[PDF] Mesure de l’activité enzymatique

TP B13-14 Enzymologie – Correction

TP B13-14 Enzymologie – Correction I Etude de la vitesse d'une enzyme en fonction du temps 1 Loi de Beer-Lambert et la mesure de l'absorbance 2 Manipulations a) Solution de référence b) Solution étalon c) Mesures de la vitesse de la réaction en fonction du temps 3 Exploitation des résultats a) Détermination du lien absorbance

Enzymologie - Université de Tours

Enzymologie théorique Ph Collas 7 III Cinétique michaélienne A Notion de vitesse initiale S+E⇔ES⇒E+P Mesure de l’apparition du produit au cours du temps ; Conditions expérimentales : T°, pH, salinité, etc optimaux [S] >> [E] et temps court ⇒ on cherche à rester dans les conditions où [S] >> [P] Dans ces conditions, [S] et

TP B13-14 Enzymologie - Joseph Nicolas

• Déterminez pour chaque solution la concentration molaire initiale en amidon (valeurs à compléter dans le tableau II 1 a) • Déterminez vi Lpour chacune des cinq solutions NB : on notera que la relation entre l'absorbance et la vitesse utilisée en I 3 b reste valable ici • Tracez le graphe donnant 1 vi en fonction de 1 [S]

SEANCE 3 : NOTION DE VITESSE DE REACTION CLASSE INVERSEE

calculer la vitesse en période initiale appelée vitesse initiale Cette vitesse est une vitesse initiale maximale en excés de substrat La mesure peut se faire à un temps t pendant la période stationnaire après arrêt de la réaction par dénaturation de l’enzyme Pour chaque méthode Q1 Déterminer la vitesse de réaction Vi Q2

Mesure de l’activité enzymatique

Mesure de l’activité enzymatique • L’activité d’une enzyme se mesure: 1 Soit par la vitesse de disparition d’un substrat 2 Soit par la vitesse d’apparition d’un produit

A Principes de base

Vraie vitesse initiale à l’état stationnaire Vitesse mesurée Arrêt de la réaction enzymatique Temps-une des premières choses à vérifier est l’évolution linéaire de la réaction->une seule donnée peut sous-estimer la vitesse initiale dû à des temps d’incubation trop longs-

EXTRACTION ET EUDE CINÉTIQUE DE L’INVERTASE

Dans cette phase ‘période de vitesse initiale’, la réaction se comporte comme une réaction d’ordre zéro, la variation de la concentration de S étant négligeable par rapport à la concentration initiale [S] o inférieure à 10 - Une partie non linéaire qui suit l’équation de la vitesse des réactions d’ordre 1,

Etude expérimentale de la phosphatase alcaline

réaction Ainsi, il y a de moins en moins de produit formé donc l’absorbance n’augmente plus de façon linéaire Pour F et G, on remarque que pour un temps > 1min, la courbe reste linéaire Effectivement, la quantité de substrat est encore suffisante pour que la réaction s’effectue à une vitesse initiale, maximale

[PDF] tp enzymologie corrigé

[PDF] determiner graphiquement km et vmax

[PDF] comment calculer la vitesse initiale

[PDF] tp determination de la vitesse initiale d'une reaction enzymatique

[PDF] latis pro eurosmart

[PDF] latis pro analyse fourier

[PDF] calcul debit verin pneumatique

[PDF] calcul force d'un verin pneumatique

[PDF] tableau effort verin pneumatique

[PDF] calcul vitesse verin hydraulique

[PDF] tableau pourcentage vma temps distance

[PDF] vo2 max

[PDF] physiologie de l'effort pdf

[PDF] interpretation epreuve d'effort respiratoire

[PDF] epreuve d'effort vo2 max

enzymatique

DR AKSAS

1

ƒIl

2

Mesure de l͛actiǀitĠ enzymatiƋue

Cette mesure consiste à évaluer la

3

Mesure de l͛actiǀitĠ enzymatiƋue

L͛actiǀitĠ d͛une enzyme se mesure

1.d͛un

d͛apparition d͛un

3.d͛utilisation d͛un

4

Méthodes de mesure

2 Méthode en point final ou " à deux points »

Méthodes cinétiques:

1. 5

Mesure de l͛actiǀitĠ enzymatiƋue

Si expérimentales[S]0 et[S]0 la d'enzyme C'est doser d'enzyme 6

Conditions opératoires

Conditions Ƌui permettent d͛aǀoir une vitesse constante et maximale a)0et déterminer contient. b) optimale c) [S]( activateurs 7

Le substrat

Le Pour Pour Il doitMais Un de on exige que S > 10 Km. 8

Température

En , C

SFBC(société

C 9

La durée de la mesure

AE = Vi en [ ] saturante de substrat

10 10

Le Témoin

Dans les méthodes " 2 points »

On Ce que .

Dans les méthodes cinétiques

On 11

Les unités enzymatiques

katalquantité seconde trop-

Launité

internationalequi catalyse minute 60
12

Les unités enzymatiques

Nombre

AEM

Nombre

AS

Elle enzymatique

13

Les unités enzymatiques

ƒLe=

/ Activité enzymatique totale de départ (x

ƒ Le=

spécifique de départ 14 1 manuelle 1. durée, 2.son 3.

Į .15

Méthode en point final ou à " 2 points »

Ladoit

Le lorsque nécessaire

¾soit

¾soit

zone0en

¾soit.

16

Méthode en point final ou à " 2 points »

Faire Ce (Exemple transformer 17

Méthode en point final ou à " 2 points »

Exemple:

LetĮ-;

-30. -Dinitro 18 ALAT

Méthode en point final ou à " 2 points »

C solution 19 2

Consiste de

La spécifiqueUV visible

tempsplus 20

Cinétique enzymatique en Ultra

LeNAD/NADH NADP/NADPH

employé La

UV NAD+/NADHqui

sont Ces Cette 21

Méthodes cinétiques

Dans continu, fixée La réactif) stabilise Elle

Ppermet

22

Cinétique enzymatique en Ultra

NAD considérés(réaction

AH2 + NAD+ A + NADH,H

AH2 + NADP+ A + NADPH,H

[NAD+ ] > 10 NAD 23

Cinétique enzymatique en

NADH NAD+, Si réduction NAD+,la; oxydation deDO. Le

NADPHİ -cm- 24

Cinétique enzymatique en

NADH-cm-

NAD+ 25

AEMesure

l MXJPHQPMPLRQ de 340nm

AE diminution

de A340nm LDH NADн et NADH2 prĠsentent un pic d͛absorbtion ( surtout NAD+) a 260 nm alors on mesure électivement Le NADH2 aquotesdbs_dbs2.pdfusesText_3