Clonage dans un plasmide (pUC) Réplication indépendante de
Clonage dans un plasmide (pUC) • Site multiple de clonage au niveau d'une portion du gène de la β-galacto-sidase E coli (LacZ') • Sélection des bactéries transformées (plasmide avec ou sans insert): ampR • Sélection des bactéries transformées (plasmide avec insert): crible blanc/bleu en présence d'IPTG et de X-gal
TD : clonage/ADN recombinant
– Clonage du génome entier: banque de gènes – Détection du gène par hybridation moléculaire ou PCR – Proba de trouver une séquence donnée dans une collection de N transformants: P = 1 – (1-f)N f: fraction du génome effectivement clonée dépend de la taille du fragment et de la complexité du génome Les stratégies de clonage: 4
COURS 5: CLONAGE ET VECTEURS DE CLONAGE
Après l’addition de la queue, la particule peut injecter son ADN recombinant dans une bactérie L’ADN injecté se circularise, via les sites cos, et se réplique comme un plasmide On peut détecter sa présence dans la cellule, par l’expression de gènes de résistance à des antibiotiques, codés par le plasmide
Clonage du gène Venus - UNIGE
Clonage du g ene (( Venus )) GFP et de l’introduire dans un plasmide qui va ^etre exprim e dans la bact erie E Coli Le { Gel du plasmid (pGEX) Nous avons
L’isolement et la manipulation de gènes
répliquer dans la cellule comme celui d’un plasmide et être empaqueté comme celui d’un phage Servent à cloner des fragments d’au plus 45 kb 4- Les vecteurs à large capacité: Permettent le clonage de larges fragments (maximum de 300 kb pour les BAC et de 400 kb pour les YAC)
Mise au point sur le clonage des gènes, la préparation et l
Actuellement le clonage des gènes est réalisé dans de très nombreux laboratoires qui en augmentent continuel- lement le champ d’utilisation Nous nous proposons d’en expliquer la méthodologie et de donner un aperçu sur les applications réalisées ou envisagées dans un proche avenir
B/ La diversité des techniques de lADN recombinant
multiplient beaucoup dans la cellule hôte bactérienne • En génie génétique, utilisation de plasmides avec : • origine de réplication • marqueur de sélection (souvent résistance contre des antibiotiques) • site de clonage (succession de sites de restriction connus et uniques dans la séquence, pouvant être utilisés pour
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