La double hélice d'ADN est une grosse molécule formée de deux brins Chaque brin résulte de l'assemblage de plusieurs nucléotides reliés entre eux par des
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la molécule d'ADN est constituée de deux chaînes (ou brins) de nucléotides Les molécules En fonction de la taille du motif et de la répétition, on distingue :
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De la mesure de la longueur d'un fragment d'ADN...La PCR (Polymerase Chain Reaction)L'ADN
Chaque nucléotide est formé:
-d'un acide phosphorique -d'un sucre: le désoxyribose -d'une base azotée: adénine (A) ,guanine (G), cytosine (C) outhymine (T)C'est le25 avril 1953 que deux jeunes
chercheurs publièrent un petit article qui allait marquer et bouleverser le monde de la génétique et de la biologie moléculaire.James D. Watson et Francis H. Crick y
décrivent la structure de la moléculed'AcideDésoxyriboNucléique (ADN).
L'ADN est essentiellement localisédans le
noyau des cellules et constitue le support de l'information génétique.La double
hélice d'ADN est une grosse molécule formée de deux brins. Chaque brin résulte de l'assemblage de plusieurs nucléotides reliés entre eux par des liens phosphodiesters. La PCR est une réaction enzymatique permettantde reproduireunfragment d'ADNdonné. Cette réaction permet donc d' obtenir une quantitédétectable
de ce fragment partir d'une quantitéde départ indétectable. Les enzymes de restrictionL'électrophorèse en gel d'agarose
Les enzymes de restriction sont des protéines qui se lient àl'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides spécifique et coupent l'ADN au niveau de cette séquence. Les enzymes de restriction appartiennent àla classe des endonucléases, c'est-à-dire des enzymes capables de cliver les liaisons phosphodiesterentre deux nucléotides.L'enzyme de restriction agit comme des ciseaux
moléculaires, faisant des coupures dans une séquence spécifique de paires de nucléotides qu'il reconnaît. EL BARJRAJI Fattouch,JAZOULI Nawal , NAJAR Mehdi , DE LEENER Anne, MAUEN Sébastien L'agaroseconstitue un milieu plus ou moins poreux : plus sa concentration est forte et plus les pores sont petits. En milieu basique, les fragments d'ADN sont chargés négativement (par leur groupement phosphate). Placés dans un champ électrique, ils vont donc se déplacer vers l'anode. C'est leur masse moléculaire qui va régler leur vitesse de déplacement àtravers les mailles du gel dans lequel ils ont étéplacés. Plus les fragments sont petits, plus ils vont migrer rapidement et donc loin de leur point de départ. La vitesse et donc la distance de migration des fragments d'ADN sont inversement proportionnellesau logarithmede leur longueur (exprimée en paires de bases). Un colorant de charge, le bleu de bromophénol, permet de suivre visuellement l'avancement de la migration. L'ADN est repérépar fluorescence après avoir étémis en contact avec du bromure d'éthidium. Ce dernier s'intercale dans la double héliceet émet une fluorescence orange lorsqu'il est irradiépar des rayonsUV. Afin de déterminer la taille des fragments d'ADN étudiés, un marqueur de taille constituéde fragments d'ADN de tailles connues,est soumis en même temps que notre ADN àla séparation électrophorétique. _Sens de la
migration des fragments d'ADNéchantillons600 310280
234194
11872442 pb
344 pb
201 pb
143 pb
98 pbADN
enzyme enzyme enzymeMarqueur
de taillePrintemps des Sciences 2004
Sciences Biomédicales
Personne de contact : CHRISTOPHE-HOBERTUS Christiane e-mail : chobertu@ulb.ac.be"Copyright EL BARJRAJI Fattouch, JAZOULI Nawal , NAJAR Mehdi , DE LEENER Anne, MAUEN Sébastien. 2004. Ce poster est disponible sur www.ulb.ac.be/inforsciences/. Il peut être copié, adapté, modifié et diffusé pour autant que cette référence soit préservée intacte".
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