9 nov 2012 · Intensification de la brique « fermentation alcoolique » de http://www worldwatch org/system/files/EBF008_1 pdf (dernière consultation
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M:Institut National Polytechnique de Toulouse (INP Toulouse) Mécanique, Energétique, Génie civil et Procédés (MEGeP) INTENSIFICATION DE LA BRIQUE "FERMENTATION ALCOOLIQUE" DE SUBSTRATS BETTERAVIERS (ET AUTRES SUBSTRATS) POUR LA PRODUCTION
D'ETHANOL
vendredi 9 novembre 2012Julien Riess
Génie des procédés et de l'environnement
Pr. Mohamed GHOUL
Pr. Jean-Marie SABLAYROLLESPr. Patricia TAILLANDIER Dr. Claire JOANNIS-CASSANUMR 5503 Laboratoire de Génie ChimiquePr. Jean-Luc BARET
M. Bruno GAGNEPAIN
M. Franck JOLIBERT
Pr. Pierre STREHAIANO
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces
cerevisiae...................................................................................................................... 22
.................................................................................................. 22
........................................................ 37Saccharomyces cerevisiae
................................................................................ 54.................................................................................................... 60
..................................................................................................... 60
........................................................................................................................... 61
............................................................................ 63 ........................... 68 ................................................................... 68 ..................................................... 70 ................................................................. 71......................................................................................................... 72
..................................................................................... 78 ..................................................................... 88Saccharomyces cerevisiae
.................................. 126 ................................................................................................ 148 .............................................. 151.............................................................................................................. 154
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces
cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae,
Saccharomyces cerevisiae
Intensification de la brique " fermentation alcoolique » de substrats betteraviers pour la production d"éthanol 10/2012
Chapitre I : Etude bibliographique
ADEME Page 26 sur 177 Le but de cette opération est de former la masse-cuite (sucre refroidi) par cristallisation du sucre
c onte nu dans le sirop. L"introduction de très fins cristaux dans le sirop amorce la cristallisation dusucre, qui se propage spontanément. L"essorage permettra de séparer d"une part le sucre cristallisé et
la mélasse. Figure 2: Schéma de production de bioéthanol à partir de betteraves sucrièresLes v
aleurs présentées tableau 2 ne sont que des moyennes observées car la composition des
différents jus peut fortement varier selon les procédés utilisés, selon les variétés de betteraves
sucrières utilisées ou encore selon les sols cultivés.Intensification de la brique " fermentation alcoolique » de substrats betteraviers pour la production d"éthanol 10/2012
Chapitre I : Etude bibliographique
ADEME Page 28 sur 177 Dans le cas du " dry milling », illustré figure 3, les grains sont nettoyés et broyés. L"amidon est
h ydrolysé en deux étapes par voie enzymatique. La première étape, réalisée à l"aide d"une -amylase
est appelée liquéfaction. La seconde étape est appelée saccharification et utilise une
amyloglucosidase. Ceci aboutit à la formation d"un sirop de glucose. Ce sirop sera alors utilisé pour
produire de l"éthanol par fermentation. Les drèches et les vinasses seront valorisées en alimentation
animale. Les étapes de saccharification et de fermentation peuvent être associées afin de diminuer la
durée du procédé. Ceci permet de libérer le glucose au rythme souhaité dans le milieu par la
régulation de l"activité amylolytique. Figure 3: Schéma de transformation des céréales en éthanol par voie "dry milling" Pource qui est de la voie humide, ou " wet milling », illustrée figure 4, les grains sont trempés dans
une solution aqueuse contenant de l"acide sulfurique qui facilite la séparation des composants. Un
broyage est ensuite réalisé afin de séparer les composants. Ceci permet de séparer l"amidon du reste
de la plante et de générer de nombreux coproduits comme des huiles ou du gluten servant pourl"alimentation humaine ou animale. L"amidon ainsi obtenu est ensuite liquéfié et saccharifié par voie
enzymatique.Intensification de la brique " fermentation alcoolique » de substrats betteraviers pour la production d"éthanol 10/2012
Chapitre I : Etude bibliographique
ADEME Page 29 sur 177
Figure 4: Schéma de transformation des céréales en éthanol par la voie "wet milling" I.2.3 .1.c. A partir de matières premières lignocellulosiquesL"éthanol peut aussi être produit à partir de matière lignocellulosique, comme le bois, la paille, les
herbacées..., il est alors dit biocarburant de 2nde génération. Contrairement à l"amidon ou au
saccharose qui servent de réserves d"énergie pour la plante en vue d"une utilisation ultérieure, la
matière lignocellulosique sert de structure pour les plantes. Il s"agit donc d"une matière stable et
résistante aux agents extérieurs et donc plus difficile à dégrader. Elle est composée principalement de
lignines qui sont des composés polyphénoliques inutilisables par la levure, de cellulose et
d"hémicelluloses qui sont des composés polyosidiques. Comme pour l"amidon, la cellulose et les
hémicelluloses doivent être hydrolysées avant utilisation par la levure car elle n"a pas le pool
enzymatique nécessaire pour cela. Les procédés d"hydrolyse resemblent à ceux employés pour
l"amidon, ils employent soit un traitement acide soit un traitement enzymatique. Le premier est certes
peu cher mais il produit des inhibiteurs de fermentation et a un faible rendement d"hydrolyse. Le
traitement enzymatique à l"inverse, est onéreux à cause du coût de l"enzyme mais il est performant et
ne produit pas d"inhibiteurs (Taherzadeh et Karimi, 2007). Cependant, le développement des
technologies portant sur la production de carburant 2nde génération tendent diminuer le coût de
l"hyd rolyse enzymatique.La production d"éthanol cellulosique fait actuellement l"objet de nombreuses recherches. Elle reste
une voie d"avenir due à la disponibilité de la matière première ainsi que la possibilité de fermenter
l"ensemble de la plante simultanément. I.2.3.1.d. Représentation mondiale des matières premières utilisées pour la production d"éthanolSelon les régions du monde l"éthanol est produit à partir de différentes matières premières comme le
montre le tableau 4. Ceci s"explique à la fois par les climats rencontrés dans chaque pays mais aussi
par les spécificités historiques des pays comme pour la betterave en France. Les Etats-Unis
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiaeZymomonas mobilis
Zymomonas mobilis
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces
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Chapitre I : Etude bibliographique
ADEME Page 39 sur 177
Figure 7: La glycolyse (Dickinson et Schweizer, 1999)I.3.2.1.b. Le noeud métabolique du pyruvate
Après
la glycolyse le pyruvate peut être orienté, comme illustré figure 8, soit vers le cycle de l"acide
citrique soit vers la production d"éthanol. Lorsque le pyruvate est présent en grande quantité dans la
cellule, suite à une activité glycolytique intense, il est orienté vers la production d"éthanol.
Figure 8: Noeud métabolique du pyruvate
Intensification de la brique " fermentation alcoolique » de substrats betteraviers pour la production d"éthanol 10/2012
Chapitre I : Etude bibliographique
ADEME Page 41 sur 177 I.3.2.1.e. La voie des pentoses phosphates
L e gl ucose 6-phosphate est à la fois le substrat de la glycolyse et celui de la voie des pentosesphosphates, illustrée figure 10. Le choix entre ces deux voies dépend des exigences cellulaires
ponctuelles en énergie métabolique (ATP), en précurseurs biosynthétiques et en potentiel redox. En
effet, la voie des pentoses phosphates sert à la production de NADPH qui est indispensable aux
réactions d"oxydoréduction des levures (Cipollina et col., 2009). Alors que la glycolyse est ralentie
lorsque la charge énergétique est élevée, la glucose 6-phosphate déshydrogénase (et donc la voie
des pentoses phosphates) est inhibée par des concentrations élevées de NADPH et par les
intermédiaires de la biosynthèse des acides gras. Ceci permet un maintien de l"équilibre entre
l"énergie et le pouvoir réducteur contenu dans la cellule.Figure 10: Voie des pentoses phosphates
I.3.2 .2. Le métabolisme fermentaireLa fermentation est une réaction biochimique, à localisation cytoplasmique, permettant la libération de
l"énergie contenue dans un substrat organique par l"action d"enzymes microbiennes et qui aboutit à
l"oxydation incomplète du substrat. Cette réaction ne fait pas intervenir la chaine de transporteurs
d"électrons. Elle se distingue de la respiration par son faible rendement énergétique et la diversité des
produits d"oxydation.I.3.2.2.a. La fermentation anaérobie
En anaérobiose, Saccharomyces cerevisae est privée de son accepteur final d"électron qui est
l"oxygène. Les coenzymes d"oxydoréduction, comme le NADH+H +, ne peuvent donc plus être réoxydés. La cellule doit donc utiliser un autre accepteur final d"électron qu"elle doit fabriquer à partir
de son substrat. Pour Saccharomyces cerevisae il s"agit principalement de l"acétaldéhyde. La
réduction de l"acétaldéhyde en éthanol permet ainsi de maintenir l"équilibre rédox en réoxydant le
NADH+H+ produit au cours de la glycolyse.
L"équ
ation bilan de la réaction de fermentation du glucose par Saccharomyces cerevisae est : C6H12O6 + 2 Pi + 2 ADP 2 C2H6O + 2 CO2 + 2 ATP (eq2)
Glucose + Phosphate inorganique+ Adénosine diphosphate Ethanol + Dioxyde de carbone + énergie
Saccharomyces cerevisae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces
cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces
cerevisiaeSaccharomyces
cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisae
Saccharomyces cerevisae
Saccharomyces
cerevisiaeIntensification de la brique " fermentation alcoolique » de substrats betteraviers pour la production d"éthanol 10/2012
Chapitre I : Etude bibliographique
ADEME Page 52 sur 177 I.3.4. Les procédés de fermentation
I.3.4.1. Un système multiphasique
Comme illustré figure 12, les fermentations sont des procédés multiphasiques. Ceci pose des
c ontr aintes biologiques et physico-chimiques. Les cellules vivantes constituent un système organiséavec des entrées de substrats, d"oxygène, de facteurs de croissance et des sorties de déchets comme
le CO2 et l"éthanol.
La pa
rtie active de la matière vivante, que constituent les protéines, nécessite un environnement
adéquat du point de vue du pH, de la température, de la force ionique, de la présence de cofacteurs
enzymatique et d"effecteurs enzymatiques. Ceci permet le développement, la maintenance et la
reproduction des cellules dans de bonnes conditions.Les systèmes multiphasiques posent des problèmes de transferts entre chacune des phases, ce qui
entraine, lors de leurs mises en oeuvre à grande échelle, l"hétérogénéité du milieu.
Figure 12: La fermentation: un système triphasique I.3.4 .2. Les modes de conduites de fermentationsI.3.4.2.a. Les cultures discontinues
La fabrication d"éthanol peut être réalisée à l"aide de procédés discontinus, aussi appelés batch, dans
des bioréacteurs de grands volumes, de l"ordre de 500 m3 (Schmid, 2005). Les cultures discontinues
constituent des systèmes clos pour la phase liquide. Normalement, il n"y a pas d"addition d"éléments
au milieu et la culture se développe jusqu"à ce qu"il y ait carence d"au moins un nutriment essentiel ou
jusqu"à ce qu"une modification importante de l"environnement (pH, accumulation de produits
toxiques...) bloque la croissance. Cependant, il est possible d"agir sur le milieu de fermentation en
régulant par exemple le pH ou le niveau de mousse, le système n"est donc pas totalement clos.Ces types de cultures n"ont pas des rendements constants tout au long du procédé car la composition
du milieu évolue au cours de la fermentation. Les cultures en batch imposent des temps morts lors du
remplissage et de la vidange des cuves. De plus il est nécessaire de stériliser l"installation entre
chaque fermentation. eSaccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
4°C4°C
a Nf xx x xIntensification de la brique " fermentation alcoolique » de substrats betteraviers pour la production d"éthanol 10/2012
Chapitre III : Résultats et discussion
ADEME Page 84 sur 177
Figure 24: Schéma de la cuverie du site n°3. Les déb its indiqués sont en rouge sous les cuves
corr e spondent aux temps de rétention dans chaque cuve. 1h1,801,95
-2 -1 0 1 -2 -1 0 2,10 2,25 1 1 0 -12 1 B A1,801,95
-2 -1 0 1 -2 -1 0 2,10 2,25 1 1 0 -12 1 B A1,41,61,8
-2 -1 0 1 -2 -1 0 2,0 -2 1 1 0 -1 1 C A1,501,75
-1 0 1 -1 0 2,00 -2 2 1 0 -1 1 C B 1314-2 -1 0 1 -2 -1 0 15 1 1 0 -12 B A 10 12 -2 -1 0 1 14 1 0 -1 -2 1 C A 13 14 -1 0115
-2 2 1 0 -1 1 C B