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Préparation des tissus pour inclusion en paraffine

La fixation

La fixation a pour but d'éviter l'autolyse des tissus et par conséquent la conservation des

structures microscopiques. Un bon fixateur doit avoir une pénétration rapide et homogène, ne

donner aucune rétractation des tissus, révéler des organites intra-cellulaires et les structures

latentes, éviter le déplacement des constituants solubles, ménager l'activité de certaines

enzymes, et permettre en principe de retrouver les éléments visibles sur les colorations vitales.

Protocole :

Les tissus animaux seront prélevés et fixés par des personnels titulaires de l'autorisation

d'expérimenter sur l'animal, et en strict accord avec la réglementation en vigueur concernant l'expérimentation animale.

A préparer avant tout prélèvement :

- le volume du fixateur doit correspondre au moins à 10 fois celui de l'échantillon.

Fixateurs les plus couramment utilisés :

Formol 10% tamponné, se conserve à température ambiante AFA : alcool-formol-acide acétique, cette fixation permet de conserver l'ADN des tissus et permet d'obtenir une morphologie plus belle. En revanche, il est déconseillé pour l'immunohistochimie

Lors du prélèvement :

Les prélèvements doivent être faits aussi rapidement que possible après la mort de l'animal. Il

faut toujours utiliser un instrument très tranchant (bistouri) et éviter de dilacérer les tissus. La

surface du prélèvement à fixer peut être irrégulière, mais son épaisseur ne doit pas dépasser

0,5 cm afin que le liquide fixateur l'imbibe aisément. Les rincer dans le PBS s'ils sont

recouverts de sang (le sang ralentit la fixation).

Plonger immédiatement les organes dans le fixateur en veillant à ce qu'ils n'adhèrent pas au

fond ni aux parois du récipient (tubes coniques à proscrire).

Laisser dans le fixateur à 4°C 24 à 48H suivant la taille et la densité du prélèvement.

Après fixation :

Amener les prélèvements dans le fixateur sur le plateau à Myriam ROBARD ou si impossibilité, les mettre dans le PBS à 4°C.

MicroMorph

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