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Présentéepar:
Dr. DAHMANI
LE COMPTAGE DES CELLULES
INTRODUCTION
enculturecellulaire.Concentration des cellules:
Vitalité des cellules:
Principe du comptagecellulaire
unvolumeprécisd'unmilieuliquide. volume(parex.nombredecellules/ml). estimerlaconcentration. uncomptagemanuelaumicroscope,soitpar dédiés.1-Le comptage manuel
9D'uncolorant
9D'unepipette
9D'unmicroscopeordinaireouinversé
9DetamponPBSpourlesdilutions
9D'unesolutionàcompter
a.La coloration detrypan0,1-0,4%ouérythhrosine). mortes.Ilfautobserverlescellulesdansles3-5
viablesfinissentparsecolorer.Facteur de dilution :
colorantetdesuspensioncellulaire(100ul). ajouterplusdecolorantpourainsidiluerla suspension. dessous: b.Les lames :La partie centrale possède un quadrillage différent selon le type de lame (Par ex : Malassez, Neubauer, Bürker, Fuchs Rosenthal, Thoma, ou BürkerTürk) :
Les lames Malassez:
1 mm Grille des chambres A ou B observées au microscope Chacun des 9 grands carrés correspond à un volume standard de 10-4 ml (ou 1/10 000 ml). En effet, les dimensions sont :Côtés = 1 mm ou 0,1 cm
Profondeur = 0,1 mm ou 0,01 cm (espace entre lame et lamelle) Volume = 0,1 cm X 0,1 cm X 0,01 cm = 10-4 cm3 = 10-4 ml c.Les règles de comptage petitscarrés.Exemple:
quitouchentauxlignesdegaucheetduhautdu l'intĠrieur. d.Calculs effectués à partir du comptage1.Évaluation du pourcentage de viabilité des cellules:
On peut calculer le й de ǀiabilitĠ d'une culture aprğs avoir compté les cellules mortes (colorées) et les cellules vivantes (incolores) : % viabilité = (nb de cellules vivantes / nb total de cellules) X 100 Nb cellules/ml = Nb moyen de cellules viables Xfacteur de dilution /Volume des chambres (10-4 ml)
3.Évaluation du volume à transférer lors d'un
passage: désiréàéchéance. désirée,selonlaformule:C1=Concentrationcalculée.
Calcul du volume de milieu pour compléter au volume final: V3 = V2 -V12.Le comptage automatisé:
i.Compteurdecellulesportatif:Cetypedecompteurressemble
Principe de fonctionnement du compteur Coulter.
Le Coulter enregistre un signal proportionnel au
volume des particules, indépendamment de leur forme. Le signal est provoqué par une modification au travers duquel le fluide contenant les particules est aspiré.Le premier compteur portatif à utiliser la technique du Coulter qui vous donne en quelques secondes, un comptage rapide et précis de vos cellules, ainsi que leur viabilité.
Compteur compact automatisé :
9Technologie innovante basée sur le principe de Coulter
9Format unique portatif et miniaturisé
9Utilisation facile, intuitive, rapide, de haute précision
9Port USB, stokageet transfert des données sur PC
9Batterie rechargeable
Ecranintégré :
9Populations cellulaires représentées sous forme d'histogramme
9Concentration cellulaire
9Moyenne du volume des cellules et de leur taille
9Fenêtre de calcul modulable
*Sonde: ii.Compteurs automatisés: Les compteurs automatisés disponibles sur le marché utilisent une lecture de cellules en bleu de trypan, ils possèdent une caméra CCD, un logiciel de traitement des résultats etL'Ġchantillon est aspiré ainsi que le bleu de trypan, puis le mélange est injecté dans le
système fluidique et passe à travers une cellule qui permet de capter une image de la nombre de cellules, la concentration et la viabilité de l'Ġchantillon.Les données obtenues sont des résultats numériques, des histogrammes de distribution des
tailles de cellules et des images des cellules. compté de faux positifs ou des débris cellulaires. En plus des données quantitatives, suite de ses expériences.