance de différents micro-organismes ○ i e , gélose au soja (tryptic soy agar) ○ Milieux enrichis ○

[PDF] MILIEUX DE CULTURE 1 Préparation des milieux 2 Différents

Un milieu de culture doit satisfaire à toutes les exigences nutritives des micro- organismes : - apport de la source Différents types de milieux 1) Milieux

[PDF] III — Milieux de culture et ensemencements

et par la méthode en surface, les milieux de culture 1, 2, 3 et 5, à raison de 4 boîtes (1961) déconseille vivement l'emploi de tels filtres en bactériologie marine ( 1 ) tillons étudiés par les différents auteurs pourrait-elle être la cause de la

[PDF] Bactériologie - Catalogue des cours en ligne UFMC1

Laboratoire de bactériologie médicale de l'ISVK : les différents locaux 9 2 Types de milieux de culture l'isolement sur milieux de culture bactérienne

[PDF] Guide de sélection - Milieux pour bactériologie

Pour la culture de nombreuses variétés de microorganismes, particulièrement Brucella et anaérobes 777260 Bouillon glucose chloramphenicol Milieu sélectif

[PDF] les milieux de culture

milieux de culture destinés aux laboratoires spécialisés dans la bactériologie clinique, C'est la garantie de fournir des milieux de culture toujours innovants L'objectif de cette étude est de comparer différents critères tels que la fertilité,

[PDF] TP N°4 - Biotechno pour les profs

Autoclave Boîtes de Pétri Flacon pour milieu de culture Bec Bunsen grattoir A la fin de la manipulation, regrouper les différentes boites de Pétri et les C'est la coloration de base en bactériologie qui permet de distinguer les bactéries en

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 1

TD 1 : Les différents types de

milieux de culture.

Un milieu de culture est une préparation au sein de laquelle des microorganismes peuvent se multiplier,

du microorganisme

étudié.

On classe les milieux de culture :

1. Selon leur consistance :

) Milieu liquide : par un trouble ou des dépôts et des voiles superficiels. Exemple : bouillon nutritif BN, Bouillon trypticase soja (TSB), Brain-Heart Infusion Broth

) Milieu solide : On obtient les milieux solides en ajoutant un agent gélifiant à un milieu liquide.

Le gélifiant le plus utilisé est -agar

60 °C tout en étant liquéfiable par ébullition, auquel cas, il reste en surfusion (liqui

Les milieux solides contenant généralement 1.5-2% (15-20 g.L-1 en tubes à essai, culot en tube droit ou couche mince en boites de pétri. la croissance des microorganismes se traduit par la formation des colonies exemple Gélose nutritive GN, Gélose trypticase soja (TSA), gélose Mac Conkey,

Gélose Muller-Hinton etc.

) Milieu semi-solide : contenant 0.5-0.75 (5-7,5 g.L-1hugh et Leifson, viande

2. Selon leur composition :

) On distingue 2 types de milieux : ) Les milieux complexes ou empiriques : De composition complexe, mal définie, ils peuvent être -d'origine animale : lait, sérum, bouillon et gélose nutritive, gélatine, etc. Tryptycase soja, gélose au Chocolat, gélose au sang, etc.

) Les milieux synthétiques ou définis : dans lesquels tous les composants sont connus

uelques-uns : Citrate de Simons, Citrate de Christensen,

Urée-Tryptophane.

3. Selon leur utilisation : On distingue en général 4 types principaux de milieux :

A- Milieux de-base ; appelés aussi milieux usuels non sélectifs, on regroupe sous ce vocable tous les

milieux ne contenant aucune molécule inhibitrice. Ils sont en général de préparation assez simple et

généralement peu coûteuse, ces milieux contiennent une base nutritive constituée de molécules azotées

(acides aminés, molécules organiques de de produit vivante

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 2

(animale, végétale, mycélienne) comme les peptones, les extraits de viande ou de levure exemple gélose et

Bouillon nutritif, gélose et Bouillon Muller-Hinton .

B- Milieux d'isolement ; ils peuvent être, suivant les techniques envisagées et les bactéries en cause

soit ;

Des milieux non sélectifs enrichis ils sont obtenus en incorporant à un milieu de base adéquat des

liquides ou suspensions riches en molécules organiques diverses : du sang, d

améliorées par dénaturation thermique des constituants, en particulier pour le sang. Ils permettent la

pousse de nombreux germes exigeants ou très exigeants. Les plus utilisées sont les géloses au sang frais

au milieu de base peut avoir plusieurs buts : apporter des facteurs de croissance nécessaire au micro-

organisme étudié.

Des milieux sélectifs, destinés à favoriser la croissance d'une ou plusieurs espèces bactériennes

-organismes. Pour cela on ajoute des éléments qui

inhibent la croissance des micro-organismes indésirables comme le chlorure de sodium à forte

concentration, le thiosulfate de sodium, le cristal violet ou certains antibiotiques, etc.Les éléments

ajoutés sont sélectionnés selon les caractéristiques du micro-organisme recherché. Ces milieux sont

utilisés pour l'analyse d'un prélèvement polybactérien.

Exemples de milieux sélectifs :

milieu S-S : il ne permet la croissance que des Salmonelles (Shigella s'y développe moins vite : environ 48 à 72 heures avant d'obtenir une culture exploitable). Milieu de Sabouraud : il permet la pousse des mycètes (Candida). gélose Kanamycine - Vancomycine, dite "Kana-Vanco" ou KV : elle empêche la pousse des

bactéries à Gram positif (action de la vancomycine) et de la plupart des entérobactéries (action de

la Kanamycine). Sur ce milieu, poussent préférentiellement des bactéries anaérobies strictes.

Milieux différentiels

Le milieu de culture dit différentiel ou milieu d'identification indicateur permet de distinguer deux types

de microorganismes se développant dans un même milieu. Ce type de milieu met en évidence certaines

caractéristiques biochimiques des microorganismes (principalement l'aptitude à dégrader un substrat)

en présence d'indicateur(s) de la réaction chimique : des indicateurs colorés de pH ou d'oxydo-réduction

(tel que le rouge neutre, rouge de phénol, l'éosine ou le bleu de méthylène).

Exemple Gélose Mac conkey : La gélose Mac Conkey est un milieu sélectif et différentiel au même

temps utilisé pour l'isolement des entérobactéries. En effet, elle contient des agents sélectifs qui

freinent le développement des bactéries à Gram positif: cristal violet et sels biliaires. Il est également

L'orientation de l'identification qui est basée sur l'utilisation du lactose,

repérable grâce à 1 indicateur de pH (rouge neutre) les colonies de E coli apparaissent en rouge, car ce

sont des lactoses + tandis que les autres colonies lac apparaissent incolores.

La Gélose Chapman (MSA), milieu sélectif des staphylocoques qui différencie la fermentation du

mannitol permettant une orientation entre autres vers Staphylococcus aureus.

Le milieu hugh et Leifson est un milieu semi-solide qui permet de déterminer la voie métabolique

empruntée par les différentes espèces bactériennes oxydative ou fermentative, il permet aussi de

déterminer "la voie d'attaque du glucose". Le milieu viande foie -solide, ce milieu est principalement utilisé dans longs

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 3

tubes fins " tube de prévôt » pour la détermination du type respiratoire des micro-organismes, mais aussi

pour la culture de germes anaérobies stricts telles que les Clostridium).

Le Mannitol-Mobilité-Nitrate est un milieu semi-solide de culture caractérisé par l'utilisation

de mannitol et de Nitrate et permet la mise en évidence (ou non) de la mobilité bactérienne.

Milieux chromogènes ou discriminants

Ce milieu peut être sélectif ou non. Son principe repose sur la présence d'un ou plusieurs substrats (s)

couplés (s) à une molécule chromogène. Lorsque ce substrat est métabolisé par une enzyme bactérienne

spécifique, le chromogène associé prend une couleur particulière (il devient un chromophore)

directement lisible sur la colonie. Si l'enzyme n'existe que chez une espèce bactérienne donnée,

l'identification est immédiate. Exemple gélose MRSA-ID qui permet de détecter directement les souches

de Staphylococccus aureus résistantes à la méticilline.

Principaux ingrédients des milieux de cultures

Constituants Caractéristiques Fonction

Extraits de viandes.

A partir de tissus animaux sélectionnés (à froid : macération; à chaud: infusion, extraits de viandes).

Source de protéines peu

dégradées, glucides, sels minéraux, vitamines hydrosoluble. (vitamine B).

Peptone

(pancréatine, pepsine, trypsine, papaïne) sur des matières protéiques (viande, caséine, oligopeptides.

Hydrolysats

protéines. chlorhydriques sur des ions minéraux.

Agar-agar ou gélose

de polysaccharides (agarose 70% et agaropectine 30%). A 90°C se dissout dans température elle forme un gel transparent +/- solide.

Solidifier

cultures. les milieux de Produits biologiques Sang, sérum, lait, gélatine, pomme de terre, etc. molécules diverses organiques

Base minérale

Macroéléments ioniques (Na+, K+, Mg2+,

Ca2+, Cl-, PO4-2, SO4-2, HCO3-

Microéléments ioniques ou oligoéléments (Fe, Co, Ti, Zn, Cu, B, Se, Mo, V, W, Mn.)

Apportent

électrique,

osmotique, fonctionnement enzymatique.

Eau distillée.

a) Exemple 1 : gélose nutritive

Constituant Quantité Fonction

Peptone 5g

Extrait de viande 1g

Extrait de levure 2g

Chlorure de sodium 5g

Agar-agar 15g

pH final à 25°C : pH 6,8± 7

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 4 a) Exemple 2 : Hajna Et Kligler

Constituant Quantité Fonction

Peptone 15 g

Extrait de viande 3 g

Extrait de levure 3 g

Peptone pepsique de viande 5 g

Glucose 1 g

Lactose 10 g

Rouge de phénol 25 mg

Chlorure de sodium 5 g

Sulfate ferreux 0,2 g

Thiosulfate de sodium 0,3 g

Agar-agar 15 g

Exercice :

Un microbiologiste veut faire préparer une gélose dite de Müller-Hinton. Cependant, dans son

1) quel est cet ingrédient ?

2) Combien de grammes doit-il ajouter pour la ?

3) Parmi les constituants des milieux de culture, les extraits de levures et les peptones ;

a. Comment peut-on obtenir ces composés ? b. de quoi sont-ils constitués ?

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 5

TD N° 02

des bactéries et croissance bactérienne

Les microorganismes coexistent en populations mélangées dans les différents environnements

de bactéries différentes

108 9 bactéries

par grammes de terre constituée de plusieurs espèces de bactéries et de champignons. Les analyses de

prélèvements pathologiques du milieu hospitalier donnent généralement des cultures polymicrobiennes.

Ceci pose un problème pour les microbiologistes, car on ne peut jamais étudier plusieurs espèces

s autres par des de base

Termes importants :

Ensemencement ou inoculation en microbiologie : introduire un inoculum bactérien dans un milieu de

culture stérile (bouillon ou gélose, ect.) À pipette Pasteur ou anse de platine, ect. Inoculum : Échantillon ou bien quantité de microorganismes mère, destinée à ensemencer (inoculé) au sein favorable à sa multiplication. : Consiste à des ensemencements sur des milieux de culture dans un but de séparation de façon à obtenir des colonies bien distinctes. Repiquage : réensemencement de culture pure dans un milieu de culture neuf.

La différence entre " Espèce » et " souche » : Une souche est une partie d'une espèce bactérienne, mais

elle est différente des autres bactéries de la même espèce par une différence mineure, mais identifiable.

1- : lon de culture: Dissociation dans un milieu liquide une colonie bactérienne Ensemencement par stries des milieux gélosés

essuie soigneusement le file de platine ou la boucle de la pipette pasteur sur la surface de la gélose cette

méthode se fait dans le cas des géloses coulées dans des boites de pétri ou bien les géloses inclinées en

tubes à essai.

Ensemencement par inondation (en nappe) : On inonde la surface du milieu gélosé en boite de pétri par

ré- antibiogramme CASFM).

Ensemencement dans la masse

-à--45°), cette méthode est utilisée pour le dénombrement bactérien.

Ensemencement par spots

millimètres de diamètres) cette technique permet de faire plusieurs essais de cultures sur la même boite

(ex tester plusieurs souches).

Ensemencement par piqure centrale : elle se fait généralement sur des tubes contenant un milieu gélosé

ensemencement du milieu mannitol-mobilité.

Ensemencement par écouvillonnage : Tremper un écouvillon stérile dans une solution ou une suspension

bactrienne puis ensemencer la surface de la gélose. (Ex. test antibiogramme CLSI).

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 6 2- cadrans: Cette technique permet de séparer les divers micro-organismes contenus dans le prélèvement initial.

Un isolement peut être envisagé pour: séparer des micro-organismes différents au sein d'un mélange,

purifier une souche contaminée ou contrôler sa pureté :

1- Tracer sur le fond extérieur de la boite de pétri gélosé deux diamètres perpendiculaires

divisant la boite en quatre secteurs.

2- Déposer près bord de la moitié de la boîte correspondante aux cadrans 1 et 2

3- Étaler ce dépôt en réalisant des stries très serrées dans la moitié de la boite (cadrans 1et 2).

4- 5- moitié correspondant aux quadrants 2 et 3. 6- 7- serrées dans la moitié correspondante aux quadrants 3 et 4. ecteurs ou cadrans : empiétant second. La répétition de cette procédure sur le troisième secteur.

Technique de dilution successive :

microbienne importante il en résulte une surface de la boite de pétrie pleine de colonies collées les unes

avec les autres cela empê

des dilutions du produit à analyser. Certaines analyses bactériologiques telles que le dénombrement

bactérien recommandent de faire un dénombrement lorsque la boite de pétrie et chargé avec un nombre

approximatif entre 30 et 300 colonies et donc dans le cas où on a un nombre plus important il est recommandé de faire des dilutions successives :

Une solution du produit à analyser est préparée, ensuite des tubes contenant le diluant avec un volume

de 9 ml sont préparés également (dans le cas où on veut faire des dilutions de facteur 10) un volume de

quotesdbs_dbs4.pdfusesText_7

[PDF] [PDF] TD 1 : Les différents types de milieux de culture

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD 1 : Les différents types de

étudié.

On classe les milieux de culture :

1. Selon leur consistance :

Le gélifiant le plus utilisé est -agar

60 °C tout en étant liquéfiable par ébullition, auquel cas, il reste en surfusion (liqui

Gélose Muller-Hinton etc.

2. Selon leur composition :

Urée-Tryptophane.

3. Selon leur utilisation : On distingue en général 4 types principaux de milieux :

Dr. Khadir Abdelmounaim,

Exemples de milieux sélectifs :

Milieux différentiels

Dr. Khadir Abdelmounaim,

Milieux chromogènes ou discriminants

Principaux ingrédients des milieux de cultures

Constituants Caractéristiques Fonction

Extraits de viandes.

Source de protéines peu

Peptone

Hydrolysats

Agar-agar ou gélose

Solidifier

Base minérale

Macroéléments ioniques (Na+, K+, Mg2+,

Ca2+, Cl-, PO4-2, SO4-2, HCO3-

Apportent

électrique,

Eau distillée.

Constituant Quantité Fonction

Peptone 5g

Extrait de viande 1g

Extrait de levure 2g

Chlorure de sodium 5g

Agar-agar 15g

Dr. Khadir Abdelmounaim,

Constituant Quantité Fonction

Peptone 15 g

Extrait de viande 3 g

Extrait de levure 3 g

Peptone pepsique de viande 5 g

Glucose 1 g

Lactose 10 g

Rouge de phénol 25 mg

Chlorure de sodium 5 g

Sulfate ferreux 0,2 g

Thiosulfate de sodium 0,3 g

Agar-agar 15 g

Exercice :

1) quel est cet ingrédient ?

2) Combien de grammes doit-il ajouter pour la ?

3) Parmi les constituants des milieux de culture, les extraits de levures et les peptones ;

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD N° 02

108 9 bactéries

Termes importants :

Ensemencement dans la masse

Ensemencement par spots

Dr. Khadir Abdelmounaim,

1- Tracer sur le fond extérieur de la boite de pétri gélosé deux diamètres perpendiculaires

2- Déposer près bord de la moitié de la boîte correspondante aux cadrans 1 et 2

3- Étaler ce dépôt en réalisant des stries très serrées dans la moitié de la boite (cadrans 1et 2).

Technique de dilution successive :