[PDF] [PDF] THÈSE DOCTORAT DE LUNIVERSITÉ BORDEAUX 2 - Thèses

[PDF] MYCOSES

1 Candida lusitaniae 9 Fusarium solani complexe 1 Candida palmioleophila 1 Geotrichum candidum 1 Candida parapsilosis 32 Geotrichum species 1

[PDF] Candida glabrata - Infectiologie

13 oct 2015 · Emergence de résistances de Candida aux Candida lusitaniae ≈ Mycoses avec insuffisance rénale (créatininémie > 220 µmol/l ou

[PDF] Candidoses

Candidose cutanéo-muqueuse chronique (granulome Candidose hépatosplénique (Candidose disséminée Le diagnostic de ces mycoses est difficile

[PDF] Étude de la sensibilité des levures aux antifongiques en - Edimark

ment : à côté des antifongiques “de référence” dans les mycoses profondes, amphotéricine B souches de Candida lusitaniae et de Candida guilliermondii

[PDF] THÈSE DOCTORAT DE LUNIVERSITÉ BORDEAUX 2 - Thèses

12 nov 2013 · opportuniste Candida lusitaniae ; Etude de l'interaction des levures avec l' Candida lusitaniae est une levure pathogène opportuniste Hadfield TL, Smith MB, Winn RE, Rinaldi MG, Guerra C (1987) Mycoses caused by

[PDF] Identification des champignons dimportance médicale - INSPQ

Dermatophytes ➢ Saprophytes pathogènes (champignons dimorphes – mycoses endémiques) Candida tropicalis, C krusei, C parapsilosis, C lusitaniae 9

[PDF] Indication des traitements antifongiques - Société Française des

L'espèce Candida albicans est la plus fréquente dans les candidoses invasives en réanimation et en Europe Candida lusitaniae S/R S S S S= sensible ; SDD= Bitar D, Lortholary O, Dromer F, Coignard B, Che D Mycoses invasives en

[PDF] Levures

B-Prophylaxie des mycoses à Champignons lévuriformes 123 Candida lusitaniae a surtout été isolé du tube digestif de nombreux animaux : porc 

[PDF] candida lusitaniae symptômes

[PDF] candida tropicalis symptome

[PDF] candidat libre bts 2017 cote d'ivoire

[PDF] candidature master 2 rattrapage

[PDF] candidature spontanée exemple

[PDF] candidature spontanée stage

[PDF] candide analyse chapitre 1

[PDF] candide chapitre 19 en approchant de la ville

[PDF] candide chapitre 19 figure de style

[PDF] candide chapitre 19 lecture analytique

[PDF] candide chapitre 19 question et reponse

[PDF] candide chapitre 19 résumé

[PDF] candide chapitre 19 situation de passage

[PDF] candide chapitre 30 morale

[PDF] candide de voltaire questions reponses

Année 2013

Thèse n° 2065

THÈSE

pour le Ecole doctorale Sciences de la Vie et de la Santé

Mention : Sciences, Technologies, Santé

Option : Microbiologie - Immunologie

Présentée et soutenue publiquement

Le 12 Novembre 2013

Par Ayman SABRA

Né le 01 Janvier 1987 à Beyrouth, Liban

Titre de la thèse

dpp3ǻ défectif pour une pyrophosphate phosphatase chez la levure opportuniste Candida lusitaniae

Membres du Jury

Monsieur le Pr Jean-François Moreau, Université Bordeaux Segalen ... Président Monsieur le Dr Thierry Jouault, Université Lille 2, INSERM ............... Rapporteur Madame le Dr Agnès Coste, Université Paul Sabatier Toulouse 3 ......... Rapporteur Madame le Dr Florence Richard-Forget, DR INRA Bordeaux ............. Examinateur Monsieur le Pr Marc Lemaire, Université Claude Bernard Lyon 1 ....... Examinateur Madame le Dr Karine Dementhon, Université Bordeaux Segalen ........ Directeur de thèse 2

Remerciements

Je remercie le Pr Jean-François Moreau (PU-PH, CNRS-UMR 5164, Université Bordeaux

Segalen)

Je tiens également à remercier le Dr Thierry Jouault (CR, INSERM U995, Université Lille 2), le Dr Agnès Coste (MCU, IRD UMR 152, Université Paul Sabatier Toulouse 3), le Dr Dr Florence Richard-Forget (DR, Unité MycSA, INRA, UR 1264) et le Pr Marc Lemaire (PU, UMR 5240, Université Claude Bernard Lyon 1), pour avoir accepté d juger et participer à la présentation de ce travail. Merci aussi à Pr Christophe Cullin, Dr Maria Mamani et Pr René Lessire, pour leur participation à mon comité de demi-thèse. Ce travail a été réalisé sous la direction du Dr Karine Dementhon (MCU) au sein de Bordeaux Segalen), qui fait partie du Laboratoire de Microbiologie Fondamentale et

Pathogénicité CNRS-

Je remercie Thierry

sans oublier son humour, ses conseils et sa grande générosité. remarquable disponibilité et son impeccable encadrement. Ses conseils et ses encouragements direction, et elle aura toujours ma sincère reconnaissance pour sa grande implication professionnelle et personnelle pendant toutes ces années.

Isabelle Accoceberry, Fréderic Gabriel et

Valérie Fitton-Ouabi, ainsi que Sofiane El-Kirat-Chatel (maintenant en Post-doc en Belgique) pour leur bonne humeur et leur soutien. Je tiens à remercier la Plateforme de cytométrie en flux de la SFR TransBioMed de Bordeaux et en particulier Vincent Pitard et Santiago Gonzalez (ingénieurs de recherche) pour

leur aide et leur implication continues dans les analyses quantitatives, et je remercie aussi tous les

Benoit Rousseau, pour la

Je remercie les plateformes Métabolome-Lipidome-Fluxome de Bordeaux, en particulier Dr Jean-ccupé des analyses en GC et GC/MS effectuées au cours de

ce travail. Un grand merci aussi à Vessela Atanasova-Penichon (ingénieur de recherche à

HPLC effectuées au cours de ce travail.

Je remercie les 3 Nicolas (Biteau, Landrein et Plazolle), Loïc Rivière,Virginie Coustou et 3 our leur accueil, leur aide, leur

gentillesse et pour cette ambiance très chaleureuse. Je remercie particulièrement Derrick

Robinson pour ses conseils scientifiques et personnels précieux, et les discussions intéressantes et

riches en humour de tous les jours. A ma famille et à mes amis, merci pour votre immense soutien et enthousiasme tout au long de ces années. 4

Résumé

Candida lusitaniae est une levure pathogène opportuniste émergente, responsable et constitue

fonctionnelle de gènes par génétique inverse. Cette levure est souvent associée à des résistances

aux antifongiques, d

sont décrites comme modulatrices de cette interaction. Au cours de ce travail, nous avons créé un

mutant dppǻC. lusitaniae. La mutation a

pour conséquence de modifier le taux secrété de PEA/tyrosol, des alcools aromatiques récemment

décrits comme molécules signal chez les espèces Candida. Les levures du mutant dppǻ

présentent aussi un défaut de pseudo-filamentation et de reproduction sexuée. Comparé à la

souche sauvage, le mutant dppǻment la réponse macrophagique, notamment la

production de NO et ROS, ainsi que la sécrétion de TNF-Į-10. Curieusement, la sécrétion

-10 est modulée par les levures même sans contact physique avec les macrophages. Par ailleurs, nous avons observé des effets du traitement des levures par le PEA ou le tyrosol sur la

modification des réponses immunes macrophagiques. Enfin, nous avons montré que le gène

DPP3 chez C. lusitaniae était un facteur de virulence essentiel dans des modèles murins

, le taux de TNF-Į

Mots clés : C. lusitaniae, DPP3, PEA, tyrosol, farnésol, filamentation, interaction, infection,

macrophage, souris. Laboratoire de Microbiologie Fondamentale et Pathogénicité CNRS UMR-5234

Equipe Candida et Pathogénicité

146 rue Léo Saignat Batiment 3A

33076 Bordeaux Cedex

France

5 Molecular and phenotypic characterization of a dpp3ǻ knocked-out mutant, lacking a pyrophosphate phosphatase, in the opportunistic yeast Candida lusitaniae ; A study on the interaction of yeasts with the host

Summary

C. lusitaniae, an emerging Candida species often associated with antifungal resistance, is an important model to study gene function by reverse genetics. Understanding the host-pathogen

interaction helps identifying new virulence factors and potentially new antifungal targets.

Signaling molecules are often reported as modulators of this interaction. Here we created a

dpp3ǻ knocked-out mutant, lacking a pyrophosphate phosphatase, in C. lusitaniae. This mutation modified the ratio of secreted PEA/tyrosol, two newly reported signaling molecules in Candida species. Colony morphology of yeast cells was also altered as yeasts had a defect in pseudo- filamentation, and mating capacity was severely reduced. Compared to the wild-type strain, the dpp3ǻ knocked-out mutant differently affected NO and ROS production by macrophages as well as TNF-Į and IL-10 secretion. Interestingly IL-10 secretion was found to be modulated by C. lusitaniae without the need of a physical contact with the phagocytes. Moreover we elucidated the effects of PEA and tyrosol on yeast cells leading to modulations in macrophage immune responses. At last, the DPP3 gene was found to be an essential pathogenicity factor in mice models, leading to an increase of TNF-Į secretion and brain colonization. Keywords: C. lusitaniae, DPP3, PEA, tyrosol, farnesol, filamentation, interaction, infection, macrophage, mice. 6

Publications

A. Sabra, JJ. Bessoule, V. Atanasova-Penichon, T.Noël and K. Dementhon. Host-pathogen

interaction and signaling molecules secretion are modified in the dpp3ǻ mutant of Candida

lusitaniae. En révision. A. Sabra, T.Noël and K. Dementhon. Pleiotropic effects of the DPP3 gene inactivation on the morphology and the mating ability of the opportunistic pathogenic yeast Candida lusitaniae. En soumission.

Communications

2013: 23rd European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Berlin.

Présentation de Poster C. lusitaniae and host interaction: the role of the DPP3 gene.

2011, 2012 et 2013: Séminaires dans le laboratoire de Microbiologie fondamentale et

Interaction de

C. lusitaniae ue,

moléculaire et cellulaire.

2011, 2012 et 2013: Journée jeunes chercheurs de la SFR TransBioMed (Université de

Bordeaux). Présentation de Poster (2011, 2012) Rôle du farnésol chez la levure pathogène opportuniste Candida lusitaniae. Présentation orale (2013) -pathogène et la sécrétion de molécules signal sont modulés par le gène DPP3 chez Candida lusitaniae.

2011 et 2012:

Poster Candida lusitaniae avec les macrophages: modulation de la réponse immunitaire.

2011: Symposium scientifique du réseau hôte-

Bordeaux). Présentation orale Caractérisation moléculaire et cellulaire des effets de

DPP3 chez Candida lusitaniae sur la biologie de la levure et sur son interaction avec les macrophages.

Prix et bourses

Juin 2013: Prix de la meilleure présentation orale de la journée jeunes chercheurs de la SFR

TransBioMed (Université de Bordeaux).

Juillet 2010: Bourse au mérite ministérielle Aout 2008: Bourse au mérite pour la spécialisation scientifique (Beyrouth, Liban), finançant les études en Master Microbiologie-

Bordeaux Segalen.

7

SOMMAIRE

Liste des abréviations ............................................................................ 13

Introduction ............................................................................................ 17

1) Les levures du genre Candida ............................................................................................. 17

2) Epidémiologie et incidence .................................................................................................. 20

a) Candida albicans ............................................................................................................... 22

b) Candida glabrata ............................................................................................................... 22

c) Candida tropicalis .............................................................................................................. 23

d) Candida parapsilosis, Candida famata et Candida guillermondii .................................... 23

e) Candida krusei ................................................................................................................... 23

f) Candida kefyr ..................................................................................................................... 23

g) Candida dubliniensis ......................................................................................................... 23

h) Candida lusitaniae ............................................................................................................. 23

.......................................................................................... 24

4) Les antifongiques ................................................................................................................. 24

a) Inhibition de la synthèse protéique: les pyrimidines fluorées ............................................ 25

b) Altération des stérols de la membrane cellulaire fongique: les polyènes et les azolés ...... 25

c) Altération de la paroi fongique: les échinocandines ou lipopeptides ................................. 25

5) Mécanismes de résistance aux antifongiques .................................................................... 26

................................................................................................................................................ 26

................................ 27 ....................................................... 27 d) Modification de la cible cellulaire conduisant à la diminution de son affinité pour

......................................................................................................................... 27

e) Disparition de la cible et son remplacement par le

autre métabolite ...................................................................................................................... 27

............................................................................................. 27

6) Du commensalisme au parasitisme

virulence de la levure ............................................................................................................... 28

-Candida ................................................................................................... 29

i) Les mécanismes de reconnaissance des Candida ........................................... 30

Les TLR ........................................................................................................................ 32

Les CLR ........................................................................................................................ 32

ii) Les cellules de la réponse immunitaire innée anti-Candida .......................................... 34

Les cellules endothéliales ........................................................................................... 34

Les cellules dendritiques ............................................................................................ 35

Les monocytes et les macrophages............................................................................ 35

8

Les granulocytes neutrophiles ................................................................................... 38

b) Facteurs de virulence des Candida .................................................................................... 41

i) Adhérence ....................................................................................................................... 42

La famille de gènes ALS (Agglutinin-like sequence) ................................................... 42

L'Int1 (Integrin-like protein) ....................................................................................... 42

La protéine pariétale Hwp1 (Hyphal Wall Protein) .................................................... 42

Les protéines Mnt1 et Pmt1 ....................................................................................... 43

La famille des Sap (Secreted Aspartyl Proteinases) ................................................... 43

La protéine Plb1 (Phospholipase B1) ......................................................................... 44

Les Sod (Superoxyde dismutases), la catalase, la glutathion peroxydase ................. 44

La protéine Pra1 (pH-regulated antigen 1) ................................................................ 45

iii) Métabolisme nutritionnel .............................................................................................. 46

iv) Formation de biofilm .................................................................................................... 46

v) Transition morphogénétique .......................................................................................... 48

7) Molécules signal ................................................................................................................... 50

a) La Résolvine E1 (RvE1) .................................................................................................... 50

b) La Prostaglandine E2 (PGE2) ............................................................................................ 51

c) Le Farnésol ......................................................................................................................... 51

d) Le Tyrosol .......................................................................................................................... 54

e) Le Phényléthanol (PEA) .................................................................................................... 55

8) Equipe "Candida ................................................ 55

Matériels et Méthodes ........................................................................... 58

1) Matériels biologiques et conditions de culture .................................................................. 58

a) Souches de Candida lusitaniae .......................................................................................... 58

Escherichia coli ................................................................................................ 60

c) Plasmides ............................................................................................................................ 60

d) Macrophages ...................................................................................................................... 60

e) Stockage et conservation des souches en milieu liquide .................................................... 61

2) Techniques de biologie moléculaire .................................................................................... 61

a) Extraction et purification des acides nucléiques ................................................................ 61

i) ADN génomique de levures ............................................................................................ 61

ii) ARN total de levures ..................................................................................................... 62

Escherichia coli ......................................................................... 63 ............................................................................ 63

c) Séquençage nucléotidique .................................................................................................. 65

d) Techniques de clonage et transformation des bactéries et des levures .............................. 65

i) Purificatio ......................................................................................... 65

ii) Digestions enzymatiques ............................................................................................... 65

iii) Ligation ......................................................................................................................... 66

iv) Clonage grâce au " In-fusion HD cloning Kit » ........................................................... 66

v) Transformation génétique des bactéries par choc thermique ......................................... 67

9

vi) Transformation des levures ........................................................................................... 67

e) Construction de bactéries productrices de la protéine Dpp3 .............................................. 67

f) Construction de levures sur-exprimant la protéine Dpp3 couplée à la GFP ...................... 67

g) Southern-blot ...................................................................................................................... 68

i) Préparation sondes .......................................................................................................... 68

ii) Transfert Hybridation Révélation ............................................................................ 68

quotesdbs_dbs50.pdfusesText_50