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TP de Spécialité no10
Extraction des colorants des épinards
1 Introduction : lien structure & propriétés
Ce quel"on nommecourammentchlorophylleestenréa- lité un mélange de plusieurs molécules de structures chimiques très proches. On distingue ainsi les chloro- phylles a, b, c et d ainsi que quelques dérivés apparen- tés. Les chlorophylles a et b sont les plus abondantes chez les plantes supérieures et algues vertes, en proportions variables suivant l"espèce. Les chlorophylles c et d sont plutôt présentes chez les algues brunes et cyanobacté- ries.Chlorophylle a : couleur bleu-vert
Chlorophylle b : couleur vert-jaune
Q1Comparer la formule des 2 chlorophylles; quelle
molécule est la plus polaire? En plus des chlorophylles, il y a les carotènes dont :Lycopène : couleur jaune
-carotène : couleur jauneSont présents aussi les xantophylles :
Violaxanthine : couleur jaune
Néoxanthine : couleur jaune
Q2 Parmi ces molécules, lesquelles sont polaires ou apolaires?2 Extraction des colorants
•Placerenviron10gd"épinardshachéssurgelés(préa-lablement décongelés) dans un mortier; ajouter 2spatules de sable de Fontainebleau et 10 mL de di-chlorométhane.
•Broyer jusqu"à ce que le solvant soit vert foncé. •Filtrer, bienessorerlesépinardsàl"aide delaspatule. •Récupérer le filtrat dans un bécher3 Réalisation de la CCM
•Préparer 20 mL d"éluant en réalisant un mélangeéther de pétrole/éther diéthylique en proportion
40/60. Le mélange est prêt sous la hotte.
•Sous la hotte, placer 10 mL d"éluant dans la cuvechromato (pot bébé) et les 10 autres mL dans un er-len bouché.
•Prépareruneplaque chromatographique; vousferez1 dépôtdel"extrait d"épinards,et1dépôtd"extraitdecarotte,déjàprêt;lesdépôtsdoiventêtrevert(respec-tivement orange) foncé, sinon concentrer les dépôts(réaliser des spots au même endroit, en séchant à lamain entre chaque spot).
•Placer la plaque dans la cuve et surveiller le front dusolvant. •Sécher la plaque à la main; entourer avec soin lestaches colorées. Q3Dessiner le chromatogramme en précisant les
couleurs observées (les colorants sont photosen- sibles, les couleurs disparaissent en 2 h). Q4Qu"est ce que l"éther de pétrole?
Q5 Q6 Essayer d"attribuer les taches aux molécules dé- crites précédemment. Q74 Séparation des colorants par chroma-
tographie sur colonne (technique mi- nichimie) On utilise comme colonne une pipette Pasteur, dans la- quelle on introduit une boulette de coton bien serrée et bien tassée, qui jouera le rôle de filtre et de bouchon. •Préparer une série de tubes à essais propres et secs etles numéroter.•Verserau dessusducotondelasilice enpoudre,puistasser en frappant doucement le corps de la pipetteavec une spatule. Le rapport longueur/diamètre doit
être de 10 environ, donc 6 cm environ de longueur pour la colonne. Ajouter un peu de sable.•Verserl"éluant préparé précédemmentà l"aide d"unepipette Pasteur ou directement avec l"éprouvette : lacolonne bien réussie doit prendre un aspect unifor-mément translucide, et le liquide, une fois arrivé auniveau ducoton,doits"écoulertrèslentement.Siunedecesconditionsn"estpasremplie,recommencer.Encours de manipulation, si onest amené à arrêter" ar-tificiellement » l"écoulement du liquide, on pourraboucher l"orifice inférieur avec le doigt.
•Quand le liquide arrive au niveau dela surfacesupé-rieure du sable, introduire environ 0,5 mL d"extraitd"épinards sur le sable, le plus près possible de lasurface, sans perturber celle-ci.
•Laisser pénétrer l"extrait dans le sable, puis remplirla pipette avec l"éluant jusqu"en haut.
•Changer de tube judicieusement pour obtenir lescouleurs les plus pures et les plus concentrées pos-sibles. Ces fractions seront passées au spectrophoto-mètre la semaine prochaine.
Q8 Quels colorants ont été séparés? Est-ce que chaque fraction contient uniquement un seul co- lorant? Remerciements pour le sujet :Stéphanie Mortier, PC*