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Réalisation de la germination in-vitro de grains de pollen de fleurs de pomme de terre
Pour obtenir des fleurs de pomme de terre, il faut bien choisir sa variété. En effet certaines variétés comme la Binje ne
fleurissent pas .Quant à la Belle de Fontenay, elle fleurit rarement. En revanche la Rosa Bonnotte de Noirmoutier et laHollande de Roscoff ont des floraisons abondantes. Pour augmenter la floraison, il conviendra d"éliminer au fur et à
mesure les tubercules. Pour faciliter cette opération il suffira de poser sous le tubercule initial, une brique ou une dalle de
pierre. Préparation du milieu de germination par le professeurPour 100g d"eau on ajoute:
10 g de saccharose (sucre en poudre)
30 mg de nitrate de calcium
20 mg de sulfate de magnésium MgSO4
10 mg de nitrate de potassium KNO3
Extrait de pistil de pomme de terre
1g d"agar agar (produit gélifiant)
Ajuster le pH à 6.2 précisément avec l"acide citrique ou l"acide borique. Remarque : il est tout à fait possible d"acheter un milieu de culture prêt à l"emploi. Manipulation à réaliser pour chaque binôme d"élèvesPréparation du milieu de culture
A l"aide d"un compte-goutte, on prélève quelques gouttes de milieu de culture encore chaud (donc liquide) que l"on
dépose dans le creux d"une lame à concavité. Puis on place cette lame dans une boîte de pétri qui doit rester ouverte.
Dissection des anthères
Pour réaliser cette activité, les fleurs de pomme de terre doivent être coupées depuis 5 à 8 jours pour que les
anthères soient bien déhiscentes.Les cinq étamines de la fleur de pomme de terre présentent chacune un filet court inséré sur les pétales et une anthère à
deux loges. Les cinq anthères forment un tube autour du pistil. Pour une fleur donnée, la durée de production du pollen et
sa réceptivité par le stigmate sont de 48 heures environ. Déposés sur le stigmate (= extrémité du pistil) les grains de pollen germent.Anthère à deux loges
Stigmate
Filet court
Masson - ACCES
- Février 2011Stigmate d"une fleur
de pomme de terreGrain de pollen
Il conviendra de choisir les grains de pollen d"au moins trois fleurs pour s"assurer de la germination d"un lot, chaque
anthère et chaque grain n"étant pas au même stade physiologique.Sectionnez le filet d"une étamine avec une pince fine puis secouez l"anthère au dessus du milieu de culture de la
lame à concavité (éventuellement grattez l"anthère avec une aiguille droite). Recommencez avec deux autres étamines
provenant de deux autres fleurs et placez le couvercle de la boîte de pétri. Déposez la boite à l"étuve réglée entre 26 et 28°C durant 20 minutes.En attendant le résultat, secouez une anthère d"étamine de pomme de terre sur un morceau de feuille de papier
millimétré transparent pour une observation à sec (l"eau ferait gonfler les grains de pollen) au microscope optique de
manière à observer des grains de pollen non germés. Calculez la taille approximative des grains de pollen (1 mm = 1000 μm) Pour bien observer les grains de pollen, il conviendra d"utiliser le microscope comme une loupe à savoir avec la source lumineuse au dessus de l"objet Grain de pollen de pomme de terre sur papier millimétréRéalisez un dessin d"observation.
Observez ensuite quelques grains de pollen germés et réalisez de nouveau un dessin d"observation sur la même
feuille que précédemment Chaque grain de pollen a la faculté d"émettre plusieurs tubes polliniques