Dosage sérotonine, catécholamines et dérivés, 5HIAA
Dosage sérotonine, catécholamines et dérivés, 5HIAA Votre médecin vous a prescrit le dosage d’un ou plusieurs des paramètres suivants, dans le sang et/ou les urines : Sérotonine Catécholamines Dérivés méthoxylés des catécholamines 5 HIAA (acide 5-hydroxyindolacétique) Cet examen nécessite un régime alimentaire particulier :
Fiche de prelevements specifiques: Dosage de la serotonine
Fiche de prelevements specifiques: Dosage de la serotonine 05PREP01D002B, Version 1 1/1 Vous demandez un dosage de sérotonine plasmatique et/ou sérique ATTENTION 1 La sérotonine ou le tryptophane (précurseur) sont présents en quantité non négligeable dans
Sérotonine - Lab Cerba
Sérotonine Lasérotonineestundérivémétaboliquedutrypto-phane Cedernier,sousl’actiond’unetryptophane-hydroxylase,puisd’unedécarboxylase,conduitàla
Dosage sérotonine et 5HIAA - dynabiofr
Dosage sérotonine et 5HIAA Votre médecin vous a prescrit le dosage d’un ou plusieurs des paramètres suivants, dans le sang et/ou les urines : Sérotonine 5 HIAA (acide 5-hydroxyindolacétique) Cet examen nécessite un régime alimentaire particulier : pendant
biomnis
biomnis Author: SPMAREUIL Created Date: 10/19/2015 2:13:14 PM
Serotonin ELISA
Test immuno-enzymatique pour le dosage quantitatif de Sérotonine dans le sérum humain, plasma, plaquettes et urine Ce test peut également être utilisé à des buts de recherche sur des homogénats de tissus et surnageants de culture cellulaires RE59121 96 2-8°C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H
MDMA et Sérotonine Pascal Millet Avril 2016
reflétées dans le sang et inversement Il faut donc utiliser des moyens détournés pour évaluer la sérotonine cérébrale (dosage de certains métabolites, ponction du liquide céphalo-rachidien etc ) Enfin il faut signaler que la sérotonine est le précurseur direct de la mélatonine, au niveau de la glande pinéale
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Fiche technique
Serotonin ELISA
Test immuno-enzymatique pour le dosage quantitatif de Sérotonine dans le sérum humain, plasma, plaquettes et urine. Ce test peut également être utilisé à des buts de recherche sur des homogénats de tissus et surnageants de culture cellulaires.RE59121
962-8°C
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Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0)40-53 28 91-0 IBL@IBL-International.com D-22335 Hamburg, Germany Fax: +49 (0)40-53 28 91-11 www.IBL-International.comSerotonin ELISA (RE59121) FRANÇAIS
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1. BUT DU TEST
Test immuno-enzymatique pour le dosage quantitatif de Sérotonine dans le sérum humain, plasma,
plaquettes et urine. Ce test peut également être utilisé à des buts de recherche sur des homogénats de
tissus et surnageants de culture cellulaires.2. SOMMAIRE ET INTRODUCTION
La sérotonine est un dérivé métabolique du tryptophane principalement sécrété par les cellules entéro-
central, où elle est considérée comme neurotransmetteur.La majeure partie de la sérotonine sanguine est stockée dans les plaquettes. Toute modification de la
inespériodiques, schizophrénie, hypertension, maladie de Huntington, dystrophie musculaire de Duchenne et
Le principal intérêt du dosage sanguin de la sérotonine réside dans ledépistage et le suivi des tumeurs carcinoïdes. Un intérêt grandissant est attendu dans un avenir proche
pour la détermination de la concentration en sérotonine impli relargage de la sérotonine dans les plaquettes.3. PRINCIPE DU TEST
La préparation des échantillons (dérivatisation de la sérotonine en N-acylsérotonine) consiste en la dilution
antigènes biotinylés et non-alcaline comme marqueur et du phosphate p-nitrophényl comme substrat. La quantification des échantillons
inconnus est obtenue en comparant leur activité enzymatique avec une courbe de réponse préparée en
utilisant les étalons connus. 4.1. Seulement prévu au diagnostic in-vitro
2. Lire les instructions complètement et avec attention avant de commencer le test. Utiliser la version
3. L ou votre fournisseur
sous forme écrite, une semaine au plus tard après avoir reçabîmés pour un test, mettez-les de côté et en sécurité pour les besoins éventuels liés à la plainte.
4. Suivez le numéro du lot et la date de péremption. Ne pas mélanger les réactifs de différents lots. Ne pas
utiliser de réactifs périmés.5. Suivre les bonnes pratiques de laboratoire et les directives de sécurité. Porter des blouses de
laboratoire, gants en latex à usage unique et lunettes de protection si nécessaire.6. Les réactifs de ce kit contiennent du matériel dangereux pouvant irriter les yeux et la peau. Consulter le
MATERIEL FOURNI et les étiquettes pour les détails. Les Fiches de Données de Sécurité pour ce
produit sont disponibles sur le site internet IBL ou sur demande particulière à IBL.7. Les réactifs chimiques préparés ou utilisés doivent être traités comme matériel dangereux en accord
avec les directives et règlements nationaux de sécurité pour tout matériel à risque.8. Le personnel de nettoyage doit être formé par des professionnels en ce qui concerne les risques
potentiels et la manipulation des produits. 9.5. STOCKAGE ET STABILITE
Le kit est envoyé à température ambiante et doit être stocké entre 2 °C et 8chaleur ou de la lumière directe. Le stockage et la stabilité des échantillons et réactifs préparés sont
indiqués dans les chapitres correspondants. Le2 °C et 8 °C dans le sachet déjà ouvert, mais hermétiquement refermé.
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6. COLLECTE ET STOCKAGE DES ECHANTILLONS
Certains aliments contiennent des quantités importantes en sérotonine. De plus, quelques
médications peuvent provoquer la libération de la sérotonine et mener à de fausses concentrations.
Les pat
bananes, café, prunes, ananas, tomates, noix) ainsi que quelques médicaments (par ex. aspirine,
corticotropine, inhibiteurs MAO, phénazétine, catécholamines, réserpine, nicotine).Sérum
Observer les précautions habituelles de prises de sang. Il est hémolysés, ictériques ou l analyse pour éliminer toute particule gênante. Stockage: 18-25°C 2-8°C -20°C (Aliquots) Eviter tout cycles de congélation / décongélation répétés. Envoyer les échantillons sous forme congelée. Stabilité 2 h 6 h 3 mois Urineexcrétées pendant une période de 24 h doit être collecté et mélangé dans une seule bouteille contenant
10-15 mL de 6 N HCl comme conservateur. Déterminer le volume total pour le calcul des résultats.
Mélanger et centrifuger les échantillons avant le test.Stockage: -20°C (Aliquots) À conse
Eviter tout cycles de congélation / décongélation répétés. Stabilité 6 moisPlasma, Plaquettes
Plus de 98% de la sérotonine circulante est stockée dans les plaquettes et est relarguée lors de la
coaCitrate comme anticoagulant (par ex. 10 mL Monovette NC avec 1 mL Solution Citrate de SARSTEDT).Les échantillons sont conservés et centrifugés à température ambiante pendant 10 min à 200 x g pour
obtenir du plasma riche en plaquettes (PRP). Le surnageant PRP est ensuite transferré dans un autre
tube et les plaquettes sont comptées.Pour obtenir des résidus plaquettaires, un aliquot de 200 µL de PRP (contenant entre 350000 et 500000
plaquettes/µL) est ajouté à 800 µL de solution saline physiologique et centrifugé à 4500 x g pendant 10 min
à 4°C (ou à 10000 x g pendant 2 min à 4°C). Le surnageant est ensuite écarté. ésidu. Celui-ci peut maintenant être stocké congelé à <-20°C pendant plusieurs semaines sans que le contenu en sérotonine ne change.Après décongélation des échantillons, les centrifuger à 10 000 x g pendant 2 min à température ambiante.
20 µL de surnageant sont nécessaires dans le test ELISA (voir Acylation).
Si vous désirez doser la sérotonine dans le plasma sans plaquettes (plasma free-platelet PFP),
centrifuger un aliquot de PRP à 4500 x g pendant 10 min à 4°C (ou à 10000 x g pendant 2 min à 4°C) pour
obtenir du plasma sans plaquettes (PFP). 50 µL de surnageant sont appliqués dans le test ELISA pour le
dosage de la sérotonine libre (non liée aux plaquettes) (voir Acylation).NOTE: La détermination directe de la sérotonine dans le PRP a montré que des concentrations élevées
imprévisibles en sérotonine étaient mesurées dans environ 10% des échantillons (résultats obtenus par
sérotonine plaquettaire et la sérotonine libre du plasma.Plasma sans
plaquettesPlaquettes
(après séparation du plasma) Eviter tout cycles de congélation / décongélation répétés. Envoyer les échantillons sous forme congelée. Stockage: -20°C (Aliquots) -20°C (Aliquots) -80°C (Aliquots)Stabilité: 2 semaines 4 semaines 12 mois
Homogénats tissulaires, Surnageants de Culture CellulaireLes homogénéisats tissulaires et surnageants de culture cellulaires peuvent être utilisés sans précaution
particulière. Attention: Le milieu de culture cellulaire peut contenir de la sérotonine!Stockage: -20°C (Aliquots)
Eviter tout cycles de congélation / décongélation répétés. Stabilité: 6 moisSerotonin ELISA (RE59121) FRANÇAIS
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7. MATERIEL FOURNI
Les réactifs fournis dans ce kit sont en quantité suffisante pour un dosage en simple dans la
préparation des échantillons (acylation) et en double dans le test. Des réactifs supplémentaires sont
disponibles sur demande.Quantité Symbole Composant
1 x 12 x 8 MTP Microplaque
Barrettes sécables. Coatée avec un antisérum anti-lapin (chèvre).1 x 8 mL ANTISERUM Sérotonine Antisérum
< 0.1 % NaN3.1 x 8 mL BIOTIN Sérotonine Biotine
3.1 x 0.3 mL ENZCONJ CONC Conjugué Enzymatique, Concentré (100x)
Contient: streptavidine phosphatase alcaline, Tampon Tris, HCl, < 0.1 % NaN3.1 x 7 x 1 mL CAL A-G Étalon A-G
0; 0.08; 0.24; 0.73; 2.2; 6.6; 19.8 ng/mL
0; 0.45; 1.4; 4.1; 12.5; 37.4; 112.3 nmol/L
Contient: Sérotonine (acylée), tampon phosphate, < 0.1 % NaN3.1 x 2 x 0.5 mL CONTROL 1+2 LYO Contrôle 1+2, lyophilisé/e
Contient: Sérum humain, < 0.1 % NaN3.
Consulter les concentrations / gammes acceptables sur le certificat CQ.1 x 3 mL ACYLREAG ylation
Anhydride Acide Acétique, acétone.
1 x 50 mL ASSAYBUF CONC Tampon pour Essai Concentré (10x)
Contient: tampon phosphate, BSA, < 1 % NaN3.
2 x 50 mL WASHBUF CONC Tampon de Lavage Concentré (20x)
Contient: tampon phosphate, Tween, < 0.1 % Thimerosal.2 x 13 mL PNPP SUBS Solution Substrat PNPP
phosphate p-nitrophényl (PNPP).1 x 15 mL PNPP STOP
3 x FOIL Feuille Adhésive
8. MATERIEL NECESSITE MAIS NON FOURNI
1. Pipettes (Multipette Eppendorf ou matériel similaire, CV < 3 %) Volumes: 20; 25; 50; 100; 1000 µL
2. Tubes à essai en verre à usage unique (12 x 75 mm)
3. Portoir pour tubes à essai
4. Agitateur orbital (500 rpm)
5. Vortex
6. Bain marie, 37 °C
7. Micropipette à 8-canaux avec réservoirs pour réactifs
8. Bouteille pour lavage, système automatique ou semi-automatique pour le lavage de microplaque
9. Centrifugeuse; 1500 x g
10. 600-650 nm)
11. Eau bidistillée ou désionisée
12. Papier absorbant, embouts de pipette et chronomètre
9. NOTES POUR LA PROCEDURE
1. Toute manipulation impropre des échantillons ou modification de la procédure du test peut influencer les
résultats. Les volumes indiqués - calibrés.2. Une fois que le test a commencé, toutes les étapes doivent être suivi
les réactifs, matériels et appareils nécessaires soient prêts au moment approprié. Amener tous les
réactifs et échantillons à température ambiante (18-25 °C) et mélanger doucement en tournant chaque
flacon de réactif liqSerotonin ELISA (RE59121) FRANÇAIS
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3. Eviter toute contamination des réactifs, pipettes et puits/tubes. Utiliser des nouveaux embouts de pipette
en plastique pour chaque réactif, étalon ou échantillon. Ne pas interchanger les bouchons. Toujours
refermer les flacons non utilisés. Ne pas réutiliser les puits/tubes ou réactifs.4. Quelques composants contiennent 250 µL solution. Assurez-vous que la solution soit complètement
dans le fond du flacon avant son ouverture. 5. pipetage.6. Utiliser un schéma de pipetage pour vérifier la répartition appropriée de la plaque.
7. its doivent être manipulés dans le même ordre et
-cannaux pour pipeter une même solution dans tous les puits.8. Le lavage de la microplaque est important. Des puits mal lavés provoqueront des résultats erronés. Il est
ulticanaux ou un système de lavage de microplaque automatique.Ne pas laisser sécher les puits entre les incubations. Ne pas gratter les puits coatés pendant le rinçage
on. Rincer et ajouter les réactifs avec précaution. Lors du rinçage, vérifier que tous les puits
9. achet avant que celui-
température ambiante. Les puits/tubes inutilisés doivent être rangés immédiatement dans le sachet
refermé avec le dessiccateur.10. rpm) mais doit être
calculée en fonction du radius de la centrifugeuse.10. PREPARATIONS PREALABLES AU TEST
Pour la version manuelle et automatique
Le contenu du kit pour 96 dosages peut être divisé en 3 analyses différentes. Les volumes indiqués ci-dessous sont pour un test avec 4 barrettes (32 dosages).gamme de référence est alors réduite à 155 ȝg/L (plasma) ou 706 ȝg/L (sérum, urine,
homogénats de tissu, surnageants de culture cellulaire).Le test peut être réalisé en version rapide avec une incubation de 3.5 h pour les sérums,
urines, plaquettes, homogénats tissulaires et surnageants de culture cellulaire MAIS PAS POUR LE PLASMA. Une alternative est possible avec une incubation pendant la nuit pour les mêmes échantillons ET LE PLASMA. Le plasma doit TOUJOURS être incubé pendant une nuit.10.1. Préparation des composants lyophilisés ou concentrés
Diluer /
dissoudre Composant Diluant Relation Remarques Stockage Stabilité15 mL ASSAYBUF
CONC150 mL eau bidist. 1:10
Une couleur jaunâtre-
marron peut apparaître, résultats des tests.2-8°C 2 semaines
15 mL WASHBUF
CONC ju300 mL eau bidist. 1:20 2-8°C 4 semaines
CONTROL 1+2
LYO avec0.50 mL eau bidist.
Laisser reposer 15 min.
Mélanger sans former de
mousse. -20°C (Aliquots) exp.60 µL ENZCONJ
CONC avec6.0 mL
Tampon pour
Essai dilué 1:101 Préparer fraîchement et18-25°C 2 h
10.2. Dilution des Echantillons
doivent être dilués avec du tampon pour essai.10.3. Acylation des Echantillons et Contrôles (pas des Etalons)
La procédure suivante peut être effectuée de deux façons différentes: Echantillon A: Sérum, Urine, extrait de plaquettes, homogénat tissulaire et contrôlesEchantillon B: plasma sans plaquettes
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Ne pas acyler les étalons. Ils ont déjà été acylés!La préparation des échantillons conduit à diluer 107fois les échantillons de sérum, urine, plaquettes,
homogénéisats tissulaires ou surnageants de culture cellulaire et 23.5 fois les échantillons
plasmatiques. Ces dilutions doivent être prises en compte pour le calcul des résultats.10.3.1. Echantillon A: Sérum, urine, extrait de plaquettes, homogénat tissulaire et contrôles
1. Pipeter 20 µL de chaque Contrôle et échantillon A dans des tubes à essai en verre.
2. Pipeter 100 µL de Tampon pour Essai dilué dans chaque tube. Vortexer.
3. Pipeter 25 µL de cylation dans chaque tube.
Vortexer chaque tube immédiatement après avoir pipeté.4. Couvrir les tubes. Incuber dans un bain-marie 15 min à 37 °C.
5. Pipeter 2 mL de Tampon pour Essai dilué dans chaque tube. Vortexer.
6. Centrifuger tous les tubes pendant 10 min à 1500 x g.
Les échantillons préparés doivent être testés immédiatement. Le surnageant est stable 1 h seulement à 18-25 °C.10.3.2. Echantillon B: Plasma sans plaquettes
1. Pipeter 50 µL de chaque échantillon B dans tubes à essai en verre.
2. Pipeter 100 µL de Tampon pour Essai dilué dans chaque tube. Vortexer.
3. Pipeter 25 µL de cylation dans chaque tube.
Vortexer chaque tube immédiatement après avoir pipeté.4. Couvrir les tubes. Incuber dans un bain-marie 15 min à 37 °C.
5. Pipeter 1 mL de Tampon pour Essai dilué dans chaque tube. Vortexer.
6. Centrifuger tous les tubes pendant 10 min à 1500 x g.
Les échantillons préparés doivent être testés immédiatement. Le surnageant est stable 1 h seulement à 18-25 °C.11. PROCEDURE DU TEST
11.1. Version rapide (Note: seulement pour les échantillons A, mais pas pour le plasma)
1. Pipeter 50 ȝL de chaque Etalon, contrôle acylé et échantillon acylé dans les puits respectifs de la
Microplaque.
2. Pipeter ȝde Biotine Sérotonine dans chaque puits.
3. Pipeter 50 ȝL Antisérum Sérotonine dans chaque puits.
4. Couvrir la plaque avec une feuille adhésive.
Incuber 90 min à TA (18-25 °C) sur un agitateur rotatif (500 rpm).5. Retirer la feuille adhésive. Laver la plaque 3 x avec 250 ȝL de
Tampon de Lavage dilué.
absorbant.6. Pipeter 150 ȝL de Conjugué Enzymatique fraîchement préparé dans chaque puits.
7. Couvrir la plaque avec une feuille adhésive.
Incuber 60 min à TA (18-25 °C) sur un agitateur rotatif (500 rpm).8. Retirer la feuille adhésive. Platte Laver la plaque 3 x avec 250 ȝL de
Tampon de Lavage dilué.
absorbant. 9. ces solutions à la même cadence. U10. Pipeter 200 ȝL de Solution Substrat PNPP dans chaque puits.
11. Incuber 60 min à TA (18-25 °C) sur un agitateur rotatif (500 rpm).
12. Arrêter la réaction substrat en ajoutant 50 ȝL de Sodans chaque puits.
Mélanger rapidement le contenu en agitant la plaque.13. Mesurer la densité optique avec un photomètre à 405 nm
600-650 nm) dans les 60 min
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11.2. Version Alternative avec incubation nocturne (Echantillons A ET B)
11.2.1. Premier jour
1. Pipeter 50 µL de chaque Etalon, Contrôle acylé et échantillon acylé dans les puits respectifs de la
Microplaque.
2. Pipeter 50 µL de Biotine Sérotonine dans chaque puits.
3. Pipeter 50 µL Antisérum Sérotonine dans chaque puits. Mélanger la plaque avec attention.
4. Couvrir la plaque avec une feuille adhésive. Agiter la plaque avec précaution.
Incuber 16-20 h (pendant la nuit) à 2-8 °C.
11.2.2. Deuxième jour
1. Retirer la feuille adhésive. Jet Laver la plaque 3 x avec 250 µL de Tampon
de Lavage dilué. absorbant.2. Pipeter 150 µL de Conjugué Enzymatique fraîchement préparé dans chaque puits.
3. Couvrir la plaque avec une feuille adhésive.
Incuber 60 min à TA (18-25 °C) sur un agitateur orbital (500 rpm).4. Retirer la feuille adhésive. Laver la plaque 3 x avec
250 µL de Tampon de Lavage dilué. solution en frappant la plaque retournée
sur du papier absorbant. 5. ces solutions à la même cadence. Utiliser un déplacement positif et éviter la forma6. Pipeter 200 µL de Solution Substrat PNPP dans chaque puits.
7. Incuber 30 min à TA (18-25 °C) sur un agitateur orbital (500 rpm).
8. Arrêter la réaction substrat en ajoutant 50 µL de rrêt PNPP dans chaque puits.
Mélanger rapidement le contenu en agitant la plaque.9. Mesurer la densité optique avec un photomètre à 405 nm
600-650 nm) dans les 60 min rrêt.
12. CONTROLE QUALITE
Les résultats du test ne sont valides que si le test a été réalisé en suivant les instructions. De plus,
comparables. é pour établir undiagnostic conformément aux principes de BPL. Tous les étalons et contrôles du kit doivent être trouvés
dans les gammes acceptables indiquées sur les étiquettes et dans le certificat de Contrôle Qualité (CQ). Si
ces critères ne sont pas remplis, le test est non valide et il doit être répété. Chaque laboratoire devrait
utiliser des échantillons connus comme contrôle supplémentaire. Il est recommandé de participer aux
programmes de contrôle qualité appropriés.En cas de déviation des résultats, vérifier les origines éventuelles techniques: dates de péremption des
lavage.13. CALCUL DES RESULTATS
Les densités optiques (DO) des étalons (axe y, linéaire) sont reportées en fonction de leurs concentrations
(axe x, logarithmique) soit sur papier graphique semi-logarithmique soit en utilisant une méthode
automatisée. Une bonne analyse est obtenue avec les méthodes cubic spline, Logistics 4 Paramètres ou
Logit-Log.
Pour le calcul de la courbe étalon, appliquer chaque signal des étalons (une valeur apparemment fausse
La concentration des échantillons peut être lue à partir de la courbe étalon.Du fait de la dilution des échantillons, les valeurs doivent être multipliées par le facteur correspondant pour
obtenir les concentrations en sérotonine en ng/mL:Serotonin ELISA (RE59121) FRANÇAIS
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Sérum, urine, plaquettes, homogénat tissulaire, surnageant de culture cellulaire, contrôles: x 107
Plasma sans plaquettes: x 23.5
dilution appliqué. Le test peut être déclaré valide si les critères suivants sont respectés:50% DO/DOmax (ED 50): 0.60 - 1.00 ng/mL (moyenne 0.8 ng/mL).
DO Etalon A - Etalon G: 0.80 OD.
Conversion:
Sérotonine (ng/mL) x 5.67 = nmol/L
le plus concentré doivent êtredilués de la façon décrite dans les PREPARATIONS PREALABLES AU TEST et testés de nouveau.
13.1. Calcul pour les plaquettes
Le contenu en sérotonine dans les plaquettes se reporte à 109 plaquettes. Voici un exemple:Concentration en sérotonine: 100 ng/mL.
Nombre de plaquettes dans le PRP: 300 000/µL ce qui équivaut à 60 000 000/ 200µL PRP et pour 200 µL de
6 plaquettes.
Le contenu en sérotonine es
être multipliées par 50.
6 x 106 x 50 = 0.3 x 109 plaquettes/mL avec un contenu en sérotonine de 100 ng.
Le contenu en sérotonine dans les plaquettes est donc de 333 ng/109 plaquettes (100 ng sérotonine x 1.0 x
109 / 0.3 x 109 ).
Courbe Etalon Typique
(Exemple. Ne pas utiliser pour vos calculs!)Étalon Sérotonine
(ng/mL)DOMoyenne DO/DOmax
A 0.0 2.118 100.0
B 0.08 1.883 88.9
C 0.24 1.568 74.0
D 0.73 1.089 51.5
E 2.2 0.641 30.3
F 6.6 0.369 17.4
G 19.8 0.245 11.6
14. VALEURS ATTENDUES
Des sujets apparemment sains ont montré les valeurs suivantes: (97.5 % percentile)Spécimen n Unité Moyenne Gamme
Sérum 99 ng/mL 88.6 30 200
Plasma sans plaquettes 35 ng/mL 3.7 1.8 7.5
Plaquettes 35 ng/109 Plaquettes 490 217 861
24 h Urine 49 µg/j 83.1 200
Il est recommandé que chaque laboratoire établisse ses propres valeurs normales.15. LIMITES DE LA PROCEDURE
La collecte et stockage des échantillons a une influence significative sur les résultats du test. Voir le
paragraphe COLLECTE ET STOCKAGE DES ECHANTILLONS pour plus de détails. Pour les réactivités croisées, voir PERFORMANCE. résultats. -20%) par rapport aux valeurs -dessous: