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Les Avantages des RabMAbs - Abcam

Les anticorps monoclonaux de lapin RabMAbs associent les avantages d’une meilleure reconnaissance antigénique due au système immunitaire du lapin avec la spécificité et la consistance d’un monoclonal, générant ainsi des anticorps d’une qualité exceptionnelle

6 Valeurs et avantages des aires protégées

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Les Avantages

des RabMAbs

RabMAbs

(Rabbit Monoclonal Antibodies)

Anticorps monoclonaux de lapin

Anticorps de qualité supérieure

R a b MAb s® L e s a n t i c o r p s de h a u t e q u a l i t L e s a n t i c o r p sdeh a u t e q u a l i t

Haute affinité

Epitopes nouveaux

Haute spécificité

Haute spécificité

#4 #6 #5 #5

Avantages des RabMAbs

2

Table des matières

1. Réduction du bruit de fond 6

7 8 9 10 11 12

13Les avantages des RabMAbs

3 4 4 14 5

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Les RabMAbs (Rabbit Monoclonal Antibodies) sont issus d'une technologie unique et exclusive permettant de développer des anticorps monoclonaux chez le lapin, au lieu de la méthode conventionelle utilisant la souris. Cette technique, similaire à celle développée pour les anti- corps monoclonaux de souris, utilise un partenaire de fusion breveté (lignée cellulaire immortelle) pouvant fusionner avec les cellules B, formant ainsi des hybridomes de lapin. Ces hybridomes sont alors criblés pour sélectionner des clones sensibilité, l'antigène de choix. Les anticorps sont ensuite applications (Fig. 1). Les anticorps produits par la technologie RabMAb per- mettent une meilleure reconnaissance antigénique en com- paraison avec des anticorps traditionnels de souris. En effet, le système immunitaire du lapin génère une grande diversité améliorant ainsi la probabilité d'isoler des anticorps fonction nels pour une plus grande gamme d'applications (1, 2) Contrairement à la souris, la réponse immunitaire du lapin induite par des molécules organiques ou des peptides est supérieure. C'est souvent pour cette raison que les anticorps polyclonaux sont développés chez le lapin pour la recherche et les applications de diagnostics, allant du dépistage de drogues au diagnostic clinique.

Lapins

immunisés

Cellules B isolées

Hybridomes

Hybridomes criblés par ELISA pour une

reconnaissance spécifique de l'antigène

RabMAbs

Caractérisation de l'anticorps

(Western, IHC, ICC, Flow, IP, test de neutralisation, etc.)

Partenaires de fusion

(240E-W2, US patent 742987)

1. Rabbit monoclonal antibodies: a comparative study between a novel cat

egory of immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal antibodies.

Rossi S, [

Am J Clin

Pathol. 2005 Aug;124(2):295-302]

2. Rabbit monoclonal antibodies show higher sensitivity than mouse monoclonals for estrogen

and progesterone receptor evaluation in breast cancer by immunohistochemistry. Rocha R, Pathol Res Pract, 2008;204(9):655-62. Epub 2008 Jun 18]

Avantages des RabMAbs

4 Les anticorps monoclonaux de lapin RabMAbs associent les avantages d' une meilleure consistance d'un monoclonal, générant ainsi des anticorps d' une qualité exceptionnelle. Les résultats publiés par des laboratoires indépendants compara nt les anticorps mono- clonaux de lapin aux monoclonaux de souris ont démontré que les Ra bMAbs permettent probabilité de récupérer des anticorps fonctionnant dans une la rge gamme d'applications est donc accrue. Les anticorps RabMAbs sont souvent les outils idéaux pour des applica- Grâce à la reconnaissance d'un large éventail d'épitop es et une meilleure réponse immu- nitaire pour les cibles peu immunogènes (telles que les antigènes de souris, ou les épitopes de petites tailles comme les peptides ou molécules organi ques), le développe- ment d'anticorps hautement fonctionnels pour ces cibles particuliè res devient donc possible grâce à la technique RabMAb. Par exemple, des anticorps d e qualité ont été développés pour la reconnaissance de sites présentant une doubl e phosphorylation. En plus des nombreux avantages que présente la technologie des monocl onaux de pensables et permettent de sélectionner des anticorps de haute qualit

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contre les peptides, petites molécules et protéines de rongeurs

épitopeslimitée pour les protéines de

rongeurs

Peptides et molécules

organiques sont souvent de faibles immunogènes limitée (immunodominance) de l'ordre du picomolaire (K D =10 -12

M)de l'ordre du nanomolaire (K

D =10 -9 M)

ElevéeMoyenne

WB, ELISA, Cytométrie en Flux,

IP, ICC, excellents

WB, ELISA, Cytométrie en Flux, IP, pas toujours adapté de colon humain avec le RabMAb anti-CDX2 (ab76541) en comparaison avec un monoclonal de souris (dilution 1/1000) sein (humain) avec le RabMAb anti-

E-Cadhérine (ab40772) en comparai-

son avec un monoclonal de souris (dilution 1/50) de sein (humain) avec le RabMAb comparaison avec un monoclonal de souris (dilution 1/500)

RabMAbs

RabMAb

RabMAb

RabMAb

Monoclonal de souris

Monoclonal de souris

Monoclonal de souris

Avantages des RabMAbs

6

1. Réduction du bruit de fond

Les RabMAbs en tant que monoclonaux, détectent un épitope unique l imitant ainsi les réactions croisées avec les autres protéines présentes dans l'échantillon. Il a été permettant d'obtenir un meilleur rapport réponse/bruit de fond qu' avec les anticorps monoclonaux de souris à concentrations égales. Par conséquent, les RabMAbs peuvent sensibilité tout en maintenant un bruit de fond minimal. carcinome de côlon humain utilisant un

RabMAb anti-c-Myc (ab32072).WB sur lysats cellulaires MCF-7 (1), Ramos (2), SW480 (3), Molt-4 (4), RabMAb anti-MCM2 (ab108935). anti-Phospho-AMPK alpha 1 (pS496) (ab92701).

(ab32107)RabMAb anti-Ki67 (ab154201). un RabMAb anti-CD38 (ab108403) (rouge) et une IgG de lapin (négatif) (vert).

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WB sur lysat de cellules C6 utilisant

K56) (ab76307). Colonne 1: non traité,

WB utilisant un RabMAb anti-

(non-méthylé)121212 traductionnelles Le système immunitaire du lapin peut fabriquer des anticorps qui reconnaissent des épitopes de

(phosphorylation, méthylation, acétylation, sumoylation). Chez la souris, les molécules organiques

ou les peptides génèrent une réaction immunitaire beaucoup plus faible que chez le lapin. anti-c-Jun (pS63) (ab32385).

Colonne 1 et 3: non traité,

Colonne 2 et 4: traité avec

UV ou AnisomycineWB sur lysat cellulaire Jurkat utilisant RabMAb anti-Colonne 1: non traité, Col- onne 2: traité à l'insulineutilisant un RabMAb anti-S6K Colonne 1: non traité, col- onne 2: traité avec EGF 1212
12

1 2 3 4

Avantages des RabMAbs

8 tissus avec un minimum de prétraitements. De plus, il est possible d' utiliser en parallèle un anticorps monoclonal de souris avec un anticorps RabMAb pour effectuer un double marquage sur une même coupe de tissu. de souris vessie utilisant un RabMAb anti-CK8 (ab53280) avec Fast Red et un monoclo- nal de souris anti-Ki-67 avec du DAB du col de l'utérus utilisant un RabMAb anti-AIF (ab32516) avec Fast Red et un monoclonal de souris anti- Ki-67 avec du DAB.

Double marquage utilisant les RabMAbs:

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D des RabMAbs et anticorps monoclonaux de souris traditionnels.

Mesures de K

D effectuées sur 850 RabMAbs.

Comparaison des valeurs K

D des RabMAbs avec les anticorps thérapeutiques couramment utilisés:

1. Applications And Engineering Of Monoclonal Antibodies. David J. King, 2007.

J Immunol Methods. 2009 Feb 28;341(1-2):86-96. doi: 10.1016/j.jim.2008.11.004. Epub 2008 Nov 28]

ER1.28 x 10

-12

ID12.82 x 10

-12

C299.57 x 10

-11

Į1.25 x 10

-11

ȕ1.99 x 10

-10 D

5.0 x 10

-9

Rituxan8.0 x 10

-9

Synagis1.0 x 10

-9

Remicade2.0 x 10

-10

Avastine5.0 x 10

-10 D déterminée par le rapport des constantes de vitesse cinétique ( k off /k on ) ou le rapport des concentrations des constituants à l'équilibre. Un faible K D de l'anticorps pour son ligand et une meilleure sensibilité de dé tection. Alors que la plupart des anticorps monoclonaux thérapeutiques ont un K D

à l'échelle du nanomolaire (10

-9

M), les

RabMAbs ont des K

D pouvant souvent atteindre le picomolaire (10 -12

M) démontrant de façon

(2)

Avantages des RabMAbs

10 reconnaissant des changements épitopiques subtiles induits par le cli vage protéique ou des épitopes très similaires. % Réactivité

Progestérone100

0.901

Cortisol0.035

Desoxycorticostérone1.59

20a Dihydroprogestérone0.016

20b Dihydroprogestérone0.02

Pregnenolone0.764

Pregnenolone-3-SO

4 0.426

Site de clivage

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La majorité des protéines humaines sont très conservées entr e la souris et l'humain. Par conséquent, ces protéines ont tendance à être moins immunogè nes lorsque que la souris est utilisée en tant qu'animal hôte. d'épitopes permettant la découverte de nouvelles cibles antigé niques.

Comparaison en Western Blot des réponses immunitaires de lapin et de souris montrant ainsi que le sérum de lapin reconnait

plus d'épitopes que celui de souris. 1 2 3

SOURISLAPIN

1 2 3

Le lapin reconnait plus d'épitopes

1. Marqueur de poids moléculaire

2. Fibronectine

3. Fibronectine traitée par une protéase

5 souris et 3 lapins

Immunisation par la ? bronectine humaine

Sérum polyclonal

Analyse Western Blot

et variés Le système immunitaire du lapin est différent de celui de la souri s. Ces différences sont large- ment attribuées à la faible immunodominance du lapin et un large r

épertoire de cellules B.

Lors du développement des anticorps, la reconnaissance épitopique sera élevée chez le lapin. L'étude ci-dessous compare, par Western Blot, les réponses immu nitaires entre le lapin et la souris. Notre expérience dans le développement d'anticorps mono clonaux suggère que le système immunitaire de lapin peut développer une plus grande diver sité d'anticorps contre gamme plus large d'épitopes.

Avantages des RabMAbs

12

IF et FACS) ainsi qu'avec des échantillons provenant de différentes espèces (humain, souris et

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souris utilisant un RabMAb anti-MCM2 (ab108935)souris utilisant un RabMAb anti-EGFR (pY1068) (ab40815) souris utilisant un RabMAb anti-CD3

gamma (ab134096)intestin de souris utilisant un RabMAb anti-Caténine (p120) (ab92514)de souris utilisant un RabMAb anti-GFAP (ab68428)

Les RabMAbs sont des outils idéaux pour nos clients travaillant sur d es échantillons de souris. L'utilisation d'anticorps monoclonaux de souris sur des tissus de s ouris peut être probléma- tique et implique un protocole complexe. Les RabMAbs permettent d'é viter les problèmes dequotesdbs_dbs16.pdfusesText_22