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Dissection de la larves de chironome (observation des chromosomes

Dissection de la larve de chironome (observation des chromosomes géants) Matériel: Vers de vase achetés chez Décathlon ( 3 magasins en île de France à Montreuil prés du carrefour (grande surface), prés du stade de France ), une loupe binoculaire ,une lampe , deux pinces fines , un microscope , le vert de Methyle pour montrer que le

Atelier 1 Observation microscopique de noyaux de cellules

Chez les larves de certains insectes comme celles de la drosophile (mouche du vinaigre) ou du chironome (ver de vase), les glandes salivaires possèdent des cellules dont le noyau contiennent des chromosomes géants

A notre première séance nous avons réalisé et observé une

Chromosomes géants Schéma d'une cellule des glandes salivaires De même, pour le blé, on a coupé l'extrémité de la racine de blé en train de germer Puis, là aussi nous avons écrasé les racines de blé entre 2 lames épaisses de verre et déposé une goutte de colorant ( rouge carmin + acide acétique ) sur une lame

en Afrique de l’Ouest 1 Techniques d’étude Identification

l’étude précise des chromosomes géants des glandes sérici- gènes des larves permit à DIJNFS~R (1966) d’entreprendre l’étude cytotaxonomique du complexe S damlzosum : parmi des larves en provenance d’Ouganda il identifiait 4 types cytologiques différents En 1969, DUNBAR distingue 9 types

APPLICATIONS RADIOBIOLOGIQUES DE LA PHYSIOLOGIE CELLULAIRE

6 1 Mode de synthèse des histones 65 6 2 Chromosomes géants des larves de Diptères 66 6 3 Fixation d'actinomycine et cinétique de la réaction de Feulgen dans les noyaux de cellules différenciées 69 6 4 DNA kinétoplastique chez les Trypanosomidés 69 6 5 Mode d'action du mercaptoéthanol 70

Etude de la cytogénétique et la génétique des Culicidae et

KITZMILLER (corn pers ) a remarqué que les chromosomes des espèces halophiles étaient généralement plus faciles à lire que ceux des espèces du~çaquico1es Partant de cette observation, le~ larves des espices d'eau douce ont été élevées dans un uilieu 1ég~rement salé; les bras des chromosomes se d6rou1ent alors plus aisément et

Linformation héréditaire est portée par des gènes situés sur

Comparaison, au même grossissement, de chromosomes géants de larves d’insecte et des 46 chromosomes humains (entourés) UNITE & DIVERSITE DES HUMAINS Les explorateurs des chromosomes Ernst Abbe (1840 - 1905) En 1873, le physicien Abbe étudie l’optique et perfectionne le micro-scope en inventant le condenseur, élément qui permet d

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CENTREDEBRAZZAVILLE

Serviced'Entomologiemédicale

desCulicidaeetdesSimuliidae

RAPPORTDESTAGE

ParP.CARNEVALE

ChargédeRecherchesstagiaire

RAPPORTDESTAGE

ETUDEDELACYTOGENETIQUEETLAGENETIQUE

DESCULICIDAEETDESSIMULIIDAE

Baséesurunséjourde45joursdansles

laborptoiresdesProfesseurs -J.B.KITZMILLER, -G.B.CRAIGJr., -K.H.ROTHFELS,

DepartmentofZoology,..Urbana.

UniversityofIllinois,U.S.A.

DepartmentofBiology,

UniversityofNotre-Dame,

Notre-Dame,Indiana,U.S.A.

DepartmentofBotany,

UniversityofToronto,

Toronto,

Ontario,CANADA.

CYTOGENETIQUEDESANOPHELES

1-1-

1-1-2-Elevagedesmutantsd'A.albimanuG.

1-1-3-Quelquestechniquesutiles.

a-Techniqued'isolementdesfemelles b-Techniquedecomptagedesoeufs c-Techniquedecopulationforcie d-Techniquedeponteforcée

1-2-1-Produitsutilisés

a-Fixat:eut: b-Colorant c-Milieuxdemontage

1-2-2-Dissectiondeslarves

1-2-3-Obtentiondeschromosomes

a-"Squashtechnic" b-"Taptechnic"

1-2-4-Préparationpermanente

1-3-1-Rappelsuccint

1- 3-2-J:1atiri e 1

a-Priparationspersonnelles b-Collectionsmisesànotredisposition

1-4-1-Rappelssuccints,

1-4-2-Matériel

1-4-3-Observations

II-CYTOGENETIQUEETn'AEDESAEGYPTI.

11-1-Cytogénétiqued'Aedesaegypti

tènes. a)MéthodesdeMESCHER(1963) b)Remarquespersonnelles.

11-1-2-Chromosomespolytènes

a)Dissectiondeslarvesetpréparationdes glandessalivaires. tènes. bl)Observationspersonnelles b2)TravauxdeMESCHER(1963)etRAI c)Discussionetperspectives.

11-1-3-Chromosomesmitotiques.

a)Principalestechniques b)Observations.

11-2Génétiqued'Aedesaegypti.

a)Souchesetobservationspersonnelles -Matériel -Remarques b)Elevagederoutinedesmutants c)Conservàtiondessouches

11-2-2-Cartesgéniques

a)Rappelssuccincts .al)Phénomènerdte.linkage a2)Caractèresliésausexe a3)Phénomènedecrossing-over b)Locationd'ungène bl)Croisements b2)Interprétationdesrésultats aegypti.

11-3-1Luttebiologique

..Principes b -T'echniques

A-Stérilisationdes

"\Al-Chimiostérilisations

A2-Irradiation

Manipulationsgénétiques

Bl-Distorsiondusex-ratio'

B2-Translocationschromosomiques

B3-Contrôlegénétiquedesvecteurs

filaires

Premiersrésultats

d·-Perspectives

11-3-2-Cytotaxonomie.

III-CYTOTAXONOMIEDESSIMULIIDAE

de

111-1-depréparationdeschromosomes.

111-1-1-Dissectionùeslarves

a)Technique"pushandpull"deNEWMAN b)TechniquedeDUNBAR c)Technique"ouvrirettirer" a)TechniquedeROTHFELSetDUNBAR:"Feulgen technique" technique"

111-1-3-Montagespermanents

a)TechniquedeNEWMAN b).TechniqùedeROTHFELS c)TechniquedeDUNBAR

111-2-Observations

111-2-1-Observationspersonnelles

Prosimuliumfuscum.

111,,2-2..Cytotaxonornie

chromosomesgéantsde a)LecomplexeSimuliumdamnosum b)Lesespècesjumelles c)Leproblèmeduchromosome'sexuel d)PolyplordieetParthénogénèse e)Leproblèmedeshybrides f)phyl/étiques.

CONCLUSIONETCONSIDERATIONS

sansmodificationsessentiellesdubiotope. quenuisance. lasciencequinousintéresse.

ROTHFELS.

- 2 - Ce stagenousapermissuccessivement -lacytoginétiquedesanophèles, -lacytogénétiquedessimulies. delrJRIGHTetPAL(1957).

1-CYTOGENETIQUEDESANOPHELES

61801,U.S.A.).

Selon(corn.pers.)onpeutdire,qu'iderares

Sud(Anophelesdarlingi.!.muneztovari).

lesimportantstravauxqui's'yrattachent. ',\,1 --3 etKITZMILLER,1971). d'expressionbiochimique. p.réparatîons -élevageméticuleuxdes -optimaleparbac,

1enent,

débutduquatrièmestade. 1 -dissection,fixationetcoloration, -premièreobservation, -écrasement("squashtechnic") lés, -bonnededeibandesdonc -unecartographiecorrecte.

Apartirdecettedeonpeutalorsobser-

- 4 - lesparticu1iiresqu'ellesC'estcette

Urbana.

depuisplusieursgénérations -Anophe1es -Anophe1esquadrimacu1atus -Anophe1esatroparvus corn.pers.). ceuxdesespèces sontplusnettes. eaudoucedé-ionisée, - 5 - 25
0 chromosomesn'enserontqueplusnets. ximaleduarticletarsal, mentairesurletroisièmearticletarsal, lesetdesfemelles"sauvages"albimanus. 6 dor saleduc0b aye"exp0séea ux p i qûr e sdesan0pr."es.est!'asé echa que ves. lephénotype.: -sauvages, -bisignatus -trisignatus -"deformedhindtarsus" individusdontlestarsesposté- -mâle-femelle -sauvage-mutant représentés - 7-. le!:lieuxmarqué. a)Techniqued'isolementdesfemelles. ron2à 3cm.Attendrelaponteetcompterlenombred'oeufs. b)Techniquedecomptagedesoeufs. touslesoeufssanslesabîmer. lesoeufsselontroiscatégories -oeufsnormalementéclos, - 8 - l'intérieur. sultats nés+

Nb.d'oeufsnon

nonembryonnés+Nb.d'oeuf3nonéclos). donne,enréalitéaucunelarveviable. c)Techniquedecopulationforcée.

Cettes'emploiecouremmentpourBaintenirles

élevagesdpunctipennissA.!::..!.

serfaceventraleverslehaut. auniveaudel'abdomendelafemelle.Aumoment - 9 - d)Techniquedeponteforcée. lesdeuxheuresquisuiventsamutilatioa.

1-2-Préparationsdeschromosomes.

1-2-1-Produitsutilisés

a)Fixateurs estfaitedanslefixateur. rf.

Deuxmilieuxsontcourammentutilisés

fonctiondel'habiletédumanipulateur. leurchoixest -10- unedissectionpluslente.

Inconvénientfixationpluslente.

glandessalivairesenquelque60secondes. b )Col0ran·t. dansunflaconde100ml. soudrelapoudreenremuantleflacon. dre'toutelapoudre.

à45%.

-11- c)Milieuxdemontage.

Ilexistedeuxtypesdemontagedechromosomes

-montagètemporaire tion.Ceciimpliquedeuxinconvénients sontpluslisibles. -Montagepermanent.

1-2-2-Dissectiondeslarves.

tantssurunpapierfiltre. unegouttedefixateur. -Placerladanscettegoetteetcettelarve facedorsaleverslehaut. quesdelalarve. -12-

Observations

desmodificationsentrapidement desintactes.

1-2-3-Obtentiondeschromosomes

Lorsquedesglandessont23lecolo

lamelle(cf.sché.maO. toujourslacoloration. a)"Squashtechnic" bienattentionànepasfaireglisseL -13- suivantlesutilisateurs -€crasementaveclepouce, -écrasementaveclapaumedelamain, l'indexdel'autre aprèschaqueécrasement. b)"Taptechnic" oü onpeutmieuxdoserl'intensitédel'impactetchoisir' oùonl'applique. mosomesimparfaitementétalés. etque"Godhe1psus". tapertrèsintensémentsurlalamelle. -14-

Leslamesdechromosomespeuventêtreà

contredemandebeaucoupplusdetemps. notredisposition. Pourconserverceslamesdefaçonpermanenteily adiffé laisserceslames30minutesau cooléthylique:

C2H50Hà95%5minutes

C2H50Rà100%5minutes

-recouvrird'unelamelleordinaire, 1 indéfiniment. autosomes -15-

1-3-1-Rappelsuccint.

LesAnophelinipossèdent3chromosomes(

-lechromosomeIl) lechromosome lesbrasdroitetgaucheduIl, lesbrasdroitgauchQduchromosomeIll.

Cesbrassont€longueursetmita

faiblegrossissement. saformuleseraXXouXY. nousavonsunelarvefemellelechromosomeXX sinousavonslarvelechromosomeXeu 9

1-3-2-Matériel

a)Préparationspersonnelles. quantelamespourlesespècessuivantes -A.albimanus -A.atroparvus -A.quadrimaculatus -16-

Ayantnoslarvesselonlamfthodeetla

duProfesseurnousavonspucomparerlesré

élevéeseneausalée:

somessontctbandessontmieuxmarquéesque h)Collectionsmisesanotre nuneztov.:lri. -leshomologiesautosomales, trechaque -chromosomiquepr€sentéparA. darlingi•. quesdecartographiecytog€nétique. -17- tions). plane. pattern"este ssent i eIlet a rbitraire.Dansunpremiertemps,i1 dechromosomesavantdelesschématiser.

Leschèmadoitmontrer

tés, sériedephotographiespourchaquebras, 18 1 ,1(,................" grédecolorationàchaquebande, inversions"(KITZMILLER,com.pers.). chromosome. qui$'effectuedelafaçon"suivante -chromosomeXdedistaleaucentromère, -chromosome3D:dedistaleaucentromère, pratiquedeschromosomes. lamorphologieexternedeschromosomes,

1"agencementdesbandes,

-19.·' -1acolorationetformedechaquebande, cédentes. etlesdifférences.Ilnefautpasqu'ilyaun com.pers.). coreuniversellementadmise. modèleinitial. tion.

1-4-1-Rappelssuccints

les'reconnaître. -déficienceoudé18tion. 20- formealorsuneboucle("loop"). chromosomeconnu. -duplication. -inversion.

Alasuited'unerotationde180

0 uneportiondechromosomeest vidu·.esthétérozygotèpouruntyped'inversionily aformation leurrapportaveclesphénomènesde pesd'inversion -inversionpéricentrique(fig.6) -inversionparacentrique(fig•.7) obtiendra -21-

Enconséquence,uneinversionsupprimele

tantcecrossing-over. nous noustrouvonsdansunesituationoùtousleslocidesgènes -encroixaustadepachytene, -enanneauàladiakinèse, -en8àlamétaphase. que(CRAIG,corn.pers.).

1-4-2-Matériel.

-22- laF.2sontcroisésentreeux.

AlaF.3ilfaut:

location, larvesdechaque"famille"detranslocation. danssaprochainepublication.

1-4-3-Observations.

tionsdeoréférence. -AIlT(2R-3L)zonesdelOB-42A -ABT(X-2L)zonesderupture4c-25A

A9T(ZL-3R)zonesderupture19A-33C

117T(X-3R)zonesderupture1E-26B

-1·,9T(2R-3R)zonesderupture7A-2913 -M18T(Y-2R)zonederupturel4A -K18T(X-3R)zonesderuptureSB-27A

K9T(X-3L)zonesderuptu!."e2A"

-K14T(2R-3L)zonesderupturel3C-40C. -23- nombreetdesgènesdansleschromosomes. desgènes.

Onpeutaussieffectuerunindirectainsique

pourcentagesdecrossing-over. espèceconsidérée. l'autreauseind'unemêmepopulation. jumeIles)• sante 24
lité.••). -25-

4uG.B.(DepartmentofBiology,Univers

rammentutilisies. employie. 1 Aedes nosconversations. othergeneticprocedure"}.1ESCHER(1963). -26- a)Méthodede(1963) il •Cesbacspré-" b)Remarquespersonnelles

étaientenmilieulégirementsalé.

1bacd'eaunormale

- 4bacsd'eausalée:

3/4eaunormale+1/4eausaléeClNa7,5

<:7 1.

3/4eaunormale+1/4eausaléeClNa10%

3/4eaunormale+1/4eausaléeClK

7,5%

3/4eaunormale+1/4eausaléeClK10%

tureétaitdelamêmefaçon. enfonctiondumilieu +ClNa10% +ClK nymphe. +ClK10% -27-

Chromosomespolytènes

verslehaut. raxafindemieuxfairesortirlesglandes. resteducorpsque.l'onjette. pendanttroisminutes. tiondurede3à5minutes. Pournotrepartnousavonsutiliséla_ .techniquefixa- aegyptisecomposent

àchromosomes"étudiables".

dontleschromosomesnesontpas"lisibles". lesnoyaux -28- bl-personnelles. sesontmontrêesetR.I\I(com.pers.), surtoutparrapportàcellesfaiteslelot nousn'avonspuessayerd'établirla b2'-Travauxde..(1963)etRAI. parationsdechromosomes.Ily aunecertainecorrêlationentrele messontgrands. S ""qued'autres.Les

TexasD,TexasY,India,Israel.

-29- ll entrela -30- d'Aedesaegypti. c)Discussion-Perspectives.

Lesnombreusesdifficultésplushaut)

(10c.c i t.)arema r quéquel'agencementdesbande.sestiÎlterrompu parcles"we ak spots",cer t a i nespar t i e ssontreli:éesparcle5fila déterminée. pers.). -31-

11-1-3-Chromosomesmitotiques.

messomatiques. voulunousaccorderquelquesetnousfaire préparationsdetelschromosomes. a)Principalestechniques. tors"(RAI,inloJRIGHTetPAL,1967). 1 posée+Méthanol6parts +Chloroforme3parts +Acide2parts employé,ils'agit'duCarnoy(1/31/3acide a'cétiqueglacial,1/3alcoolabsolu'). c -32-

ôterlecerveaudelacapsulecéphalique

céineacéto-lactiqueà2%. b).Observations. asestravaux. -33,- somessomatiquesestde2n=6. pluspetite. l,III. ment5,4 ;6,9et7,6microBsrespectivementàlamitaphase. pers.). tre. 34-

Lediveloppementdesderisistance

s

1'illiportanceico

s

1970).

étaientdisponib1es

s

Elevagedesmutantsetmaintiendessouches

a)Souchesetobservationspersonnelles. al-'

Afinparlesd'élevasedes

quotesdbs_dbs46.pdfusesText_46