TP B13-14 Enzymologie – Correction
TP B13-14 Enzymologie – Correction I Etude de la vitesse d'une enzyme en fonction du temps 1 Loi de Beer-Lambert et la mesure de l'absorbance 2 Manipulations a) Solution de référence b) Solution étalon c) Mesures de la vitesse de la réaction en fonction du temps 3 Exploitation des résultats a) Détermination du lien absorbance
Enzymologie - Université de Tours
Enzymologie théorique Ph Collas 7 III Cinétique michaélienne A Notion de vitesse initiale S+E⇔ES⇒E+P Mesure de l’apparition du produit au cours du temps ; Conditions expérimentales : T°, pH, salinité, etc optimaux [S] >> [E] et temps court ⇒ on cherche à rester dans les conditions où [S] >> [P] Dans ces conditions, [S] et
TP B13-14 Enzymologie - Joseph Nicolas
• Déterminez pour chaque solution la concentration molaire initiale en amidon (valeurs à compléter dans le tableau II 1 a) • Déterminez vi Lpour chacune des cinq solutions NB : on notera que la relation entre l'absorbance et la vitesse utilisée en I 3 b reste valable ici • Tracez le graphe donnant 1 vi en fonction de 1 [S]
SEANCE 3 : NOTION DE VITESSE DE REACTION CLASSE INVERSEE
calculer la vitesse en période initiale appelée vitesse initiale Cette vitesse est une vitesse initiale maximale en excés de substrat La mesure peut se faire à un temps t pendant la période stationnaire après arrêt de la réaction par dénaturation de l’enzyme Pour chaque méthode Q1 Déterminer la vitesse de réaction Vi Q2
Mesure de l’activité enzymatique
Mesure de l’activité enzymatique • L’activité d’une enzyme se mesure: 1 Soit par la vitesse de disparition d’un substrat 2 Soit par la vitesse d’apparition d’un produit
A Principes de base
Vraie vitesse initiale à l’état stationnaire Vitesse mesurée Arrêt de la réaction enzymatique Temps-une des premières choses à vérifier est l’évolution linéaire de la réaction->une seule donnée peut sous-estimer la vitesse initiale dû à des temps d’incubation trop longs-
EXTRACTION ET EUDE CINÉTIQUE DE L’INVERTASE
Dans cette phase ‘période de vitesse initiale’, la réaction se comporte comme une réaction d’ordre zéro, la variation de la concentration de S étant négligeable par rapport à la concentration initiale [S] o inférieure à 10 - Une partie non linéaire qui suit l’équation de la vitesse des réactions d’ordre 1,
Etude expérimentale de la phosphatase alcaline
réaction Ainsi, il y a de moins en moins de produit formé donc l’absorbance n’augmente plus de façon linéaire Pour F et G, on remarque que pour un temps > 1min, la courbe reste linéaire Effectivement, la quantité de substrat est encore suffisante pour que la réaction s’effectue à une vitesse initiale, maximale
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