TECHNIQUES: Principes de la chromatographie
Chromatographie d’adsorption: principe La chromatographie d’adsorption est basée sur le partage des solutés entre l’adsorbant solide fixe et la phase mobile Chacun des solutés est soumis à une force de rétention par adsorption et une force d’entraînement par la phase mobile L’équilibre qui en résulte aboutit à
Les méthodes séparatives: la chromatographie
–Puis émission d’énergie ( détectée puis amplifiée) L’émission a lieu à une plus grande que celle de l’absorption 3- La chromatographie d’adsorption Phase stationnaire solide : silice ou alumine Phase mobile –Caractérisée par la force éluante ε0 : énergie d’adsorption du solvant par unité de surface
Principe généraux de la chromatographie
• la chromatographie d’adsorption : la phase stationnaire est un solide finement divisé sur lequel les molécules adhèrent par un double effet de physisorption et de chimisorption Le paramètre physico‐chimique concerné est le coefficient d’adsorption
1 Principe de la chromatographie
la phase mobile (l’ eluant) La chromatographie sur une plaque plasti ee recouverte d’un gel de silice est une chromatographie d’adsorption L’adsorption est un ph enom ene de surface par lequel des mol ecules de liquides se xent sur les surfaces solides des adsorbants selon divers processus plus ou moins intenses
Chromatographie en couche mince ou CCM En pratique
sites d’adsorption sur le support solide (silice) : les molécules de solutés peuvent migrer par déplacement (phénomène principal avec un éluant comme un alcool, l’eau ) Influence de la nature des composés sur la vitesse de migration Une molécule est polaire si elle possède une répartition dissymétrique de ses électrons
Dossier La Chromatographie Liquide HPLC
L a chromatographie dÕexclusion st rique (SEC), encore connue sous le nom de chromatographie perm ation de gel (GPC), est de loin la technique de s paration la plus utilis e pour analyser les polym res D crite en 1959 par Porath et Flodin pour des biomacromol cules, puis en 1963 par Moore pour des polym res synth tiques, la SEC a
La Chromatographie sur Couche Mince (CCM)
La Chromatographie sur Couche Mince (CCM) Qu’est-ce que la chromatographie ? La chromatographie sur couche mince, comme toutes les chromatographies, est une technique de séparation et d'identification des constituants d'un mélange Initialement utilisée pour séparer des espèces colorées, la chromatographie tire son nom du grec Khrôma
LA CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION STÉRIQUE POUR L’ANALYSE DE
LE GUIDE POUR UNE CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION STÉRIQUE RÉUSSIE La séparation chromatographique de biomolécules basée sur leur taille en solution est connue sous le nom de chromatographie d’exclusion stérique (SEC) Contrairement à d’autres modes de chromatographie, elle repose sur l’absence de toute interaction
Chromatographie sur colonne
Si vous utilisez un gradient d’éluant, laissez écouler le premier solvant avant de rajouter le deuxième 10 Analyses de la purification par chromatographie éclair Déposer une micro-goutte de chaque éprouvette sur une CCM Préparer une CCM avec les éprouvettes qui contiennent un chromophore D 6 8 11 12 17 19 24 28 29 52 54 56 58 60 62
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1 1 Chromatographie sur colonne
Cette chromatographie est basée sur le même principe que la CCM, sauf que la silice est placée dans une colonne et non sur une plaque.Le but est toutefois différent:
La chromatographie sur colonne sert à séparer des produits, soit à purifier un produit de réaction.C'est la méthode standard de purification dans un laboratoire de chimie organique. C'est une méthode préparative, elle permet de purifier 50 mg à environ en laboratoire, et jusqu'à 1 kg en industrie. 2Chromatographie sur colonne
Deux types de chromatographie existent:
•Chromatographie par gravité: elle utilise des particules de silice de70 à 200 m et le solvant s'écoule au goutte-à-goutte. Cette technique
est désuette car elle demande une plus grande quantité de silice et de solvant. •Chromatographie éclair ("flash"): elle utilise des particules de silice de 35 à 70 m et le solvant s'écoule sous pression d'air comprimé. Première référence à la chromatographie éclair: Still, C.W.; Kahn, M.; Mitra, A. J. Org. Chem., 1978, 43, 2923-2925: Rapid chromatographic technique for preparative separations with moderate resolution. 2 3Préparation de la chromatographie éclair
Plusieurs choix sont à faire en fonction de la quantité de produit et de l'aspect de la CCM: •Diamètre de la colonne •Hauteur de silice •Choix de l'éluant 4Choix de l'éluant
Il faut faire des essais sur CCM avec différents éluants pour avoir une bonne séparation entre les produits, tout en recherchant un R f ~ 0.3 pour le produit le moins polaire. La polarité de l'éluant peut rester la même tout au long de la chromatographie (élution isocratique) ou aller en augmentant (gradient de solvant).Mauvaise séparation
même si ça paraît facile car l'éluant est trop polaireOk, mais il faudra
augmenter la polarité de l'éluant pour faire sortir le produit le plus polaire. 3 5Que se passe-t-il?
Le composé rouge est moins polaire
donc moins retenu.Ⱥ Sort en premier !
Le composé vert est plus polaire
donc plus retenu.Ⱥ Sort en deuxième !
On n'a qu'à changer régulièrement
le " récipient » (éprouvettes deformat variable)Soit deux produits de polarité différentes (rouge et vert) qui migrent à travers
une colonne de silice: 6