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Exercice 3 L'ADN d'un plasmide de 48,6 kpb a été hydrolysé par l'enzyme de restriction Sal I Cet ADN est analysé par électrophorèse sur gel d'agarose ( pistes 

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partielle de cet ADN par l'enzyme de restriction Eco RI, de manière à générer des fragments de 5 à 10 kb Electrophorèse préparative pour purifier sur gel les 

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Enzyme de restriction site de coupure EcoRI GAATTC HindIII AAGCTT BamHI GGATCC SalI GTCGAC DraI TTTAAA HpaI GTTAAC PvuI CGATCG NheI

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Exercice 1

1) Identifier les bases présentes dans les structures suivantes :

2) Parmi ces bases, lesquelles :

a) contiennent du ribose. b) contiennent du désoxyribose. c) contiennent une purine. d) contiennent une pyrimidine e) contiennent de la guanine. f) sont des nucléosides. g) sont des nucléotides.

Exercice 2

gène, est partiellement reportée ci-dessous.

ATACGGGATCCGAGCTCTCGATCGTCTGCAGAAATTCC

3) Soient les enzymes de restriction BamH I, Pst I, Xho I et Mbo I dont les sites reconnus sont :

BamH I : 5' G/GATCC 3' ; Pst I : 5' CTGCA/G 3' ; Xho I : 5' C/TCGAG 3' ; Mbo I : 5' /GATC 3'. coupures.

5) Pour chaque

ure supérieure à leurs Tm respectives, puis refroidie. Que peut-on attendre? - TTTCTGCA-

Où cette amorce se fixera-t--t-on après

élongation par la DNA-polymérase ?

Exercice 3

(l'ADN du phage lambda hydrolysé par l'enzyme de restriction Hind III ) est déposé dans les puits

coloration p

1) Tracer la courbe étalon : Log taille(pb) = f(distance de migration).

2) À partir de cette courbe, déduire la taille des fragments issus de la digestion par l'enzyme de restriction Sal I de

l'ADN du cosmide recombinant (pistes 2 et 4).

3) La somme des tailles des fragments obtenus vous semble-t-elle en accord avec la taille attendue de 48,6 kpb ?

une molécule d'ADN -vous ? Exercice n° 4 : La sĠƋuence d͛ADN ci-dessous vient de vous être fournie.

TCTGACATGGTGTCAGTCAGTTTCTC 3͛

Q1 : Pouvez-vous fragmenter cette molécule avec les endonucléases de restrictions suivantes : BamH1 (G/GATCC), HpaII (C/CGG), PvuI (CGAT/CG), Sau3A (/GATC), SmaI (CCC/GGG), XbaI (T/CTAGA) ?

Q2 : Placez les sites edžistants et schĠmatisez les edžtrĠmitĠs 5͛ et 3͛ aprğs coupure pour chaƋue enzyme.

Q3 : Yue deǀiennent ces edžtrĠmitĠs lorsƋue les fragments obtenues aprğs coupure sont incubĠs en prĠsence de l͛ADN

polymérase Klenow en présence de dNTPs ?

Q4 : Après cette modification, vous faites agir une ligase. Avez-ǀous rĠgĠnĠrĠ l͛ensemble des sites ?

Exercice n° 5 : Un plasmide circulaire possğde un site de coupure par l͛enzyme XhoI et deudž sites de coupures pour l͛enzyme

SmaI. Ces deudž sites pour l͛enzyme SmaI sont situĠs de part et d͛autre du site XhoI, à égale distance de ce site. Lorsque vous

effectuez une Ġlectrophorğse sur gel d͛agarose de l͛ADN de ce plasmide digéré par l͛enzyme XhoI ou par SmaI en présence de

bromure d͛éthidium, on estime la taille des fragments obtenus à 3 kb ou à 1.5 kb respectivement. Lorsque vous effectuez la

double digestion XhoI et SmaI, la somme des fragments obtenus fait 2.25 kb. Tracer la carte de restriction de ce plasmide en

positionnant les sites XhoI et SmaI.

Exercice n° 6 : Un fragment d͛ADN HindIII-HindIII de 1kb est digĠrĠ par l͛enzyme EcoRI en un fragment de 300 pb et un fragment

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