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La PCR (Polymerase Chain Reaction ou réaction de polymérase en chaîne) est une technique d'amplification Chaque cycle de PCR est constitué de trois étapes : une dénaturation de l'ADN par chauffage pour séparer les deux reel pdf

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Cela se reproduira 30 fois (en fonction du protocole de PCR) comme vous pouvez le voir sur le schéma A partir d'une copie d'ADN cible, on pourra donc obtenir 1

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Lorsque stimulé, le fluorochrome émetteur transfert son énergie au fluorochrome suppresseur voisin par le principe Page 3 Rev Biol Biotech 4 http://www rbmc

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Elle permet par son principe de faire des mesures quantitatives (expliquant l' appellation PCR quantitative, qPCR) mais elle nécessite des thermocycleurs

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PRINCIPE C'est une technique permettant de détecter un agent pathogène responsable de la mala- die La présence d'un organisme cible se traduit dans cette

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cycles varie suivant la cible que l'on amplifie et le protocole choisi En moyenne, 30 à 35 cycles sont réalisés au cours d'une PCR classique A chaque cycle

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PREPARATION du TP : Ce protocole s'adapte à l'utilisation des cuves d' électrophorèse et alimentations Sordalab Pour tout autre matériel, ajuster les quantités

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L'ADN polymérase

: enzyme qui reconnaît les amorces et assemble les nucléotides pour recopier l'ADN cible. PCR : polymerase chain reaction ou réaction de polymérisation en chaîne.

à partir d'échantillon peu

abondant (ex : goutte de sang), cette technique permet de copier rapidement des séquences précises d'ADN en de très nombreux exemplaires.

D'où son appellation de

photocopieuse ».

Utilisations de la PCR

analyse d'ADN en recherche, médecine (test diagnostique de maladie génétique, détection virale...), juridique (criminalistique, test de paternité), agroalimentaire (détection d'ingrédient, d'OGM), paléogénétique (ADN ancien ou fossile)...

Dénaturation

: 94°C

Hybridation

: 40-50°C

élongation : 72°C

Fixation des amorces

aux fragments d'ADN

Les brins d'ADN

se séparent.

Synthèse d'ADN par l'ADN

aux amorces et assemble les nucléotides.

à chaque cycle, le nombre

de copies est doublé.

En 30 ou 40 cycles,

on obtient des millions de copies de la séquence cible.

Mélange des réactifs

échantillon d'ADN avec

sa séquence cible, à recopier séquences d'ADN simple brin complémentaires de part et d'autre de la région à copier

Analyse des fragments

obtenus par électrophorèse

Le mélange est soumis à

des variations de températures rapides grâce au thermocycleur. A, T, C, G) - taille de la région cible limitée entre 100 et 8000 paires de bases

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